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功效成分及卫生指标检验规范 1 功效成分及卫生指标检验规范 1 主题内容和适用范围 1.1 本规范规定了保健食品和原料的卫生要求、功效成分和卫生指 标的检验项目和方法。 1.2 本规范适用于保健食品的检验受理、项目的确定和方法的选择。 2 基本要求 2.1 凡保健食品，必须符合 "保健食品通用卫生要求 "，该 "要求 "所 列的各项目必须按规定执行。附表 1 所列检测项目是对 "保健食品通 用卫生要求 "补充规定。 2.2 保健食品中使用的添加剂必须符合＂ GB2760食品添 加剂使用卫 生标准＂规定的品种名单。检测机构根据产品配方检测合成色素、防 腐剂、甜味剂及抗氧化剂的含量。 2.3 凡使用有机溶剂提取物为原料的产品，其使用的有机溶剂要符 合 GB2760 附录 D 食品工业用加工助剂推荐名单要求。 2.4 保健食品应具有与产品配方和申报的保健功能相适应的功效成 分或特征成分，申报时须检测配方中主要原料所含的功效成分或特征 成分。附表 2 所列原料为主的产品须检测表中规定的项目。 2.5 保健食品评审专家委员会可根据产品的具体配方、工艺等相关 资料，要求申报单位检测指定的项目。 2.6 功效 成分、特征成分、营养成分及卫生学指标的检测方法应根 2 据其产品适用的方法学范围选择国家标准、卫生部部颁标准、行业标 准以及国际上权威分析方法进行测定。 2.7 在没有相应的标准方法之前，其产品中所声称（具有）的功效 成分或特征成分的检测方法及检测所需的标准品对照品及特殊试剂 均由申报单位提供，并说明其产品中功效成分或特征成分分析方法的 来源。如属自主开发研究的分析方法，需提供方法学研究的相关资料， 同时将方法学研究的资料报卫生部保健食品功效成分检测协作组（中 国疾病预防控制中心营养与食品安全所）备案，必要时卫生部将组织 方 法学验证，其费用由申报单位承担。 2.8 检验机构受理保健食品检测时，申报单位应提供该产品的配方、 工艺及企业标准等相关资料。 2.9 卫生部对保健食品的功效成分的检测机构进行认定，检测机 构的名单由卫生部门公布。保健食品的功效成分检测工作应在卫生部 认定的检测机构进行。违禁成分的检测由卫生部指定的检验机构进行 检测。 3 附表 1：下列类型的产品、或下列原料为主的产品指标检测项目表 产品类型 检测项目 1 固体 水分、灰分 2 口服液 可溶性固形物、ｐＨ 3 海产品 镉 4 鱼油类 酸价、过氧化值（降血脂类产 品需检 测胆固醇） 5 茶叶 有机氯农药残留（六六六、滴滴涕） 6 红曲 黄曲霉毒素Ｂ 1、桔青霉素 7 中药材 汞、六六六、滴滴涕 8 9 苹果、山楂 片剂和胶囊 展青霉毒素 崩解时限 10 抗疲劳、减肥和 改善生长发育 的产品 违禁药物 4 附表 2：功效成分和特征成分检测项目表 1 营养素补充剂 产品中标识的营养素 (包括维生素和 矿物质 ) 2 五加科参类 皂甙 3 蕈类（灵芝、蘑 菇等） 膳食纤维 4 冬虫夏草菌丝 体 腺苷 5 红景天类 红景天甙 6 芦荟类 芦荟甙 7 大蒜 类 大蒜素 8 螺旋藻类 蛋白质、胡萝卜素、维生素 B1、维生 素 B2 9 茶叶类 茶多酚 10 魔芋类 膳食纤维 11 纤维素类 膳食纤维 12 磷脂类 丙酮不溶物、乙醚不溶物（原料） 13 红曲类 洛伐它丁 14 植物油类 脂肪酸、维生素 E 15 动物油类 脂肪酸 16 初乳类 免疫球蛋白 17 鹿血类 蛋白质、 氨基酸 18 蚂蚁类 锰、蛋白质 19 蚯蚓类 蚓激酶（溶纤酶）、蛋白质 20 蛇、蝎等 蛋白质、氨基酸 21 角鲨烯 角鲨烯 22 蜂皇浆 10-羟基癸烯酸 23 蜂花粉、蜂胶 总黄酮 24 甲壳质产品 脱乙酰度，产品如为复方应检测原料 的脱乙酰度 25 蛋白质、氨基酸 制品 蛋白质、氨基酸 26 褪黑素产品 褪黑素 产品原料（褪黑素）需提供 原料纯度证明并检测 5 3 保健食品中功效成分的检验方法 见附件 1 6 附件 1 目 录 1. 保健食品中红景天甙的测定 2. 保健食品中大蒜素的测定 3. 保健食品中芦荟甙的测定 4. 保健食品中脱氢表雄甾酮（ DHEA）的测定 5. 保健食品中吡 啶甲酸铬的测定 6. 保健食品中盐酸硫胺、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定 7. 保健食品中肌醇的测定 8. 保健食品中肉碱的测定 9. 保健食品中α — 亚麻酸、γ — 亚麻酸的测定 10. 保健食品中免疫球蛋白 IgG的测定 11. 保健食品中水溶性粗多糖的测定 12. 保健食品中人参皂甙的高效液相色谱测定 13. 保健食品中原花青素的测定 14. 保健食品中核苷酸的测定 15. 保健食品中洛伐他丁的测定 16. 保健食品中中药功效成分的鉴别方法 17. 保健食品中银杏叶总黄酮的高效液相色谱测定 18. 保 健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定 19. 保健食品中金雀异黄素的测定 20. 保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定 21. 五味子类保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的高效液相色谱测定 22. 保健食品中腺苷的测定 23. 保健食品中褪黑素的测定 附： 保健食品功效成分检验方法协作组提供的检验方法 1. 保健食品中人参总皂甙的测定 2. 保健食品中总黄酮的测定 3. 壳聚糖的游离氨基测定及脱乙酰度的计算 4. 蚓激酶活性的测定 5. 乙醚不溶物、丙酮不溶物的测定 6. 角鲨烯的测定 7 1.保健食品中红景天甙的测定 Determination of salidroside in health food 第一法 高效液相色谱法 1 范围 本方法规定了保健食品中红景天甙的测定方法。 本方法适用于以红景天为主要原料的保健食品中红景天甙的测定。 本方法的检出限： 0.02μ g。 本方法的线性范围： 0.01～ 0.50μ g/mL。 2 原理 将混匀的试样使用甲醇进行提取， 根据高效液相色谱紫外检测器定性定量检 测。 3 试剂 除非另有说明，在分析中仅使用双蒸水。 3.1 乙酸钠 分析纯。 3.2 甲醇 优级纯。 3.3 石油醚 分析纯。 3.4 红景天甙标准溶液 准确称量红景天甙标准品 0.0200g，加入甲醇溶解并 定容至 10mL。此溶液每 mL含 2.0mg红景天甙。 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（ UV）。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。 5 分析步骤 5.1 试样处理 5.1.1 液体试样：准 确量取摇匀后的液体试样 20mL 于 50mL 容量瓶中，先加入 25mL甲醇，超声 10min 后用甲醇定容至刻度，混匀，经 0.45m滤膜过滤后供液 相色谱分析用。 5.1.2 固体试样：取 20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎混匀，准确称取适量试 样（精确至 0.001g）于 50mL 容量瓶中，加入甲醇 , 超声提取 10min。取出后加 入甲醇定容至刻度，混匀后以 3000rpm/min 离心 3min。经 0.45m滤膜过滤后供 液相色谱分析用。 5.2 液相色谱参考条件 5.2.1 色谱柱 : C18 柱 4.6× 250mm,5μ m。 5.2.2 柱温：室温。 5.2.3 紫外检测器：检测波长 215nm。 8 5.2.4 流动相：甲醇 :0.02mol/L乙酸钠溶液＝ 9:91。 5.2.5 流速： 1.0mL/min。 5.2.6 进样量： 10L。 5.2.7色谱分析：取 10μ L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性， 以试样峰高或峰面积与标准比较定量。 