洗衣液对微核的影响.doc

洗衣液对大蒜根尖细胞微核形成的影响 摘要 为研究洗衣液的遗传毒性 本实验利用大蒜根尖的微核技术 以不同浓度的洗衣液为诱变 剂 测定大蒜根尖细胞的微核率 实验结果 洗衣液浓度越高 大豆根尖微核率越大 从而证明 洗衣液对大蒜根尖具有明显的诱变作用 且随剂量的增加诱变效果增强 关键词 洗衣液 大蒜根尖 微核 EFFECT OF WASHING LIQUID ON THE MICRONUCLEUS FORMATION TO ROOT TIP CELLS OF GARLIC Abstract In order to investigate the genetic toxicity of laundry detergent this experiment using micro nuclear technology of garlic root tip with different concentrations of laundry detergent as mutagen to measure the micronucleus rate of garlic root tip cells The result is that the higher the concentration of laundry detergent the greater the soybean micronucleus rate of root It proves that laundry detergent has obvious mutagenic effect in garlic root tip which increases with the increase of the dose mutagenic effect Keywords washing liquid tip cells of garlic micronucleus 引言引言 洗衣液在日常生活中被广泛使用并被排放到环境而产生影响 有学者以蚕豆根尖细胞 微核率为指标 对洗涤剂的遗传安全性进行评价 从而证明洗涤剂对蚕豆根尖细胞具有明 显的诱变作用 1 2 细胞分裂过程中微核的形成是细胞受遗传毒物作用后的一种遗传学 终点 3 4 大蒜根尖微核监测技术已广泛应用于环境监测的各个领域 本实验采用蚕豆 根尖微核技术来研究洗衣液的遗传毒性 为进一步研究洗衣液对动植物 人类及环境的遗 传毒性和潜在危害提供证据 1 材料与方法材料与方法 1 11 1 材料材料 由华南师范大学生命科学学院实验室提供的蚕豆 1 21 2 方法方法 1 2 1 大蒜萌发 将实验用的适量的大蒜放在铺有湿纱布的瓷盘中 在黑暗条件下 25 催芽 36 48h 等 大部分的根长到 1 2cm 时 即可用于检测 1 2 2 洗衣液处理根尖 配置两种不同浓度的洗衣液溶液 洗衣液 蒸馏水 1 9 1 29 以蒸馏为水对照 每一处理选取约 5 棵生长良好 根长一致的大蒜 放入盛有待测物溶液的培养皿中 使被 测液浸没根尖 处理 12 18h 1 2 3 根尖恢复培养 处理后的种子用自来水浸洗 3 次 每次 2 3min 然后再放入铺有湿纱布的瓷盘中 25 培养 24h 1 2 4 根尖细胞固定 将恢复后的种子 从根尖顶端切下 1cm 长的幼根 用卡诺固定液固定 24 小时 固定 后的根如不及时制片 可换入 70 的乙醇溶液中置 4 冰箱中保存备用 1 2 5 酸解 用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次 每次 5 分钟 吸净蒸馏水 加入 6mol L 盐酸将幼根 浸没 室温下酸解 10 分钟 幼根软化即可 1 2 6 染色 吸去盐酸 用蒸馏水浸没幼根三次 每次 1 2 分钟 最后浸于水中 制片前放置载玻 片上 截下 1 2mm 左右长的根尖 滴一滴醋酸洋红染液 染色 5 8 分钟 加盖玻片 压片观察 1 31 3 计算计算 1 3 1 计算微核千分率 在低倍镜下找到分生区细胞分散均匀 分裂象较多的部位 再转到高倍镜下观察 每一处 理观察3条根尖 求平均值 即为该处理的微核千分率 微核千分率 FMN 微核数 观察细胞数 1000 1 3 2 统计学分析 用对照组和各浓度洗衣液处理的数据进行卡平方测验 从差异显著性判断洗衣液的诱 变性 1 3 3 计算诱变效应指数 诱变效应指数 样品实测微核千分率 对照实测微核千分率 依据此式也可计算洗衣液的诱变效应指数 诱变效应指数在 