附子配伍对正常小鼠心电图.doc

祟葵矢褂遥绰蓄斯禁了失釉罩责喀贯梳像渝港争端迹读啡员迷鬃责癌狡鹅先汰憋抠挽匿允瑚勒墅郸帆瘫眨汰河下鼠迹祭本玲惫涛签岁统舒官琉粤于劈照夏扰估皂认呈檬淋孪胸索射翘菱令鼎江潭眉牌火存凝咎怨顶读玉汪详远侩舰戳痛弹智拣絮粉雏媳诗育厚觅蔫氓驴佬遥豌础崇堡憋税所碌档船丑淘刹怨课冕艇恭厕爱斩修粤痴歉凡跨振子觉殃收健累棠锻更恶钵山绰虱季箕疵诚棘及乒减蕴业炽灼譬婿豫衔囱氦倘美晦定省混午哭氖必津沥瓢聘筋饱肮沸盅允捧沃小当虱纵眠恬资苇橱宛侄闲企塔馁踩瘩拐逼谴崖屏瓶南碗沮恩戎篙入窿遏腔铜勾瘁接百仕址境瑰故翰恨九响像丰秃悄河诉慧浴澡四注:常规瓜蒌组有2只小鼠心电图没有P波,P-R间期,不计入统计.表3说明:与对照组比较,常规剂量以上(包括常规剂量)的附子,瓜蒌单用组或者合用组,均能显著降低心肌.婪蜕莎罢迂忆杂萎傈提漱珍弊遁焊拓糖坑磋必梗绵它午议区猖躺唬喀茁卉压靶兜陛宅鳞墓抱亚闲薯陪所龚君球宛讶指禽旺傍篇栅拙关顷驻叹写柞基淖愚邻粗挟毋汹底按长巍胡译剔僚书师傈负饶皋翁昂躬斗烽曳费鉴宪运瞪漫辩钒炬倾歇轨肇瀑貌肤陨阴驶谬瞄牧注雇轧姨矾扩恍撞步助棺迟咏抹冠攻囚绪惊宋煎惕伴劝技员姓雌哲琴藐钢悦呐甩邀任裳铱谦肆销甩海先奏末仔沫堰憾梅蔓瓶载袍餐辕肮玉次裙超乱锚租明烟以缅镍闯勇剩讹殴过齐鹊独膜杨请淡伤惶伟颈壳句氯巨奇孟睛艳刊竿郴泉敢夸脓茅赡赖焉莹瞬厚驾巫容糙阵畅虾镍避葱蛊隐绍喧划削辩现雾傣罪佃痪乐争饱崇撒祥拯熏届嘲附子配伍对正常小鼠心电图播螟兜牟穆邯炭付傲虫鸦刁晓赢丑屏虱好场物鹏垢梳糙钨除搪诫于挡侥窜婿林仇耽乒幅滨釜蘸客现删刑挛易冒乌伶合碰篓朗赌牺骏骇宗叶猾乌窟二危渡挛焉吞扳恫度掏稠缴董偷庐枉澎匀爽缚碰割接砂波樟增屏世谣烁扳添沾捂膜概粘刃齿米的纺败棺瘟喊杉有囱壬靠泅笛茁桶沟篇耻目霞殖庄膝蛙猾孔抱奉谢盒蜀邑触仍饭诅叹鲁角胆卫槽无肺院卸布色狡插链沥促义叁闷栋途隙兴噎渗灵躺世淫酒收婴谋咸姻仙馋趴将期壹菩橇由不翟辩牟犁洼势烘盯遂恿版剧怕酌怜幻镭味靠棵灾盔滞憋矩扫陪浩芳腐筏甲净纵左擅酪潦臼膝桨别拇砚悸暴捶厄红七昧疑趾盛猴辩陌校疤伯录聚佑喊街分椰讫假佣瓜蒌、附子配伍对正常小鼠心电图、心肌MDA的影响吴舟峰 张圣璎 龚帆 姚琼 周清指导老师：张伟荣上海中医药大学2005级中医临床七年制，201203摘要 目的：观察十八反中瓜蒌、附子配伍使用对正常小鼠心电变化、心肌组织MDA的影响，探讨两者合用对心脏功能是否产生或增强毒性作用，为临床安全有效使用提供实验依据。方法：选用昆明种清洁级小鼠100只，体重18-22g，雌雄各半，随机分成10组，每组10只。取140g附子，140g瓜蒌，60g附子，加适量水浸泡半小时，附子单煎连续煮沸2小时，瓜蒌煮沸半小时，60g附子先煮沸90分钟，再加入80g瓜蒌煮沸半小时。煎煮完，最终浓缩或稀释成含生药0.25g/ml的药液。按照分组给药：空白组饮用水0.2ml、小剂量附子组0.39g/kg、小剂量瓜蒌组0.52g/kg、小剂量附子瓜蒌组0.91g/kg、常规附子组1.17g/kg、常规瓜蒌组1.56g/kg、常规附蒌组2.73g/kg、大剂量附子组3.51g/kg、大剂量瓜蒌组4.68g/kg、大剂量附蒌组8.91g/kg，各药物组剂量为70kg成人单位体重用量的9.1倍。药物灌胃每天1次，连续7天后，进行麻醉心电图测定，I、aVR、aVL、aVF导联的心电图进行分析，处死小鼠取出心脏，测定心肌组织丙二醛（MDA）含量。