5.3 标准曲线制备 分别配制浓度为 0.0、 0.01、 0.02、 0.05、 0.20、 0.50μ g/mL 红景天甙标准溶液 ,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析 ,以峰高或峰面积 对 浓度作标准曲线。 5.4 分析结果的表示 5.4.1 计算 h1× C × V X = ——————————— h2× m× 1000 式中： X － 试样中红景天甙的含量， mg/g； h1 － 试样峰高或峰面积； C － 标准溶液浓度，μ g/mL； V － 试样定容体积， mL； h2 － 标准溶液峰高或峰面积； m － 试样质量， g。 计算结果保留三位有效数字。 6 技术参数 准确度 方法的回收率在 91.7％～ 98.6％之间。 允许差 在重复性条件下获得的 2 次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平 均值的 ±10% 。 第二法 极谱法 1 范围 本方法规定了保健食品中红景天甙的测定方法。 本方法适用于以红景天甙为主要功效成分的保健食品中红景天甙的含量测 定。 本方法的最低检出量为 0.05μ g。若取 1.00mL 液体类试样，其最低检出浓度 为 0.05mg/L；若取 0.25g 固体类试样、则最低检出浓度为 0.2mg/kg。 本方法的最佳线性范围为 0.1μ g/mL～ 1.0μ g/mL。 2 原理 保健食品中红景天甙用甲醇提取， D— 101 型大孔吸附树脂净化处理，经亚 硝基化后，其衍生物在硼砂溶液中具有电活性，在滴汞电极上还原产生极谱波。 用峰电位定性，以试样与标准的峰电流（ I"p）比较定量。 3 试剂 9 除注明外，试剂为分析纯，实验用水为重蒸馏水。 3.1 甲醇。 3.2 D— 101 型大孔吸附树脂。 3.3 饱和硼砂溶液。 3.4 0.2%盐酸溶液。 3.5 2mol/L 亚硝酸钠溶液。 3.6 1.0mg/mL 红景天 甙标准贮备溶液：准确称取 0.1000g 红景天甙对照品（中 国药品生物制品检定所）于烧杯中，加水溶解并定容至 100mL 容量瓶。此溶液 每毫升含红景天甙 1.0mg，冰箱保存。 3.7 10.0μ g/mL 红景天甙标准使用溶液：准确吸取红景天标准贮备溶液 1.00mL 于 100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液每毫升含红景天甙 10.0μ g。 4 仪器与设备 4.1 极谱分析仪。 4.2 超声波清洗机。 4.3 Φ 10mm× 150mm 玻璃层析柱。 5 分析步骤 5.1 试样的制备及予处理 5.1.1 液体类 试样（如保健酒、口服液、饮料等） 准确吸取摇匀的试样液 1.00mL 于 50mL 容量瓶中，加水稀释至刻度、摇匀， 供测定用。 5.1.2 一般固体类试样（如保健茶、蜜片、胶囊等） 准确称取经粉碎并过 20 目筛的试样 0.25g，置 50mL 三角瓶中，加入 10mL 甲醇，于超声波清洗机超声提取 10min、过滤，滤液收集于 50mL 容量瓶中。再 加入 10mL 甲醇于三角瓶中，重复超声提取一次，合并滤液于上述容量瓶中，用 水稀释至刻度，供测定用。 5.1.3 个别组分复杂的固体类试样 个别组分复杂的固体类试样需经柱层析净化处理。 层析柱制备。取适量 D— 101 型非极性大孔吸附树脂于烧杯中，加水洗涤数 次，缓缓倾入Φ 10mm × 150mm 玻璃层析柱内，湿法装柱、树脂约高 50mm， 10mL 甲醇注入层析柱上端进行淋洗，弃淋洗液。 净化。按 5.1.2 节处理、提取试样，准确吸取 10.0mL 提取试液，缓缓注入层 10 析柱上端，用玻璃蒸发皿收集流出液。再吸取 10mL 甲醇分两次注入层析柱进行 淋洗、合并流出液于蒸发皿中，置 70℃恒温水浴挥干，用水溶解移入 10mL 容 量瓶中，水稀释至刻度，供测定用。 5.2 极谱分析参考条件 单扫描极谱法（ SSP 法）。选择起始电 位为 — 400mV，终止电位 — 900mV， 扫描速度 250mV/S，三电极，二次导数，静置时间 5s 及适当量程。于峰电位（ Ep） — 600mV（ vs.SCE）处，记录红景天甙的峰电流（ I"p） nA。 5.3 标准曲线的绘制 准确吸取 10.0μ g/mL 红景天甙标准使用溶液 0， 0.10， 0.20， 0.40， 0.60， 0.80， 1.00mL 于 7 支 10mL 比色管中（相当于含 0， 1.0， 2.0， 4.0， 6.0， 8.0， 10.0μ g 红景天甙）。各管加入 2.0mL 2mol/L 亚硝酸钠溶液及 1.0mL 0.2%盐酸溶液置 沸水 浴 10min，取出冷却至室温后各管再加入 1.0mL 饱和硼砂溶液，加水稀释至刻度， 摇匀。 将各管溶液依次移入电解池，置三电极系统。按上述极谱分析参考条件（ 5.2） 下测定，记录各管红景天甙的峰电流（ I"p）。以红景天甙含量为横座标，其对应 的峰电流为纵座标，绘制标准曲线。 5.4 试样测定 5.4.1 标准曲线法 准确吸取上述待测液 0.1mL～ 0.5mL 于 10mL 比色管中，（视其含量高、低 而定）加入 2mL 2.0mol/L 亚硝酸钠溶液，以下操作同 5.3 节标准曲线绘制项下测 定试液中红景天甙的峰电流（ I"p） 。 5.4.2 标准加入法 分别吸取上述待测液 0.1～ 0.5mL 于 2 支 10mL 比色管中（视其含量高、低而 定）。其中一管加入所吸取待测液中红景天甙含量大致相当的红景天甙标准使用 溶液（可先予测一次），各管再加入 2mLL2.0mol/L 亚硝液钠溶液，以下操作步 骤同 5.3 节标准曲线绘制项下。测定两管溶液中红景天甙的峰电流（ Ip"）。 6 结果 11 6.1 计算 6.1.1 标准曲线法 X= A m× V1 × 1000 „„„„„„„„„（ 1） V 式中： X—— 试样中红景天甙含量， mg/g（或 mg/mL）； A—— 从标准曲线上查得的含量，μ g； V—— 试样的定容体积， mL； V1—— 测定用试样溶液体积， mL； m—— 试样的质量（或体积）， g（或 mL）。 6.1.2 标准加入法 X= B× h1 （ h2－ h1）×ｍ× V1 × 1000 „„„„„„„（ 2） V 式中： B—— 加入红景天甙标准含量，μ g； h1—— 未加红景天甙标准管中溶液的峰电流， nA； h2—— 加红景天甙标准管中溶液的峰电流， nA； X， m， V1， V 与（ 1）式中表述含义相同。 6.1.3 结果表示：计算结果保留 3 位有效数字。 6.2 技术参数 准确度：本方法的平均添加回 收率为 92.5%。 精密度：相对标准偏差（ RSD） <7.0% 干扰因素：若试样中共存黄酮甙，有正干扰，测定时加入１ %硝酸铝溶液 0.5mL， 即可消除此干扰。 12 2. 保健食品中大蒜素的测定 Determination of allitridum in health food 1 范围 本方法规定了保健食品中大蒜素 (三硫二丙烯， C6H10S3)的测定方法。 本方法适用于以大蒜（油）为主 要原料，制成的酒、胶囊、片剂中大蒜素的 含量测定。 本方法最低检出浓度为 0.0430mg/mL；取 100mg 试样，提取定容 5.0mL 时， 试样中大蒜素最低检出质量浓度为 0.20g/100g。 本方法最佳线性范围： 0.320-3.00μ g。 2 原理 根据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采用外 标法定量。 3 试剂 3.1 无水乙醇 (分析纯 )。 3.2 正己烷 (分析纯 )。 3.3 标准溶液配制 称取 0.1000g 标准，置于 10mL 容量瓶中，用正己烷定容至 刻度，该溶液 中含大蒜素浓度为 10.0mg/mL。此溶液可在冰箱中保存七天。取该 溶液 1.0mL，置于 10mL 容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度 为 1.0mg/mL。 4 仪器 4.1 气相色谱仪，附氢火焰（ FID）检测器。 4.2 数据处理机，或积分仪。 4.3 分析天平：万分之一。 4.4 超声清洗机。 4.5 离心机， 3000r/min。 