敦煌三味蛇床方对肾虚不孕模型大鼠FSH、LH及E2的影响.doc

敦煌三味蛇床方对肾虚不孕模型大鼠FSH、LH及E2的影响【摘要】目的：探讨敦煌三味蛇床方对排卵障碍性不孕症卵巢、子宫形态和内分泌功能的影响。方法：采用雄激素致不孕大鼠模型(ASR模型)，观察敦煌三味蛇床方对不孕模型大鼠卵巢、子宫形态结构的影响以及血清中FSH(促排卵素)、LH(黄体生成素)、E2(雌二醇)水平的影响。结果：敦煌三味蛇床方大、中剂量组模型大鼠卵巢色泽鲜红，卵泡数目增多，卵泡明显增大，表面见较多黄体，子宫外观粗大发紫;子宫内膜较厚，血管较丰富，间质疏松;同时，敦煌三味蛇床方大、中剂量组及阳性组大鼠血中FSH、LH、E2的水平高于模型组(P0.01)。结论：敦煌三味蛇床方可改善模型大鼠卵巢、子宫形态，增强垂体的内分泌功能，促进促性腺激素的合成和释放，从而促进卵泡的发育和卵巢的排卵。 【关键词】 敦煌三味蛇床方 排卵障碍性不孕症 FSH、LH、E2Abstract Objective:To expLore the Effects of Dunhuang Cnidium shamisen on anovuLatory infertiLity ovarian,uterine morphoLogy and endocrine function.Method:The use of androgen-steriLized rat modeL (ASR modeL),Observation of Dunhuang on the shamisen Cnidium rat ovarian infertiLity,uterine shape and structure of serum FSH(LRH),LH (Luteinizing hormone),E2(estradioL)LeveLs.ResuLts:Dunhuang shamisen side Cnidium Large,medium-dose group rat ovarian coLor red,foLLicLes increase in the number of foLLicLes increases markedLy,see more yeLLow body surface,the appearance of Large uterine purpLe;Thick endometrium,bLood vesseLs than the rich,Loose stroma;At the same time,Dunhuang Cnidium side shamisen Large,medium-dose group and positive group of bLood FSH,LH,E2 LeveLs higher than the modeL group(P0.01).ConcLusion:Cnidium shamisen Dunhuang rat modeL may improve the ovarian,uterine shape, and enhance endocrine pituitary function,and promote the synthesis and reLease of gonadotropin,thus contributing to ovarian foLLicLe deveLopment and ovuLation.Keywords Cnidium shamisen Dunhuang AnovuLatory infertiLity FSH LH E2敦煌三味蛇床方源于敦煌遗书S.44331，临床表明该方可促使排卵型月经恢复正常，在治疗排卵障碍性不孕方面取得了一定的疗效2。