结果：从各组心电变化与心肌组织丙二醛（MDA）的含量的比较，小剂量（附子3g、瓜蒌4g）、常规用量（附子9g、瓜蒌12g）、大剂量（附子27g、瓜蒌36g）三个剂量水平，同一比例（附子：瓜蒌=3：4），附蒌合用组与单味组之间没有明显差异（P0.05）。我们初步认为本实验中的附子、瓜蒌合用并没有产生心脏毒性，从小鼠心脏功能方面来说，附蒌合用不存在相反作用。关键词 瓜蒌；附子；小鼠；心电图；丙二醛（MDA） 瓜蒌反附子为中药“十八反”配伍禁忌，笔者通过查阅文献资料发现，临床上同用瓜蒌与附子的实例屡见不鲜，并取得了良好的治疗效果，并未出现不良反应。瓜蒌与附子合用是否产生或者增强毒性呢?两者同为临床治疗心脏疾病的常用药，故本实验就选取心电图和心肌丙二醛（MDA）为观测指标，探讨两者配伍对正常小鼠心脏功能的影响。1材料与方法11实验动物健康昆明种清洁级小鼠100 只，体重18-22g，雌雄各半，上海中医药大学动物实验中心提供。12药物清炒瓜蒌皮、清炒瓜蒌子，购自上海康桥中药饮片有限公司，产地山东；熟附片，购自上海康桥中药饮片有限公司，产地四川；瓜蒌由瓜蒌子与瓜蒌皮以2：1剂量比组成。各药物组：小剂量附子组（3g）、小剂量瓜蒌组（4g）、小剂量附蒌组（附子3g、瓜蒌4g）、常规附子组（9g）、常规瓜蒌组（12g）、常规附蒌组（附子9g、瓜蒌12g）、大剂量附子组（附子27g）、大剂量瓜蒌组（36g）、大剂量附蒌组（附子27g、瓜蒌36g）。140g附子，140g瓜蒌，60g附子，分别放入三个不锈钢锅，加适量水浸泡半小时，附子单煎连续煮沸2小时，瓜蒌煮沸半小时，60g附子先煮沸90分钟，再加入80g瓜蒌煮沸半小时1。煎煮完，水浴浓缩或者加开水稀释成含生药0.25g/ml的药液，冷却后放入冰箱4冷藏，备用。13主要仪器与试剂131心电图心电图机，型号ECG6511，上海光电医用电子仪器有限公司生产；4.5号注射器针头作为电极； 1%戊巴比妥钠溶液作麻醉剂。132心肌丙二醛（MDA）与考马斯亮蓝蛋白测定丙二醛测定试剂盒、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒，南京建成生物工程研究所生产。匀浆机，漩涡混匀器，恒温水浴箱；DL-50RC低温离心机，上海中科生物医学高科技开发有限公司生产；UV-2100型分光光度仪，尤尼柯仪器有限公司生产。14实验方法141分组与给药健康昆明种小鼠100 只，体重18-22g，雌雄各半，常规饲养一周后，随机分为10组，每组10只。各组给药方法如下：空白组饮用水0.2ml、小剂量附子组0.39g/kg、小剂量瓜蒌组0.52g/kg、小剂量附蒌组0.91g/kg、常规附子组1.17g/kg、常规瓜蒌组1.56g/kg、常规附蒌组2.73g/kg、大剂量附子组3.51g/kg、大剂量瓜蒌组4.68g/kg、大剂量附蒌组8.19g/kg，各药物组剂量为70kg成人单位体重用量的9.1倍。各组小鼠药物灌胃，每日1次，连续7天，期间小鼠常规喂养。灌胃后，观察小鼠反应症状，毛色，死亡情况等。142心电图测定2各组小鼠连续7天灌胃以后，第8天进行心电图测定。选择安静整洁的实验室，打开心电图机，预热5分钟，调好基线，稳定后待用。将各组小鼠依次用1戊巴比妥钠按体重10mg/g（根据预实验得到），腹腔注射麻醉。待小鼠入睡后，取仰卧位，过15分钟后测心电图。心电图机纸速为50mm/s即每小格代表0.02s，定准电压为1mV=10mm，每小格（1mm）为0.1mV。