硫酸氢氯吡格雷残留溶媒测定及方法学验证.doc

硫酸氢氯吡格雷残留测定及方法学验证报告实施人：审核人：批准人：目录1 . 验证概述2 . 验证目的3 . 验证范围4 . 验证项目及可接受标准5 . 实施验证的人员6 . 所用的仪器及设备7 . 验证内容8 . 验证结论1 . 验证概述根据中国药典2005版对原料药残留溶媒测定及验证的要求，我们对硫酸氢氯吡格雷工艺中使用到的甲醇、丙酮. 二氯甲烷，甲苯4种溶媒进行残留测定分析方法验证，由于硫酸氢氯吡格雷热稳定性较差，所以我们采用顶空方法分析验证，所测溶媒二氯甲烷，甲苯与水不能互溶，我们溶剂选择采用50%二甲基甲酰胺（DMF）作为稀释溶剂（简称溶剂A），并根据验证结果，制定了硫酸氢氯吡格雷残留溶媒测定的内控标准。2 . 验证目的 为了建立硫酸氢氯吡格雷的残留溶媒测定的内控标准和测定方法。3 . 验证范围 适合硫酸氢氯吡格雷的残留溶媒的测定。4 . 验证项目及可接受标准验证项目可接受标准 专属性 （分离度R、理论塔板数n）R3.0、n25000定量限最低检测限测定（信噪比）信噪比10.0甲醇定量限检测浓度3.0ug/ml丙酮定量限检测浓度1.5ug/ml二氯甲烷定量限检测浓度1.0ug/ml甲苯定量限检测浓度0.5ug/ml信噪比3.0甲醇最低检测浓度1.0ug/ml丙酮最低检测浓度0.5ug/ml二氯甲烷最低检测浓度0.3ug/ml甲苯最低检测浓度0.15ug/ml线性关系（相关系数r）r0.9995加样回收率90.0%110.0%加样平均回收率（相对标准偏差RSD）RSD5.0%精密度（相对标准偏差RSD）RSD10.0%5 . 实施验证的人员：乔志毅6 . 所用的仪器及设备仪器自编号校验日期有效期安捷伦-6890NCA0510032009.03.052010.03.047 .验证内容7.1 测定仪器及检测条件仪器: 安捷伦-6890N气相色色谱仪 ，7694E顶空进样器，N2000工作站测定条件 柱:毛细管柱 DB-624 S/N: USA109036H规格: 30M0.53mm3.0m载气:N2 流速4.0ml/min , 柱温: 初始温度50： 初温时间2min：升温速率10 /min 终止温度160：.终温保持时间2min：进样器温度:200 分流比:10:1 进样体积1ml7694E顶空进样器 顶空瓶加热温度80，进样环140，传输管线150，顶空瓶加热时间20min，进样时间1.0min，瓶压14psi. 顶空瓶 10ml检测器 FID温度：250 氢气：40ml/min 空气：400ml/min 尾吹：20ml/minRang 0 ATTEN 07.2. 专属性试验 精密吸取甲醇127l（相当于100mg），丙酮127l（相当于100mg），二氯甲烷75l（相当于100mg）,甲苯57ul（相当于50mg）分别置4个事先装有少量溶剂A的100ml容量瓶中，用溶剂A稀释到刻度，配置成4个相应的溶剂A溶液，分别吸取各溶液5ml到4个50ml的容量瓶中，用溶剂A稀释到刻度，配置成含各溶剂浓度均为100g/ml的4种溶液A（甲醇），B（丙酮）,C（二氯甲烷）,D(甲苯).取4个溶液及溶剂A溶液在信噪比3条件下顶空进样分析，出样顺序：甲醇A（RT=2.498），丙酮B（RT=3.473），二氯甲烷C（RT=3.882），甲苯D(RT=8.057)取上述A-D.4溶液按1：1混合进样。结果：甲醇.丙酮之间分离度13.5，丙酮.二氯甲烷之间分离度4.6.二氯甲烷.甲苯之间分离度40，甲苯.DMF之间分离度10.9.甲醇N=43362，丙酮N=35593，二氯甲烷N=41221，甲苯N=105679.符合可接受标准。7.3定量限最低检测限测定（1）取专属性项下A甲醇溶液5.0ml到100ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于10的条件下测定一次，再吸取A甲醇溶液2.0ml到100ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于10的条件下，测得定量限浓度为2.0ug/ml,在符合可接受标准。再吸取A甲醇溶液0.7ml到100ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于3的条件下，测得最低检测浓度为0.7ug/ml，符合可接受标准。（2）取专属性项下B丙酮溶液1.5ml到100ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于10的条件下测定一次，再吸取B丙酮溶液0.75ml到100ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于10的条件下，测得定量限浓度为0.75ug/ml：在符合可接受标准。