5 分析方法 5.1 试样提取 5.1.1固体试样 精密称取试样 0.100g，加无水乙醇 2.5mL ,密塞，超声 70min， 取出冷却，加正己烷 2.5-25.0mL 定容（调节大蒜素含量约为 1.0mg/mL 左右）， 振摇，静置分层后，取上层液进样。 5.1.2 液体试样 精密吸取 20.0 mL 试样，于分液漏斗中，加 5mL 正己烷振摇 提取 1min，静置（或离心）分层后，取上层液进样。 5.2 气相色谱参考条件 5.2.1 色谱柱 玻璃色谱柱长 ： 2 米，内装担体：硅藻土（ Chromosorb W(AW)） ,60-80目；固定相： 0.5%己二酸乙二醇酯（ Ethylene Glycol Adipate） ；。 13 5.2.2 柱箱温度： 90℃。 5.2.3 进样口温度： 150℃。 5.2.4 鉴定器温度： 150℃。 5.2.5 载气：氮气（ 55mL/min）。 5.2.6 氢气： 50mL/min ；空气： 500mL/min。 5.2.7 鉴定器灵敏度： 2；记录仪衰减： 3。 5.2.8 进样量 1μ L。 5.3 定性分析 在参考操作条件下，以对照品与试样比较保留时间定性。 5.4 定量分析 试样中大蒜素色谱峰面积或峰高与标准的色谱峰面积或峰高比 较定量。 5.5 分析结果表述 试样中大蒜素的含量按式（ 5.5.1）计算。 5.5.1 计算 W= 1 0 0 1 0 0 02 1 mA VCA 式中： W—— 大蒜素的含量， %； A1—— 试样使用液色谱峰面积或峰高； A2—— 标准使用液峰面积或峰高； C—— 标准使用液浓度， mg/mL； V—— 试样定容体积， mL； m—— 试样的质量， g。 5.5.2 结果表示 计算结果保留三位有效数字。 6 技术参数 6.1 回收率：在不同的试样中不同浓度加标回收率为 97.8-116%。 6.2 精密度：同一试样 6次测定结果的 RSD 为 2.10%。 6.3 两次测定结果相对误差：≤ 10% 6.4干扰因素：在超声时 ,注意密 塞。 7 参考色谱图 14 图 A 标准品气相色谱图 图 B 片剂试样气相色谱图 图中 tr=0.588 溶剂 , 图中 tr=0.6 溶剂， tr=3.045 大蒜辣素 tr=3.062 大蒜辣素 tr=10.912 大蒜素 tr=11.011 大蒜素 15 3. 保健食品中芦荟甙的测定 Determination of Aloin in health food 1．范围 本方法规定了芦荟胶囊、芦荟片剂、芦荟汁等保健食品中芦荟甙含量的测定 方法。 本方法适用于芦荟胶囊、芦荟片剂、芦荟汁等保健食品中芦荟甙含量的测定。 本方法的最低检出量 10ng 本方法的最佳线性范围： 0~100μg/mL y=1124194x+3215；线性关系 r=0.9999 2．原理 用甲醇 +水（ 55+45）作为溶剂，提取试样中的芦荟甙，经高效液相色谱仪 C18 柱分离，紫外检测器 293nm 条件下检测，以芦荟甙保留时间定性，峰面积定 量。 3．试剂 3． 1 甲醇 色谱纯； 3． 2 水 重蒸水； 3． 3 芦荟甙标准品 纯度≥ 98% 3． 4 芦荟甙标准溶液的制备 精确称取芦荟甙标准品 10mg，加流动相甲醇 +水 （ 55+45）溶解并移入 100mL 容量瓶中，定容至刻度。 4．仪器设备 4． 1 高效液相色谱仪 附紫外检测器 4． 2 色谱柱 C18（以十八烷基键合硅胶填料为填充剂）或具同等性能的色谱柱， 150mm×6mm， 5μ m； 4． 3 超声波清洗器； 4． 4 C18 净化富集柱 C18 预柱 装量 0.5g，分配型； 4． 5 离心机 3000r/min。 5 色谱分离条件 5． 1 流动相 甲醇 +水 =55+45 16 5． 2 流速 1mL/min； 5． 3 柱温 40℃； 5． 4 检测波长 293nm； 5． 5 灵敏度 0.016AUFS； 5． 6 进样量 10μ L。 6．分析步骤 6． 1 试样制备 将固体试样粉碎成粉末状，混匀。准确称取上述经处理后的试 样 1.00g 于 50mL 容量瓶中，加检测用流动相 30mL 溶解，经超声振提 5min 加流 动相定容 50mL，离心沉淀，上清液经滤膜（ 0.45μ m）过滤，芦荟汁饮料直接 经 0.45μ m 滤膜过滤。 6． 2 测定步骤 分别精密吸取标准溶液和试样溶液 10μ L注入高效液相色谱仪， 依上述色谱条件，以保留时间定性，用外标法计算试样中芦荟甙的含量。 7．计算公式 A1×C×V x= A2×m 式中： X 试样中芦荟甙含量， mg/g（ mg/mL）； A1 试样中芦荟甙的峰面积； C 标准液的质量浓 度， mg/mL； A2 标准液中芦荟甙的峰面积； V 试样定容体积， mL； m 试样的质量， g（ mL）。 计算结果保留三位有效数字。 8.允许误差 同一试样两次测定值之差不得超过两次测定平均值的 10%。 17 4. 保健食品中脱氢表雄甾酮（ DHEA）的测定 Determination of dehydroepiandrosterone in heath food 1 范围 本方法规定了保健食品中脱氢表雄甾酮（ DHEA）含量的测定方法。 本方法适用于添加在片剂、胶囊等试样类型中功效成分脱氢表雄甾酮（ DHEA） 含量的测定。 本方法的最低检出量 6.00mg/kg。 本方法的最佳线性范围： 0.0400～ 10.0mg/mL。 2 原理 将粉碎的胶囊和片剂试样使用流动相进行提取和稀释，根据高压液相色谱紫 外检测器定性定量检测。 3 试剂 3.1 甲醇 优级纯。 3.2 脱氢表雄甾酮（ DHEA） 标准溶液 准确称量脱氢表雄甾酮（ DHEA）标准品 （ Sigma 公司，纯度 99%） 0.0100g，加入检测用流动相并定容至 10mL。此溶液 每 mL含 1mg脱氢表雄甾酮（ DHEA）。 4 仪器设备 4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（ UV）。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。 5 分析步骤 5.1 试样处理： 取 20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎混匀，准确称取试样（精 确至 0.001g）于容量瓶中，加入流动相定容至 10.0mL, 使浓度大约为每 mL中含 脱氢表雄甾酮（ DHEA） 1mg。超 声提取 5min 后以 3000rpm/min 离心 3min。准确 取 2.0mL 试样溶液于试管中，加入流动相定容至 5.0mL，摇匀。经 0.45m 滤膜 过滤后，备用。 5.2 液相色谱参考条件 5.2.1 色谱柱 : C18 柱 4.6× 250mm。 5.2.2 柱温：室温。 5.2.3 紫外检测器：检测波长 215nm。 5.2.4 流动相：甲醇：水＝ 80： 20。 5.2.5 流速： 0.6mL/min。 5.2.6 进样量： 10L。 5.2.7色谱分析：取 10μ L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时 间定性， 以试样峰高或峰面积与标准比较定量。 5.2.7 色谱图 18 在上述色谱条件下， 脱氢表雄甾酮（ DHEA）的保留时间为 7.40。 5.3 标准曲线制备 分别配制浓度为 0.0、 0.0400、 0.200、 1.00、 5.00、 10.0mg/mL 脱氢表雄甾酮（ DHEA）标准溶液 ,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析 ,以峰高 对 浓度作标准曲线。 5.4 分析结果表示 5.4.1计算 h1× C × V × 5 X = ───────── h2× m× 2 式中： X－试样中 脱氢表雄甾酮（ DHEA） 的含量， mg/g； h1－试样峰高或峰面积； C －标准溶液浓度， mg/mL； V－试样定容体积， mL； h2－标准溶液峰高或峰面积； m－试样质量， g。 5.4.2 结果表示 保留三位有效数字。 6 技术参数 准确度 方法的回收率在 91.5%～ 96.0%之间 允许差 平行样相对误差 ±5% 。 19 5.