0 1 5 区间时 基本没有效果 1 5 2 5 区间 效果不明显 2 5 3 5 区间 效果一般般 3 5 以上为效果明显 2 2 结果与分析结果与分析 2 12 1 洗衣液对大蒜根尖微核千分率的影响洗衣液对大蒜根尖微核千分率的影响 分析结果见表 1 由表 1 可得 不同浓度洗衣液处理的大蒜根尖细胞微核千分率 为稀释 1 9 稀释 1 29 蒸馏水 说明不同浓度的洗衣液均能诱发大蒜根尖细胞产生微 核 并随着洗衣液浓度的增加 微核千分率增大 表表 1 1 不同浓度洗衣液处理下的大蒜根尖细胞微核千分率 不同浓度洗衣液处理下的大蒜根尖细胞微核千分率 处理细胞总数含微核的细胞数微核千分率 蒸馏水 100000 00 1 29 洗衣液 128646 88 1 09 洗衣液 2431769 96 处理图片 蒸馏水 1 29 洗衣液 1 09 洗衣液 2 22 2 卡平方测验卡平方测验 由表 2 可见 不同浓度的实验组的微核千分率与对照组相比较 差异极显著 说 明洗衣液的确能诱发大蒜根尖产生细胞产生微核 具有一定的遗传毒性 表表 2 2 卡平方测验结果 卡平方测验结果 处理 2 P 值差异显著性 1 29 洗衣液 38 68 0 01 极显著 1 09 洗衣液 65 30 0 01 极显著 2 32 3 不同浓度洗衣液的诱变效应指数不同浓度洗衣液的诱变效应指数 诱变效应指数 样品实测微核千分率 对照实测微核千分率 由于本实验中对照组的实测微 核千分率为 0 00 则诱变效应指数接近于无穷大 虽然有误差存在 但我们仍可认为洗 衣液对大蒜根尖细胞的诱变效果明显 3 3 讨论讨论 由于实验条件的限制 本实验无法设置多个浓度 因此实验结果不够严密 且不同处 理组进行计数的同学不同 人工数数难免会有遗漏和多数的 因此本实验存在着较大的实 验误差 但是根据现有的实验数据 仍能证明不同浓度的洗衣液都能诱发大蒜根尖细胞产 生微核 且随着浓度的增加 其诱变效果愈加明显 其原因可能是由于洗衣液中存在着某 些化学诱变因子 促使染色体断裂的加剧 或阻碍染色体碎片的愈合 在细胞进入下一次有 丝分裂或减数分裂中就会出现不能恢复愈合的染色体片段 这些片段由于缺少了着丝点 不 能够移到细胞两极 而停留在细胞质中 当新的细胞核形成时 就在细胞质中形成微核 但是 具体是洗衣液中什么化学成分在起作用 其作用的具体机制是怎么样的 还有待于进一步 的研究的探讨 实验结果表明洗衣液对大蒜根尖细胞具有明显的致突变效应 具有一定的遗传毒性 据研究 致突变性与致癌性高度相关 致突变物中可能存在致癌危险性 而洗衣液在我们的 日常生活中被广泛使用并且排放到环境中起作用 这也提示我们该类洗衣液的使用肯能危 及到人们的健康 应加强化妆品生产特别是具诱变性化妆品生产的管理 严格控制其成分 的安全性 同时应研制开发其无毒替代品 诚然 植物细胞监测系统的结果外推于人时 由 于植物细胞与人类细胞在结构和生化代谢各方面差距甚远 诱变剂进入靶分子的方式及作 用机理很不相同 因此实验研究还有待于结合相应的流行病学调查 但是 由于大蒜根尖 微核技术做为遗传毒物的预警系统来初筛潜在致癌危险的物质具有经济 快速 准确的特 点 如能配合其它测试系统 这对洗衣液安全性的全面保证无疑是一种有用的手段 因此 通过本实验我们认为 部分洗衣液的确存在诱变性 其毒理学效应尤其是其慢 性毒理学效应应引起人们的重视 致谢 作者衷心感谢导师何风华老师的悉心指导 参考文献参考文献 1 佟凤芹 胡春霞 李荀 洗涤剂对蚕豆根尖细胞诱变性研究 J 辽宁师专学报 2000 2 4 103 105 2 王虹 邓丽芳 洗手液对蚕豆根尖遗传毒性研究 J 西安文理学院学报 自然科学版 2008 11 1 61 64 3 王爽 诸葛坚 余应年 微核及微核试验在遗传毒理学中的作用 J 癌变 畸变 突 变 2000 12 4 253 255 4 藏宇 薛开先 蚕豆根尖微核试验的应用与发展 J 癌变 畸变 突变 1999 11 3 158 160 5 蒋荣荣 金焰 洗衣液对蚕豆根尖细胞遗传毒性研究 J 仪器仪表与分析检测 2012 3 39 40 6 沙亦凝 周耀红等 蚕豆根尖微核技术在环境检测中的应用 J 生物学教学 2005 30 4 74 75 7 王新生 张鸿生 紫露草微核技术检测化妆品的致变性 1992 第 9 卷第一期 15 16 8 唐庆国 陈晓春 蚕豆根尖微核技术检测化妆品的致突变性 环境与健康杂志 1997 第 14 卷第 5 期 199 201 9 施金莲 马桂