再吸取B丙酮溶液250ul到100ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于3的条件下，测得最低检测浓度为0.25ug/ml，符合可接受标准。(3)取专属性项下C二氯甲烷溶液1.5ml到100ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于10的条件下测定一次，再吸取C二氯甲烷溶液300ul到100ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于10的条件下测定一次，再吸取C二氯甲烷溶液100ul到100ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于10的条件下测定一次，测得定测得定量限浓度为0.1ug/ml：在符合可接受标准。再吸取C二氯甲烷溶液30ul到100ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于3的条件下，测得最低检测浓度为0.03ug/ml，符合可接受标准。 (4)取专属性项下D甲苯溶液1.0ml到100ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，配成0.5ug/ml甲苯溶液,在信噪比大于10的条件下测定一次，再吸取0.5ug/ml甲苯溶液2.5ml到50ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于10的条件下，测得定量限浓度为0.025ug/ml：在符合可接受标准。再吸取0.5ug/ml甲苯溶液0.8ml到50ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，在信噪比大于3的条件下，测得最低检测浓度为0.008ug/ml，符合可接受标准。结果见表一 。表一：甲醇、丙酮，二氯甲烷，甲苯，定量限最低检测浓度溶剂定量限 ug/ml检测限 ug/ml甲醇2.00.75丙酮0.750.25二氯甲烷0.10.03甲苯0.0250.0087.4. 线性关系测定7.4.1. 标准溶液配置精密吸取甲醇380l（相当于300mg），丙酮380l（相当于300mg）,二氯甲烷45ul（相当于60mg）甲苯34.5ul（相当于30mg）同一个事先装有溶剂A的200ml容量瓶中，用溶剂A稀释至刻度，配成含甲醇1500g/ml，丙酮1500g/ml，二氯甲烷300ug/ml,甲苯150ug/ml,的标准贮备液，分别精密吸取标准储备液：1ml，2ml, 5ml，10ml，15ml，20ml到6个100ml的容量瓶中，用溶剂A稀释到刻度，配成1#6#的6个标准溶液。取上述六个标准溶液分别进样，线性关系见表二，三，四，五。 表二： 甲醇的线性关系浓度（g/ml）峰面积回归方程相关系数1519305Y=1296.8x-31480.999930347767592385150191550225285581300388470表三：丙酮的线性关系浓度（g/ml）峰面积回归方程相关系数1584105Y=6205x-64650.99997301838657545612215092983222513814543001858852表四：二氯甲烷的线性关系浓度（g/ml）峰面积回归方程相关系数317276Y=7259x-52330.999764350615967303021063145324571 60430083表五：甲苯的线性关系浓度（g/ml）峰面积回归方程相关系数1.554400Y=42661x-87540.99993.01282937.53000841563094322.5955441301269845结果：乙醇，丙酮在浓度15g/ml300g/ml之间，二氯甲烷在浓度3.0g/ml60g/ml之间,甲苯在浓度1.5g/ml30g/ml之间性关系良好，相关系数均大于0.9995，符合可接受标准。 7.5. 硫酸氢氯吡格雷加样回收率实验精密称取供试品(20090501)4份，每份500mg，分别置4个10ml容量瓶中，其中一份精密加入溶剂A溶液溶解，作为空白检测溶液。其余的每份分别加入线性项下的2#，4#，6#标准溶液溶解。空白样进样2次，空白检测溶液中测出甲醇A=8450,丙酮A=122094,未测出二氯甲烷. 甲苯，再将其余3份样品分别测定(n=3)，并用各自相对应的线性方程计算回收率。结果：回收率均在90.0110.0之间，平均回收率RSD5.0%符合可接受标准，结果见表六.七. 八.九.。