保健食品中吡啶甲酸铬的测定 Determination of chromium picolinate in heath food 1 范围 本方法规定了保健食品中吡啶甲酸铬含量的测定方法。 本方法适用于吡啶甲酸铬作为 功效成分添加于片剂、胶囊等试样类型中含量 的测定。 本方法的最低检出量 10.0mg/kg。 本方法的最佳线性范围： 2.00～ 100μ g/mL。 2 原理 将粉碎的胶囊和片剂试样使用甲醇：水 =1： 1 进行提取和稀释，根据高压液 相色谱紫外检测器外标法定性定量检测。 3 试剂 3.1 甲醇 优级纯。 3.2 磷酸氢二钾、磷酸二氢钾 分析纯。 3.3 吡啶甲酸铬标准溶液 准确称量吡啶甲酸铬标准品 0.0100g，加入甲醇 :水 =1:1 并定容至 100.0mL, 如有少量残渣 ,可使用超声波加速溶解。此溶液每 mL 含 100μ g吡啶甲酸铬。 4 仪器设备 4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（ UV）。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。 5 分析步骤 5.1 试样处理： 取 20 粒片剂或胶囊试样进行粉碎或混匀，准确称取一定量试 样于刻度试管中，加入甲醇：水 =1： 1 并定容至 20.0mL,超声提取 5min 后以 3000rpm/min离心 3min。经 0.45m滤膜过滤后，备用。 5.2 液相色谱参考条件 5.2.1 色谱柱 : C18 柱 4.6× 250mm。 5.2.2 柱温：室温。 5.2.3 紫外检测器：检测波长 254nm。 5.2.4 流动相： 0.125mol/L 磷酸盐缓冲溶液：乙腈＝ 425： 75。 5.2.5 流速： 0.5mL/min。 5.2.6 进样量： 10L。 5.2.7色谱分析：量取 10μ L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定 性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。 5.3 色谱图 20 在上述色谱条件下， 吡啶甲酸铬的保留时间为 7.023。 5.4 标准曲线制备 配制浓度为 0.0、 2.00、 5.00、 10.0、 50.0、 100μ g/mL 吡啶甲酸铬 标准溶液 ,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析 ,以峰高对浓度作 标准曲线。 5.5 分析结果表示 5.5.1计算 h1× C × V X = ───────── h2× m× 1000 式中： X－试样中 吡啶甲酸 铬 的含量， mg/g； h1－试样峰高或峰面积； C －标准溶液浓度，μ g/mL； V－试样定容体积， mL； h2－标准溶液峰高或峰面积； m－试样量， g。 5.5.2 结果表示 检测结果保留三位有效数字。 6 技术参数 准确度 方法的回收率在 91.5%～ 98.4%之间 允许差 平行样测定相对误差 ±5% 。 21 6．保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、 烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定 Determination of thiamine hydrochloride,pyridoxine hydrochloride,niacin,niacinamide and coffeine content in health food 1 范围 本方法规定了保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因 含量的高压液相色谱测定方法。 本方法适用于盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因作为膳食补 充剂添加于片剂 、胶囊、口服液、饮料等试样类型中含量的高压液相色谱测定。 本方法的最低检出量为盐酸硫胺素 0.4mg/kg、盐酸吡哆醇 0.4mg/kg、烟酸 2.0mg/kg、烟酰胺 1.2mg/kg、咖啡因 1.0mg/kg。 本方法的最佳线性范围：盐酸硫胺素 0.500～ 50.0μ g/mL 盐酸吡哆醇 0.500～ 50.0μ g/mL 烟酸 1.00～ 100μ g/mL 烟酰胺 1.00～ 100μ g/mL 咖啡因 5.00～ 500μ g/mL 2 原理 将粉碎混匀的片剂、胶囊或液体试样使用甲醇：水：磷酸 =100： 400： 0.5 进行提取和稀释 ，根据高压液相色谱紫外检测器外标法定性定量检测。 3 试剂 3.1 甲醇 优级纯。 3.2 乙腈 色谱纯。 3.3 磷酸 分析纯。 3.4 硫酸月桂酯钠（ Sodium Dodecylsulfate） 高压液相色谱用离子对试剂。 3.5 1-癸烷磺酸钠（ Sodium 1-Decanesulfonate）高压液相色谱用离子对试剂。 3.6 标准储备液 A 准确称量已扣除水分的盐酸硫胺素和盐酸吡哆醇标准品各 0.0500g，溶于水中并定容至 50mL。 3.7 标准储备液 B 准确称量已 扣除水分的烟酰胺和烟酸标准品各 0.0400g，溶 于水中并定容至 20mL。 3.8 混合标准使用液 准确称量经 80℃干燥 4h的咖啡因 0.0500g，准确加入标 准储备液 A 5mL, 标准储备液 B 10mL，再加入甲醇：水：磷酸 =100： 400： 0.5 混合溶液 4 仪器和设备 22 4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（ UV）。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。 5 分析步骤 5.1 试样处理 5.1.1 取 20粒以上片剂或胶囊试样研磨或混匀，称取一定量试样于试管中（准 确至 0.001g），加入甲醇：水：磷酸＝ 100： 400： 0.5混合溶液 ,使浓度为每毫升 中大约含盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇 0.25mg，烟酸、烟酰胺 1mg。超声提取 5min 后以 3000rpm/min 离心 5min，上清液经 0.45m滤膜过滤后待进样。 5.1.2 液体试样直接以甲醇：水：磷酸＝ 100： 400： 0.5 混合溶液稀释，充分 混匀后经 0.45m滤膜过滤后待进样。 5.2 色谱条件 5.2.1 色谱柱 : 液体试样 TSK C18 4.6× 150mm 5.2.3 柱温：室温 5.2.4 检测波长：盐酸硫胺素 260nm 咖啡因、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇 280nm 5.2.5 流动相：盐酸硫胺素 : 硫酸月桂酯钠溶液（ 5→ 530） :乙腈 :磷酸＝ 530:470:1 咖啡因、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇 : 1-癸烷磺酸钠溶液 （ 1.22→ 850） : 乙腈 :磷酸＝ 850:150:1 5.2.6 流速： 1mL/min 5.2.7 进样量： 10L 5.3 保留时间： 1 图 1 图 2 在该色谱条件下， 盐酸硫胺素（图 1－ 1）保留时间 14.305 咖啡因（ 图 2－ 1）保留时间 4.986、烟酸（ 图 2－ 2）保留时间 8.728、烟酰胺（ 图 2－ 3）保留时间 9.341、盐酸吡哆醇（ 图 2－ 4）保留时间 18.512。 5.4 分析结果表示 5.4.1计算 h1× C × V X = ───────── h2× m× 1000 式中： X－试样中 单一成分 的含量， mg/g（ mL） ； h1－试样峰高或峰面积； C －标准溶液浓度，μ g/mL； V－试样定容体积， mL； 23 h2－标准溶液峰高或峰面积； m－试样量， g（ mL） 。 5.4.2 结果表示 检测结果保留三位有效数字。 6 技术参数 准确度 方法的回收率在 91.2%～ 102.5%之间 允许差 平行测定相对误差 ±10% 。 24 7.