为进一步揭示本方的作用机理，本研究观察了该方对肾虚不孕模型大鼠血清中FSH(促排卵素)、LH(黄体生成素)、E2(雌二醇)水平的影响。资料与方法药品与试剂：敦煌三味蛇床方由蛇床子、五味子、远志按一定比例混合，常规制备为煎液，浓缩至每毫升含生药1g，消毒灭菌保存备用。中药材购自甘肃中医学院附属医院，经鉴定符合药典规定。人血清促卵泡生成素(FSH)放射免疫药盒、人血清雌二醇(E2)购自北京华英生物技术研究所;促黄体生成素(LH)放射免疫药盒，购自北京北免东雅生物技术研究所。克罗米芬、丙酸睾丸酮注射液，丙酸睾丸酮注射液25mg/ml。动物及造模：SD大鼠80只，由甘肃中医学院科研实验中心提供，体重180220g。检验报告编号：兰大动检(06)第004号，动物许可证号：SCXK(甘)20040006，参照文献方法3，4，制作无排卵大鼠模型(即雄激素致不孕大鼠模型ASR)取第9日龄雌性SD大鼠70只(实验组)于颈背部皮下注射丙酸睾丸酮1.25mg/只(0.05ml/只)，第22日龄断奶，利用自然光照，室温维持在20左右，同样条件饲养，由专人喂养。第70日龄大鼠体重约150g左右阴道开口，连续阴道涂片2个性周期(1个性周期5天)，阴道上皮无性周期变化提示无排卵大鼠模型制作成功。同样取第9日龄雌性SD大鼠10只(正常组)于颈背部皮下注射等量中性茶油，至第70日龄阴道开口，连续阴道涂片2个性周期观察其阴道上皮细胞有无性周期变化。经涂片观察实验组70只参与造模大鼠，其中有54只无性周期变化保留备用，余16只有性周期变化，剔除。正常组10只注射中性茶油大鼠，全部具有有规律的性周期变化，保留备用。分组及给药：随机将造模成功的52只大鼠分为模型组(10只)，敦煌三味蛇床方小、中、大剂量组治疗组(各11只)，克罗米芬组阳性对照组(11只)，同时设正常组(10只)，从第80天开始分别按临床用药以60kg人为标准，按照体表面积剂量换算法计算大鼠给药剂量。模型组和正常组给予12ml/(kg.日)蒸馏水灌胃;敦煌三味蛇床方小、中、大剂量组分别按煎液6ml/(kg.日)、12ml/(kg.日)、24ml/(kg.日)灌胃;克罗米芬组给予4.5mg/(kg.日)灌胃，每天灌胃1次，均连续灌胃28天，4周后检测指标。敦煌三味蛇床方对不孕模型大鼠卵巢、子宫形态结构的影响：各组连续灌胃28天后，断头处死，剖腹取出双侧卵巢和子宫，观察卵巢、子宫形态，将卵巢、子宫剥离干净后放入福尔马林液中固定，各级酒精脱水，石蜡包埋、切片，切片厚约4μm，卵巢苏木素伊红常规染色，子宫HE常规染色，光镜下观察并行电脑摄像。敦煌三味蛇床方对不孕模型大鼠血清FSH、LH、E2的影响：各组连续灌胃28天后，颈静脉采血，离心后置于4冰箱中保存，按试剂盒说明测定FSH、LH、和雌二醇E2的含量。统计学方法：将所测结果按试剂盒说明书计算，采用SPSS13.0软件统计，用t检验。计量资料以均数标准差(XS)表示。结 果敦煌三味蛇床方对不孕模型大鼠卵巢、子宫形态结构的影响：模型组卵巢苍白，表面见卵泡但卵泡数目少，卵泡较小，无黄体，子宫较小，色泽欠红润，子宫内膜厚度均较薄，血管稀少，间质致密;正常组和敦煌三味蛇床方大、中剂量组以及阳性组大鼠卵巢色泽鲜红，卵泡数目明显多于模型组，卵泡明显增大，表面见较多黄体，子宫外观粗大发紫;正常组和敦煌三味蛇床方大、中剂量组子宫内膜较厚，血管较丰富，间质疏松，但阳性组子宫内膜较薄，腺体发育差，腺腔狭小，间质致密，间质细胞呈梭形，间质血管比较少见，存在有子宫内膜发育迟缓的现象。敦煌三味蛇床方对不孕模型大鼠血清FSH、LH、E2的影响：结果见表1。