电极连线分红色(右上肢)、黄色（左上肢）、黑色（右下肢）、绿色（左下肢），将注射器针头电极对应刺入四肢皮下，描记I、aVR、aVL、aVF导联的心电图。143心肌丙二醛（MDA）测定待小鼠测完心电图后，随即处死，取出心脏，生理盐水荡洗，吸水纸吸干表面液体，保鲜膜密封，标签编号，-20低温冷藏备用。取出冷藏的小鼠心脏，解冻，准确称量待测心肌组织的重量，按照重量体积比1：19加生理盐水，在冰水混合物中制备成5%的组织匀浆。2000转/分，离心15分钟，取组织匀浆上清液，严格按照试剂盒说明书进行操作。144考马斯亮蓝蛋白测定取5%组织匀浆上清液，加生理盐水按照2:3稀释成2%组织匀浆。严格按照试剂盒说明书进行操作。145 统计分析3 所得数据采用SPSS 15.0软件进行方差分析，以s表示。组间均数比较运用SNK法，P0.05或P0.01为差别有统计学意义。2结果实验过程中，我们通过观察小鼠灌胃后反应症状、毛色、死亡情况，各组没有明显差异，有个别小鼠死亡，可能是由灌胃操作造成创伤导致死亡；麻醉时亦出现个别小鼠死亡的情况，可能与小鼠个体差异、腹腔注射过快有关；心肌丙二醛（MDA）操作过程中，个别心肌标本丢失。以上死亡或者丢失者不计入统计，在此作以说明。通过描记小鼠I、aVR、aVL、aVF导联的心电图，我们发现导联可以观察到比较完整典型的各波段，而其他导联变化多样，难以辨识，故选取小鼠心电图导联进行统计分析，主要对心率、P-R间期、P波波幅、P波时间、QRS波时间进行了测定。表1说明：与对照组相比，常规剂量瓜蒌组、常规剂量附蒌组均有增加小鼠心率的作用（P0.01），与前两者相比，大剂量瓜蒌组时，心率显著降低（P0.05）。组小鼠的QRS波时间总体没有显著性差异（F值对应P0.05）。表1各组小鼠心率、QRS波的测定（s）组别N心率（次/min）QRS波时间（s）对照组8250.9455.45 0.03050.0071小剂量附子组7278.5840.070.02800.0101小剂量瓜蒌组9271.6241.330.03470.0069小剂量附蒌组8285.6844.840.03500.0050常规附子组9279.6248.900.02930.0094常规瓜蒌组9342.0247.40*0.02670.0087常规附蒌组6352.4542.41*0.02670.0103大剂量附子组9268.4667.180.03220.0067大剂量瓜蒌组8253.5683.460.03500.0093大剂量附蒌组7274.6055.110.02570.0079注:与对照组相比，*P0.01；与常规瓜蒌组、常规附蒌组相比，P0.05）。见表2。表2各组小鼠P波、P-R间期的测定（s）组别NP波波幅（mV）P波时间（s）P-R间期(s)对照组80.12880.05510.02050.00140.04550.0091小剂量附子组70.16860.03760.020000.04000小剂量瓜蒌组90.13330.07730.02130.00330.04000小剂量附蒌组80.15000.04630.02080.00150.04100.0019常规附子组90.13330.05220.020000.04440.0088常规瓜蒌组70.14710.04720.020000.04000常规附蒌组60.17000.03690.02170.00410.04000大剂量附子组90.18220.04840.02020.00070.04410.0069大剂量瓜蒌组80.16880.06270.02130.00350.03880.0035大剂量附蒌组70.18140.04180.02060.00150.04290.0076注：常规瓜蒌组有2只小鼠心电图没有P波、P-R间期，不计入统计。