保健食品中肌醇的测定 Determination of inositol in health food 1 范围 本方法规定了保健食品中肌醇含量的测定方法。 本方法适用于肌醇作为功效成分添加于片剂、胶囊、饮料等试样类型中含量 的测定。 本方法的最低检出量为 2mg/kg。 本方法的最佳线性范围是 0.1～ 10mg/mL。 2 原理 将固体试样提取液或液体试样稀释液浓缩至干，经硅烷化处理，以正己烷提 取，气相色谱氢火焰检测器定性定量检测。 3 试剂 3.1 无水乙醇 分析纯。 3.2 正己烷 分析纯。 3.3 无水硫酸钠 分析纯。 3.4 三甲基氯硅烷 分析纯。 3.5 六甲基二硅氨烷 分析纯。 3.6 二甲基甲酰胺 分析纯。 3.7 肌醇标准溶液将肌醇标准品（纯度 99%）在 100±5℃ 干燥 4h，准确称量 0.0500g，溶于乙醇溶液（ 3→ 10），准确配成 100.0mL溶液。此溶液每 mL含 0.500mg 肌醇。 3.8 硅烷化试剂 将三甲基氯硅烷、六甲基二硅氨烷、二甲基甲酰胺以 1： 2： 8的体积比混合制成，临用时现配。 4 仪器和设备 4.1 气相色谱仪 ：附氢火焰检测器（ FID） 4.2 旋转蒸发仪。 4.3 超声波清洗器。 5 分析步骤 5.1 试样预处理 5.1.1 取 20 粒片剂或胶囊试样研磨或混匀，称取一定量（准确至 0.001g）于 试管中，加入乙醇溶液（ 3→ 10） ,使浓度为每毫升中大约含肌醇 0.5mg，超声提 取 10min, 在转速为 3000r.p.m / min 下离心 5min,上清液待用。液体试样如浓 度过高可用乙醇溶液（ 3→ 10）稀释至每毫升含肌醇 0.5mg。 5.1.2 准确量取 1.0mL 试样溶液于旋转蒸发仪浓缩瓶中，加入 5mL 无水乙醇， 于 60℃旋转蒸发仪上浓缩至剩有少量液体，之后再每次加入 5mL 无水乙醇直至 浓缩瓶 中液体完全除去。 5.1.3 向浓缩瓶中准确加入硅烷化试剂 5.0mL，使用超声波振超至瓶中内容物 25 完全分散。在 70℃水浴中加热 10min。冷却后加入 10mL水， 再准确加入 3.0mL 正己烷，混摇后放置 10min，在转速为 3000r.p.m / min 下离心 5min，取出正己 烷层，加入少量无水硫酸钠，轻轻混摇后放置，取上清液进样。 准确量取 3.7 中肌醇标准溶液 1.0mL，并按试样 5.1.2起操作，可得肌醇标 准衍生溶液。 5.2 气相色谱参考条件 5.2.1 检测器 : FID 5.2.2 色谱柱 BP5 25m× 0.32mmi.d.石英弹性毛细管柱 5.2.3 气体流速 载气（ N2） 50mL/min 尾吹气（ N2） 50mL/min 氢气 40mL/min 空气 500mL/min 分流比 1： 50 5.2.4 柱温： 190℃ 5.2.5 进样口温度： 245℃ 5.2.6 衰减： 4 5.2.7 纸速： 2 5.2.8 色谱分析：量取 1μ L标准及试样衍生液注入色谱仪中，以保留时间定性， 以试样峰高或峰面积与标准比较定量。 5.2.9 色谱图 在上述色谱条件下，肌醇的保留时间为 5.220。 标准色谱图 试样色谱图 5.3 标准曲线制备 配制浓度为 0.0、 0.1、 0.5、 2.5、 5.0、 10.0mg/mL肌醇标 准溶 液，在给定的仪器条件下进行气相色谱分析，以峰面积对浓度作校正曲线。 5.4 分析结果表示 5.4.1 计算公式 h1× C × V × 100 X = ────────── h2× m 式中： X－试样中肌醇的含量， mg/100g（ mL）； h1－试样峰高或峰面积； C －标准溶液浓度， mg/mL； V－试样定容体积， mL； h2－标准溶液峰高或峰面积； m－试样量， g或 mL。 5.4.2 结果表示 检测结果保留三位有效数字。 6 技术参数 准确度 方法的添加回收率在 91.0%～ 97.2%之间 允许差 平行样测定相对误差 ±10%。 26 8. 保健食品中肉碱的测定 Determination of carnite in health food 1．范围 本方法规定了片剂、胶囊保健食品中肉碱的测定方法。 本方法适用于以肉碱为主要原料的片剂、胶囊中肉碱的测定。 本方法最低检出量为 0.27ug。 本方法最佳线性范围： 0.050mg/mL— 2.0mg/mL。 2. 原理 试样中的肉碱以 0.5mmol/L 的盐酸超声提取，反相色谱分离，与标准品的保 留时间比较定性，以峰面积外标法定量。 3. 试剂 除特殊说明，所用试剂均为分析纯。实验用水为去离子水或同等纯度的蒸馏 水。 3． 1 磷酸氢二钾 3． 2 辛烷磺酸钠 3． 3 0.50mmol/L 盐酸 3． 4 肉碱标准溶液：精密称取干燥至恒重的肉碱标准品 (含量 98%)0.0200g，用 0.50mmol/L 盐酸溶解并定容为 10.0mL，此溶液浓度为 2.0mg/mL。 4. 仪器 4． 1 HPLC 系统，配有紫外检测器和色谱工作站； 4． 2 超声波提取器； 4． 3 溶剂微孔过滤器带 0.45um 水相滤膜。 5. 分析步骤 5． 1 试样预处理：准确称取粉碎并混合均匀的式样 0.50g（含肉碱约 40 毫克）； 液体试样取 5.0mL，于 50mL 容量瓶中，加入 0.50mmol/L 盐酸约 35mL，超声提 取 10min，用 0.50mmol/L 盐酸定容，混匀，过滤，弃初滤液数毫升，收集滤液， 27 过 0.45um 水相滤膜，为试样处理液。供 HPLC 分析。 5． 2 试样分析 5． 2． 1 色谱条件： Shim— pakCLC ODS 柱； 4.6× 200mm,10um； 5． 2． 2 流动相： 0.05mol/L(3.4g) 磷酸氢二钾溶液， 0.002mol/L 辛烷磺酸钠 ； 10% 乙腈； PH2.5。 5． 2． 3 流速： 0.8mL/min； 5． 2． 4 检测器：紫外检测器；检测波长： 210nm； 5． 3 标准曲线：分别取标准溶液 0.0,0.25,0.50,1.0,2.0,2.5,5.0mL 标准溶液（ 3.4） 于 5mL 比色管中；用 0.50mmol/L 盐酸稀释并定容为 5.0mL，分别进样 20uL 进 行色谱分析。 用标准浓度 — 峰面积绘制标准曲线。 5． 4 试样测定：取 20uL 试样处理液（ 5.1）注入色谱仪中，以保留时间定性， 面积定量。 5. 5 色谱图 5. 6 分析结果表述 试样中肉碱的含量按 5.5.1 式计算 5． 6． 1 计算 C× V X= m 式中： X— 为试样中肉碱的含量， mg/g； m— 为试样质量， g； C— 为试样处理液中肉碱的浓度， mg/mL； V— 为试样处理液体积， mL。 5.6.2 结果表 示 结果保留三位有效数字。 6 . 技术参数 重复测定值的 RSD 小于 6.0%。 回收率： 90.3~101.1% 28 9. 保健食品中α -亚麻酸、γ -亚麻酸的测定 Determination of α、β -linolenic acids in health food 1. 范围 本方法规定了保健食品中 α -及 γ -亚麻酸的测定方法。 本方法适用于油脂保健食品中 α -及 γ -亚麻酸含量的测定。 本标准 还适用于油脂保健食品中 C16～ C22 不饱和脂肪酸含量的测定。 本方法最低检出量：γ -亚麻酸为 0.050μ g、α -亚麻酸为 0.030μ g。 本方法最佳线性范围： 0～ 0.50mg/mL 2. 原理 将油脂试样（或试样提取的脂肪），经氢氧化钾皂化，在三氟化硼存在下甲 醇酯化，然后用气相色谱仪分析，采用外标法定量。 3. 试剂 所用试剂除注明外均为分析纯 3.1 正己烷：沸点 68.7℃。 3.2 氢氧化钾甲醇溶液： C(KOH)为 0.5mol/L。称取 28g KOH 容于 1000mL 纯水。 3.3 三氟化硼甲醇 溶液（ 1＋ 4）：取 40%三氟化硼乙醚溶液 1 份，加甲醇 4 份， 混匀即可。 3.4 α -亚麻酸甲酯 >99.0% 3.5 γ -亚麻酸甲酯 >99.0% 3.6 标准储备液 称 0.0250g的 α -亚麻酸甲酯及 0.0250mg的 γ -亚麻酸甲酯标准 品，分别用正己烷溶解，并定容于 25mL 容量瓶中，混均，浓度分别为 1.0mg/mL。 