模型组大鼠血中FSH、LH、E2的水平明显低于正常组(P0.05);敦煌三味蛇床方大、中剂量组及阳性组大鼠血中FSH、LH、E2的水平高于模型组(P0.01)，敦煌三味蛇床方大、中剂量与正常组比较无差异。提示敦煌三味蛇床方能增强垂体的内分泌功能，促进促性腺激素的合成和释放提高垂体促性腺激素水平及雌二醇E2以促进卵泡的发育和卵巢的排卵作用。讨 论排卵是一个相当复杂的生理过程，是形态学、生理学与生物化学综合变化的结果。排卵的机理包括卵巢外机理和卵巢内机理。丘脑下部某些神经细胞具有内分泌功能，产生GnRH的为十肽类激素，具有高度的生物活性，其主要生理作用是调节垂体两种激素即卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)的合成和释放。垂体分泌FSH、LH控制卵泡发育、雌孕激素分泌、排卵及黄体形成和退化等生理过程。卵泡的发育需FSH的启动，当FSH达一定水平，刺激颗粒细胞增殖，并激活芳香化酶。比主要作用于卵泡内膜细胞，使胆固醇转化为雄烯二酮(androstnedeinoe，A)和睾酮(testostersone，T)，分泌到血液，或经基底膜到颗粒细胞，在芳香化酶作用下转化为E2。E2与颗粒细胞上的受体结合，使颗粒细胞再增殖，卵泡长大，随着FSH、E2的增多，卵泡逐渐发育成熟，当卵泡成熟达到顶点时导致LH峰，触发排卵。以往研究表明，中医肾虚不孕的机理与垂体-下丘脑-卵巢性腺轴功能失调有关，而FSH、LH及E2分泌不足在影响卵泡的发育和排卵中有重要意义。中医认为肾藏精，为天癸之源，司生殖，而心为君主之官，主宰肾精的发育和排出，亦有主宰子宫的作用，在生殖生理中具有重要作用，精卵藏之于肾，所以肾为生殖之本。现代医学认为，卵子生成于卵巢，卵泡卵子是卵巢的主要组成部分，卵泡的发育，卵子的成熟，排卵的顺利，均有赖于雌激素水平不断提高5，所以雌激素与卵泡、卵子的关系类乎于肾阳、癸水、与精的密切关系，即中医学的肾-天癸-冲任-胞宫与现代医学下丘脑-垂体-卵巢轴有一定的相似性。子宫与肾，同居下焦，心脑居上焦最高之处，肾精的泌藏，胞脉胞络的疏畅，表面看来，似乎是子宫肾脏的作用，但实际上是肾精氤蕴之气触发心脑，心脑下达排泄信息后，子宫才能行其藏或泄的作用。月经排出，子宫行泻，先由心脑，通过肾，再由肾下达子宫冲任，故叶天士谓精之藏，其本在肾，而精之主宰则在心。因此，肾虚精亏，心肾不交应为排卵障碍性不孕的关键病机，补肾益精，宁心安神则为治疗排卵障碍性不孕的基本思路与方法。敦煌蛇床三味方源于敦煌遗书S.4433，该方由蛇床子、五味子、远志三味药物组成，方中用蛇床子，苦温入肾，故以其为君药，温肾助阳，以五味子补肾固精，同时又能宁心安神，助蛇床子补肾益精，为方中臣药;佐以远志，交通心肾，安神定志。全方共奏补肾益精，宁心安神之效。全方药少力专，组方严谨。研究表明方中蛇床子可使子宫及卵巢重量增加6，蛇床子提取物中本身含有睾丸酮和雌二醇，有类似于性激素样的作用7。本研究表明，经敦煌三味蛇床方干预后的模型大鼠卵巢色泽鲜红，卵泡数目增多，卵泡明显增大，表面见较多黄体，子宫外观粗大发紫;子宫内膜也较厚，血管较丰富，间质疏松。敦煌三味蛇床方能提高FSH、LH及E2水平，增强垂体的内分泌功能，促进促性腺激素的合成和释放，提高垂体促性腺激素水平，从而促进卵泡的发育和卵巢的排卵。本研究从卵巢子宫形态和内分泌功能方面初步揭示了敦煌三味蛇床方促排卵的科学依据，相关机理我们将进一步探讨。【参考文献】 1 丛春雨.敦煌中医药精粹发微M.北京:中医古籍出版社,2000:281.2 丛春雨.中医妇科临床经验选M.北京:中国医药科技出版社,1994:105.3 魏美娟,俞瑾.补肾中药对雄激素致不孕大鼠肾上腺皮质形态学观察J.中国中西医结合杂志,1994,14(12):736-738.4 张月萍,俞瑾,归绥琪.雄激素致