表六： 甲醇加样回收率次数加入浓度（g/ml）峰面积测定浓度（g/ml）回收率%平均回收率%RSD%13041399-845027.8492.895.93.323043872-845029.7499.133041630-845028.0193.44150193598-8450145.0996.75150190261-8450142.6395.16150184780-8450138.4092.37300374180-8450284.4594.88300401742-8450305.71101.99300382797-8450291.1097.0表七： 丙酮加样回收率次数加入浓度（g/ml）峰面积测定浓度（g/ml）回收率%平均回收率%RSD%130297277-12209429.2797.699.33.3230311439-12209431.56105.2330300239-12209429.7599.241501026673-122094146.8297.951501022955-122094146.2297.561501008759-122094143.9496.073001902250-122094287.9396.083002050435-122094311.81103.993001977075-122094300.00100.0表八：二氯甲烷加样回收率次数加入浓度（g/ml）峰面积测定浓度（g/ml）回收率%平均回收率%RSD%16.0408496.35105.8103.24.826.0419166.50108.336.0419726.50108.343020342428.7495.853021098529.7899.363021823630.78102.676041441557.8196.386045486363.38105.696046065064.18107.0表九：甲苯加样回收率次数加入浓度（g/ml）峰面积测定浓度（g/ml）回收率%平均回收率%RSD%13.01179952.9799.0101.93.423.01227213.08102.733.01207643.04101.241561693014.6797.851563349815.05100.361564518515.33102.2730125899029.7299.1830137084232.34107.8930135993232.08106.97.6. 硫酸氢氯吡格雷精密度测定精密称取供试品（批号20090501）6份，每份500mg，置10ml容量瓶中用溶剂A稀释到刻度，标准溶液配置，精密吸取标准储备液10ml到100ml容量瓶的，用溶剂A稀释到刻度，配成含乙醇150ug/ml，丙酮150ug/ml, 二氯甲烷30ug/ml,甲苯15ug/ml标准溶液，标准溶液进6次，标准溶液峰面积误差10%，供试品进2次，按外标法计算供试品中残留溶剂含量（ppm）。6次测定结果见下表十，十一，精密度相对标准偏差RSD10.0% ，符合可接受标准。表十：硫酸氢氯吡格雷精密度(甲醇)供试品浓度（g/ml）标准峰面积甲醇平均RSD（%）样品峰面积A均含量（ppm）平均（ppm）RSD（%）0.0501221956151.185851311361.80.05030588631350.05003088841360.05061090661370.049882 89121370.0500219004138表十一：硫酸氢氯吡格雷精密度(丙酮)供试品浓度（g/ml）标准峰面积丙酮平均RSD（%）样品峰面积A均含量（ppm）平均（ppm）RSD（%）0.0501229629641.31250293893951.40.0503051273963940.0500301296644040.0506101266913900.049882 1278793990.0500211264733947.7. 硫酸氢氯吡格雷残留测定供试品配制：取供试品(批号：20090501，20090502，20090503), 3批样每个批号精密称取500mg到10ml容量瓶中，用溶剂A溶解并稀释到刻度，分别吸取上述3个溶液各2ml到10ml顶空瓶中加盖密封（每个批号两次）。标准溶液配置，精密吸取标准储备液10ml到100ml容量瓶的，用溶剂A稀释到刻度，乙醇150ug/ml，丙酮150ug/ml, 二氯甲烷30ug/ml,甲苯15ug/ml标准溶液，标准溶液进5次，标准溶液峰面积误差10%，标准溶液甲醇A=197322 RSD=0.85%,丙酮A=935861, RSD=1.7%.二氯甲烷A=203712, RSD=2.3%.甲苯A=621661, RSD=2.4%供试品进2次，按外标法计算供试品中残留溶剂含量（ppm）。结果见表十二。表十二：硫酸氢氯吡格雷中甲醇、丙酮、二氯甲烷,甲苯的残留量批号供试品浓度（g