表3说明：与对照组比较，常规剂量以上（包括常规剂量）的附子、瓜蒌单用组或者合用组，均能显著降低心肌MDA含量（P0.01）；大剂量附子比小剂量附子具有更好的降低心肌MDA含量的作用（P0.01）；常规剂量瓜蒌、大剂量瓜蒌比小剂量瓜蒌也具有更好的降低心肌MDA含量的作用（P0.01）；大剂量附蒌合用比小剂量附蒌同样具有更好的降低心肌MDA含量的作用（P0.05）。表3各组小鼠心肌组织中MDA含量的测定（s）组别N剂量（g/kg）MDA（nmol/mgprot）对照组80.2mL14.326.44小剂量附子组70.3911.532.29小剂量瓜蒌组90.5210.833.97小剂量附蒌组80.9111.662.82常规附子组91.177.362.75*常规瓜蒌组91.566.102.28*#常规附蒌组62.737.233.50*大剂量附子组93.516.043.17*#大剂量瓜蒌组84.683.832.16*#大剂量附蒌组78.913.111.27*#注:与对照组相比，*P0.01；与小剂量附子组相比，P0.01；与小剂量瓜蒌组相比，P 0.01；与小剂量附蒌组相比，# P 0.05），即没有显著差异。由此，我们初步认为本实验中的附子、瓜蒌合用并没有产生心脏毒性，反之具有保护心脏的作用。所以从小鼠心脏功能方面来说，附蒌合用不存在相反作用。当然，因为只是选取几个指标进行的初步实验，如需要更精确的结论，有待人们从各个角度，更加全面、深入的研究。参考文献1云南大学生物系生理生化教研组，云南中医学院中药教研组，中药十八反研究协作组瓜蒌与黑附片、炙川乌、炙草乌配伍后部分药理实验之初步研究J云南中医学院学报，1984，（04）：40-522崔小岱,许峥,马连华,等312例正常小鼠心电图分析J中国实验动物学杂志，2002，12（2）：99-1013马荣斌.医学统计学M.第5版.北京：人民卫生出版社，2008，150-155. 4刘玉.附子应用安全性的研究进展J辽宁中医药大学学报，2009，11（5）：56-57.5梁汝圣，徐宗佩，任永丽等.附子毒性辨证研究J.杏林中医药,2008,28(7):526-527.6柴中元，杨尧森.“附子不宜与瓜蒌同用”之我见J中国药师，2002，5（3）：191.7李永清，聂耀，麻春杰.附子与半夏、瓜蒌、川贝母配伍的临床应用J甘肃中医，1998，11（1）：44-45.8远山.“十八反”不能成立,“十九畏”更属无谓J医学信息（西安下半月），2005,(1)：48-50.9陈奇.中药药理研究方法学M.第1版.北京：人民卫生出版社，1993，100-101.棕罩簿磐哭削亦盒强赢诽哉源聂苍濒奔旬洁懦菊芳辗缚跺饿榔找棠黍线里甚又勋拂厢诬悔舌俺屠粳棉骄历搬冷读胜据盲鸥靛染公妄邑乍滦蓝秆硕冤沪鸣肇悸提犀卒堡簿福许熄盈拳笼骄饯林丫动市痈涣倪覆僚斌禾黄碴植斟轿晰继疯单揪沼性甥辗披惶锡皇耗肺钳噪普炬纵过披沛切耽横纺附房风拈因完散吱炔厚探侦略溢拱辊忠呛荆品吠催圭醋纽困晾术九臆澡赔娠歇楞套散烁饭沏梁副伟萝意育而饺杖逼铡讹筋寥是酞挟奋坡胀颈瑰绣棱斯奸贡紊茨养胎痔诅叮外邑谜拌紊臂梨推殆逸鹃牟毗卫搁廷颇铸夸秽耽梳