3.7 标准使用液 分别取 α -亚麻酸甲酯及 γ -亚麻酸甲酯标准储备液各 5.0mL 置于 10mL 的容量瓶中，混均， α -亚麻酸甲酯和 γ -亚麻酸甲酯的含量为 0.5mg/mL。 4. 仪器与设备 4.1 气相色谱仪，附氢火焰（ FID）检测器。 4.2 数据处理机，或积分仪。 4.3 分析天平： 1/10000。 4.4 分析天平： 1/1000。 4.5 加热式磁力搅拌器。 4.6 标准磨口烧瓶 (50mL)和直形冷凝管。 5. 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 脂肪的提取 按 GB/T 5009.6 中规定的方法提取。 5.1.2 皂化 称取 0.100g 油脂（或脂肪）和磁力搅拌子一并放入 50mL 磨口烧瓶中（见图 29 1），加入 4mL0.5mol/L 氢氧化钾甲醇溶液，上部连接回流冷凝管，并固定于磁力 搅拌器 上，由冷凝管上口向溶液中导入氮气；使反应瓶中始终充满氮气。开启磁 力搅拌器，并加热使反应液保持 65± 5℃，搅拌回流约 15min。 5.1.3 甲脂化 从冷凝管上部加入 4mL 三氟化硼甲醇溶液，搅拌 (65± 5℃ )，回流约 2min， 冷至室温，从冷凝管上部加入 5mL 正己烷继续搅拌 5min，移去冷凝管，加入 5mL 饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟，转移至 25mL 分液漏斗中分离水与有机相，再 加 3mL 正己烷洗水相，分离，弃水相，合并有机相并定容至 10mL(浓度低时吹 氮浓缩至 1.0mL)。供测定用。 5.2 气相色谱参考条件 5.2.1 色谱柱： FFAP（改性聚乙二醇 20M， 30m× 0.25mm i.d. 0.25μ m）。 5.2.2 柱箱温度： 215℃。 5.2.3 进样口温度： 250℃ 。 5.2.4 检测器温度： 260℃。 5.2.5 氮气： 50mL/min， 30∶ 1 分流；氢气： 45mL/min；空气： 500mL/min。 5.3 定性分析 在上述仪器条件下，分析取标准使用液和试样测定液 1.0μ L，注入气相色谱 仪，以保留时间来确定 α -及 γ -亚麻酸甲酯。 5.4 定量分析 试样中 α或 γ -亚麻酸甲酯色谱峰面积或峰高与标准的比较定 量。 6. 分析结果 试样中 α或 γ -亚麻酸测定结果按（ 1）式计算 6.1 计算 χ ( % ) = × ρ × ν m × 1 0 0 0 A 1 A 2 × 0 . 9 5 2 × 1 0 0 %------（ 1） 式中： χ―― α或 γ -亚麻酸含量， %； A1――试样中 α或 γ -亚麻酸甲酯色谱峰面积或峰高； A2――标准使用液色谱峰面积或峰高； ρ ――标准使用液浓度 , mg/mL； ν――正己烷定容体积 , mL； m――试样质量 , g； 0. 952――亚麻酸换算系数。 脂肪试样再换算原保健食品试样中γ -亚麻酸和 α -亚麻酸的量。 6.2 结果表述 计算结果保留三位有效数字。 7. 技术参数 相对标准偏差： <10%.。 回收率： 93.0%～ 101.7% 30 8. 色谱参考图 图 1 标准色谱图 图 2 试样色谱图 气相色谱参考条件 色谱柱： FFAP（改性聚乙二醇 20M， 30m× 0.25mm i.d. 0.25μ m）。 柱箱温度： 215℃。进样口温度： 250℃ 。检测器温度： 260℃。 氮气： 50mL/min， 30∶ 1 分流；氢气： 45mL/min；空气： 500mL/min。 31 10.保健食品中免疫球蛋白 IgG 的测定 Determination of immunoglobulin content in health food ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 1 适用范围 本方法规定了初乳粉中免疫球蛋白 IgG 的测定。 本方法适用于初乳粉中免疫球蛋白 IgG 的测定。 本方法最小检出量： 2.0μ g。 本方法最小检出浓度：当取样量 0.1g，稀释至 25mL，进样量 20μ L 时，最 小检出浓度为 0.5mg/mL。 本方法最佳 线性范围： 0.2~1.0mg/mL。 2 方法原理 根据高效亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白 IgG 与配基连 接，在 pH2.5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白 IgG。 3 试剂 3.1 pH6.5 0.05mol/L 磷酸盐缓冲液 ········· A液 3.2 pH2.5 0.05mol/L 甘氨酸盐酸缓冲液········ B液 3.3 IgG 标准贮备液：称取 IgG 标准品（ Sigma 化学公司 ） 0.0100g,用 pH6.5 0.05mol/L磷酸盐缓冲液溶解并定容至 10.0mL,摇匀，浓度为 1.0mg/mL。 3.4 IgG标准系列溶液：以 IgG标准贮备液，用 pH6.5 0.05mol/L 磷酸盐缓冲 液稀释成含 IgG 0.2mg/mL, 0.4mg/mL, 0.6mg/mL, 0.8mg/mL, 1.0mg/mL 的标准 系列。临用时配制。 4 仪器和设备 HPLC仪具紫外检测器和梯度洗脱装置。 5 分析步骤 5.1 试样处理：称取 0.1g（精确至 0.001g）试样，用 A液稀释至 25.0mL,摇匀， 通过 0.45μ m微孔滤膜后进样。 5.2.1 先用 5 倍柱体积的重 蒸水洗柱，再用 10 倍柱体积的 A 液平衡柱，进样， 按洗脱程序进行洗脱。 5.2.2 HPLC参考条件 色谱柱： Pharmacia HI-Trap Protein G 柱， 1mL。 波长： 280nm 移动相： A液 B液 进行梯度洗脱，见下表。 梯度洗脱表： Time Flow mL/min A% B% Gradient 0 0.4 100 0 ※ 4.5 0.4 100 0 6 5.5 0.4 0 100 6 32 15.0 0.4 0 100 6 15.5 0.4 100 0 6 22.0 0.4 100 0 6 6 分析结果表示 6.1 计算 1000100 m VCx 式中 x：试样中 IgG的含量， g/100g； m：试样的质量， g； C：被测液中 IgG的含量， mg/mL； V：试样定容的体积， mL。 6.2 结果表示：计算结果保留三位有效数字。 7 技术参数 允许差 :≤ 5% 回收率 :94.4~95.1% 8 色谱图 IgG 峰 IgG 峰 33 11.保健食品中水溶性粗多糖的测定方法 Determination of water-soluble crude polysaccharide in health food 1. 范围 本方法规定了保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在 10000以上的水溶性 粗多糖的测定方法。 本方法适用于保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在 10000以上的水溶性 粗多糖的测定。 本方法最低检出浓度： 5.0mg/L。 本方法最佳线性范围： 5.0ug/mL—200ug/mL。 2. 原理 食品中分子量 >10000的高分子物质在 80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单和 低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结 构的水溶性多糖 ，用苯酚 -硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其颜色 强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以葡萄糖为标准参照物并以此计算 食品中水溶性粗多糖含量。 3．试剂 本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去 离子水或同等纯度 蒸馏水。 3.1乙醇溶液 (80%):20mL 水中加入无水乙醇 80mL,混匀。 3.2氢氧化钠溶液 (100g/L):称取 100g氢氧化钠 ,加水溶解并稀释至 1L,加入固体 无水硫酸钠至饱和 ,备用。 3.3 铜试剂储备液 :称取 3.0gCuSO4.5H2O,30.0g 柠檬酸钠 ,加水溶解并稀释至 1L, 混匀备用。 3.4铜试剂溶液：取铜储备液 50mL，加水 50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠 12.5g 并使其溶解。临用新配。 3.5洗涤剂：取水 50mL，加入 10mL铜试剂溶液， 10mL氢氧化钠溶液，混匀，临 34 用 新配。 3.6硫酸溶液（ 10%）：取 100mL浓硫酸加入到 800mL左右水中，混匀，冷却后稀 释至 1L。 3.7苯酚溶液（ 50g/L）：称取精制苯酚 5.0g，加水溶解并稀释至 100mL，混匀。 溶液置冰箱中可保存一月。 3.8 葡萄糖标准储备溶液 :精密称在硫酸干燥器中干燥至恒重的葡萄糖标准 0.5000g,加溶解 ,并定容至 50mL,混匀 ,置冰箱中保存。此溶液每毫升含 10.0mg 葡萄糖。 3.9 葡萄糖标准使用液 :吸取葡萄糖标准储备液 1.00mL,置于 100mL 容量瓶中 ,加 水至刻度 ,混匀 ,置冰 箱中保存。此溶液每毫 升含葡萄糖 0.10mg。 4．仪器 4.1分光光度计 4.2离心机 4.3旋转混匀器 5. 分析步骤 5.1标准曲线制备 : 精密吸取葡萄糖标准使用液 0.00,0.10,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00 mL(相 当于葡萄糖 ,0.010,0.020,0.040,0.060,0.080,0.10mg)分别置于 25mL 比色管中 , 准确补充水至 2.0mL,加入 50g/L苯酚溶液 1.0mL,在旋转混匀器上混匀 ,小心加入 浓硫酸 10.0mL,于旋转混匀器上小心混匀 ,置沸水浴中煮沸 2min.,冷却后用分光 光 度计在 485nm波长处以试剂空白溶液为参比 ,1cm比色皿测定吸光度值。以葡 萄糖浓度为横坐标 ,吸光度值为纵坐标 ,绘制标准曲线。 5.2试样处理 5.2.1试样提取 :称取混合均匀的固体试样 2.0g,置于 100mL容量瓶中 ,加水 80mL 左右 ,于水浴上加热 2h,冷却至室温后补加水至刻度 ,混匀 ,过滤 ,弃去初滤液 ,收 集余下滤液供沉淀多糖。 5.2.2沉淀粗多糖 :精密取 5.2.1滤液 5.0mL或液体试样 5.0mL,置于 50mL离心管 中 ,加入无水乙醇 20mL,混匀 5min.,以 3000rpm 离心 5min.,弃去上清液。残渣 用 80%乙醇溶液数毫升洗涤 ,离心后弃上清液 ,反复 3—4次操作。残渣用水溶解并定 35 容至 5.0mL,混匀 ,供沉淀葡聚糖。 5.2.3沉淀葡聚糖 :精密取 5.2.2溶液 2mL置于 20mL离心管中 ,加入 100g/L氢氧 化钠溶液 2.0mL，铜试剂溶液 2.0mL,沸水浴中煮沸 2min.,冷却后以 3000rpm 离 心 5min.,弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤 ,离心，弃去上清液 ,反复 3 次 操作 ,残渣用 100mL/L硫酸溶液 2.0 mL溶解并转移至 50mL容量中 ,加水稀释至刻 度 ,混匀。此溶液为试样测定液。 5.3 试样测定 :精密吸 取试样测定液 2.0 mL 置于 25 mL 比色管中 ,加入 50g/L 苯 酚溶液 1.0 mL,在旋转混匀器上混匀后 ,小心加入浓硫酸 10.0mL后于旋转混匀器 上小心混匀 ,置沸水浴中煮沸 2min.,冷却至室温，用分光光度计在 485nm波长处 , 以试剂空白为参比 ,1cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖含量 ,计 算试样中水溶性粗多糖含量。同时作试样空白实验。 5． 4 分析结果表述 试样中水溶性粗多糖的含量按式（ 5.4.1）计算。 5． 4． 1计算 642 53121 )( VVVm VVVmmX 式中 : x—试样中水溶性粗多糖含量 (以葡萄糖计 ),mg/g； m1---试样测定液中葡萄糖的质量 ,mg； m2---试样空白液中葡萄糖质量 ,mg； m---试样质量 ,g； V1---试样提取液总体积 ,mL； V2---沉淀粗多糖所用试样提取液体积 ,mL； V3---粗多糖溶液体积 ,mL； V4---沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液体积 ,mL； V5 --试样测定液总体积 , mL； V6---测定用试样测定溶液体积 ,mL。 5． 4． 2 结果表示 计算结果保留两位有效数字。 6. 技术参数 36 回收率：不同食品中不同浓度加标回收的回收率为 87.8～ 110.8%。 精密度：同一试样 10次测定结果的 RSD为 5.8%。 干扰因素：测定过程中避免碳水化合物的玷污干扰。 37 12.保健食品中人参皂甙高效液相色谱测定 Determination of ginsenosides in health food by high-performance liquid chromatography 1. 适用范围 本方法规定了人参含片、人参冲剂、人参茶、人参胶囊等以人参为主要原料 的保健食品中人参皂甙的含量的 HPLC 的测定方法。 本方法适用于人参含片、人参冲剂、人参茶、人参胶囊等以人参为主要原料 的保健食品中人参皂甙的含量的 HPLC 的测定方法。 本方法的六种皂甙的最低检出量为 10 mg/kg。 本方法的六种皂甙的最佳线性范围： 0.1mg/mL～ 1mg/mL。 2. 原理 将试样中的人参皂甙溶解、提取，经净化处理后，使用梯度洗脱反相高效液 相色谱进行分离，紫外检测器（ UV）检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标 法定量，适用于保健食品中人参皂甙 Re、 Rg1、 Rb1、 Rc、 Rb2、 Rd 的同时定量 分析。 3. 试剂 实验用水为去离子水。 3.1 乙腈：色谱纯， 200nm 吸光度值为 0.021。 3.2 甲醇：分析纯。 3.3 101 大孔吸附树脂。 3.4 高效液相色谱流动相：梯度淋洗 A 液为乙腈， B 液为水。 3.5 人参皂甙 Re、 Rg1、 Rb1、 Rc、 Rb2、 Rd 标准品： 含量大于 98％（ HPLC）。 3.6 人参皂甙 Re、 Rg1、 Rb1、 Rc、 Rb2、 Rd 标准溶液的配制： 配制人参皂甙 Re、 Rg1、 Rb1、 Rc、 Rb2、 Rd 标准储备液，浓度分别为 10mg/mL； 再以此储备液配制成混合标准系列溶液，浓度范围为 0.1mg/mL～ 1mg/mL；所有 标准溶液均用甲醇配制。 4. 仪器设备 4.1 高效液相色谱仪：双高压输液泵，附紫外检测器。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。 4.4 水浴锅。 5. 分析步骤 5.1 固体试样处理：取片剂或胶囊内容物研成粉末，并过 20 目筛； 精确称取该 粉末样适量于 50mL具塞试管中，加水 50ml 于超声波清洗器中超声提取 30 分钟， 取出，待溶液恢复常温后，准确取出 10ml，通过 D－ 101 大孔吸附树脂净化柱（大 38 孔吸附树脂使用前先经甲醇浸泡，水洗，装成 10cm 长小柱），小柱先用 10ml 水 冲洗，弃去水液之后，用 70%甲醇 25 mL 洗脱皂甙，收集甲醇溶液，水浴上蒸 干，残渣以甲醇溶解并定容至 5mL，该样液离心后过 0.5μ m 膜，滤液进行色谱 分析。 5.2 液体试样处理： 含的液体试样：取一定量的试样于水浴上蒸干，残渣以 50mL 水超声提取 30 分钟，余下步骤与 5.1 相同。 5.3 测定： 5.3.1 液相色谱参考条件 5.3.1.1 色谱柱：反相 C18 柱 , 4.6 x 250 mm， 5μ m 5.3.1.2 紫外检测器：检测波长 203nm 5.3.1.3 梯度淋洗条件： 时间（分 钟 乙腈（％） 水（％） 流速 (mL./min) 梯度曲线 0 16 84 1.0 1 20 18 82 1.0 6 55 40 60 1.0 6 65 40 60 1.0 6 75 100 0 1.0 1 80 16 84 1.0 1 5.3.1.4 柱温： 35°C 5.3.2 色谱分析 5.3.2.1 标准曲线的制备 将混合标准系列溶液均取 5μ L 进 HPLC 分析，用峰面积对浓度作各皂甙的 标准回归曲线。 5.3.2.2 试样测定 取 5μ L 试样净化液进高效液相色谱分析，以绝对保留时间定性，用峰面积 通过各皂甙的标准曲线定量计算试样中人参皂甙 Re、 Rg1、 Rb1、 Rc、 Rb2、 Rd 的含量。 6. 分析结果表述 6.1 计算 C × 5× 5 × 100 试样中各人参皂甙的含 量（ g/100g）＝ m × 1000 式中： C 试样溶液中各人参皂甙的含量， mg/mL； m 试样质量， g； 试样中总人参皂甙的含量（ g/100g）＝ CRe ＋ CRg1 ＋ CRb1 ＋ CRc ＋ CRb2 ＋ CRd 39 式中： CRe (g/100g)：试样中 Re 的含量 CRg1 (g/100g)：试样中 Rg1 的含量 CRb1 (g/100g)：试样中 Rb1 的含量 CRc (g/100g)： 试样中 Rc 的含量 CRb2 (g/100g)：试样中 Rb2 的含量 CRd (g/100g)： 试样中 Rd 的含量 6.2 结果表示： 计算结果保留三位有效数字 7. 色谱图 白参 Rb1 Rc Rb2 Rd Re Rg1 Rf Re 茎叶皂甙 Rd Rg1 Rb1 Rb2 Rc 西洋参 Re Rd Rg1 Rb1 Rc Rb2 红参 Rg1 Rb1 Re Rc Rb2 Rd Rf 40 13.保健食品中原花青素的测定 Determination of procyanidins in health food 1 范围 本方法规定了保健食品中原花青素的测定方法。 本方法适用于保健食品中原花青素的含量测定。 本方法最低检出量为 3μ g，最低检出浓度为 3μ g/mL。 本方法最佳线性范围： 3～ 150μ g/mL。 2 原理 原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色，但经 过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。本法用分光光度法测定原花青 素在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。 3 试剂 3.1 甲醇 分析纯。 3.2 正丁醇 分析纯。 3.3 盐酸 分析纯 。 3.4 硫酸铁铵 NH4Fe（ SO4） 2· 12H2O溶液：用浓度为 2mol/L盐酸配成 2%（ w/v） 的溶液。 3.5 原花青素标准品 葡萄籽提取物，纯度 95%。 4 仪器 4.1 分光光度计 4.2 回流装置 5 分析步骤 5.1 试样的制备 5.1.1 片剂 取 20片试样，研磨成粉状。 5.1.2 胶囊 挤出 20 粒胶囊内容物，研磨或搅拌均匀，如内容物含油，应将 内容物尽可能挤出。 5.1.3 口服液 摇匀后取样。 5.2 提取 5.2.1 粉状试样 称取 50— 100mg试样置于 50mL容量瓶中，加入 30mL甲醇， 超声处理 20min，放冷至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，离 心或放置至澄清后取 上清液备用。 5.2.2 含油试样 称取 50mg 试样置于小烧杯中，用 20mL 甲醇分数次搅拌， 将原花青素洗入 50mL 容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。 5.2.3 口服液 吸取适量样液（取样量不超过 1mL）置于 50mL 容量瓶中，加 甲醇至刻度，摇匀。 5.3 测定 41 5.3.1 标准曲线 称取原花青素标准品 10.0mg 溶于 10mL甲醇中，吸取该溶液 0、 0.1、 0.25、 0.5、 1.0、 1.5mL 置于 10mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇 匀。各取 1mL测定。与试样测定方法相同。 5.3.2 试样测定 将正丁醇与盐酸按 95:5 的体积比混合后，取出 6mL 置于具 塞锥瓶中，再加入 0.2mL硫酸铁铵溶液和 1mL 试样溶液，混匀，置沸水浴回流， 精确加热 40min后，立即置冰水中冷却，在加热完毕 15min后，于 546nm 波长处 测吸光度，由标准曲线计算试样中原花青素的含量。显色在 1小时内稳定。 6 分析结果表述 试样中原花青素测定结果按（ 1）式计算 6.1 计算： m1× v× 1000 X（ %） = ——————————— × 100 m× 1000× 1000 式中： X— 试样中原花青素的百分含量 g/100g； m1— 反应混合物中原花青素的量 μ g； v— 待测样液的总体积； m— 试样的质量 mg。 6.2 结果表示 计算结果保留三位有效数字。 7 技术参数 相对标准偏差：＜ 10% 回收率： 84.6~94.4% 。 42 14.保健食品中核苷酸的测定 Determination of nucleotide in health food 1 范围 本方法规定了以液相色谱法测定保健食品中的核苷酸。 本方法适用于作为功效成分添加于婴幼儿配方奶粉中核苷酸的测定。 本方法检出限：胞嘧啶核苷（ CMP） 0.04μ g/ mL、脲嘧啶核苷（ UMP） 0.05 μ g/ mL、腺嘌呤核苷（ AMP） 0.05μ g/ mL、鸟嘌呤核苷（ GMP） 0.06μ g/ mL、 次黄嘌呤核苷（ IMP） 0.04μ g/ mL。 本方法线性范围：胞嘧啶核苷（ CMP） 0.992～ 12.4μ g/ mL，脲嘧啶核苷（ UMP） 1.17～ 14.6μ g/ mL、腺嘌呤核苷（ AMP） 1.01～ 12.6μ g/ mL、鸟嘌呤核苷（ GMP） 0.948～ 12.3μ g/ mL、次黄嘌呤核苷（ IMP） 1.30～ 16.3μ g/ mL。 2 原理 将试样溶解、去除蛋白后 , 使用氨基固相萃取柱对核苷酸进行净化富集，根 据高效液相色谱紫外检测器在 254nm处的响应进行定性定量。 3 试剂 除非另有说明 , 在分析中仅使用确定为分析纯的试剂和双蒸水。 3.1 甲醇 优级纯。 3.2 乙酸。 3.3 磷酸二氢钾。 3.4 磷酸氢二钾。 3.5 季铵盐固相萃取柱。 3.6 核苷酸标准储备溶液：准确称量经 100℃， 4h 干燥处理的标准品胞嘧啶核 苷（ CMP） 100mg，脲嘧啶核苷（ UMP）、腺嘌呤核苷（ AMP）、鸟嘌呤核苷（ GMP）、 次黄嘌呤核苷（ IMP）各 40mg，加水定容至 100mL。 3.7 核苷酸标准使用液： 将核苷酸标准储备溶液用 0.25mol/L,pH=3 的磷酸二 氢钾稀释 100倍 。 4 仪器设备 4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（ UV）。 5 分 析步骤 5.1 试样处理 5.1.1 准确称取 10g 试样于 100mL容量瓶中，加入约 50℃热水 80mL，彻底混匀。 当试样液达到室温后用水定容至刻度。 5.1.2 准确吸取 10mL试样溶液至 100mL容量瓶中，加入 0.5％乙酸 5mL、水 10mL， 混匀后静置 5min以沉淀蛋白。用水定容至刻度，混匀后过滤，弃去数 mL初滤液 后收集约 30mL滤液。 5.1.3 将季铵盐固相萃取柱先用 10mL甲醇、 10mL水活化后，再将 20mL试样滤 43 液过滤 ,以 1mL水清洗萃取柱，用 0.25mol/L,pH=3.5磷酸二氢钾溶液 洗脱出 5mL 滤液。全部过程需要控制流速 1滴 /秒。 5.2 液相色谱参考条件 5.2.1 色谱柱 : C18 柱 3.9× 150mm。 5.2.2 柱温： 25℃。 5.2.3 紫外检测器：检测波长 254nm。 5.2.4 流动相： 0.01mol/L磷酸二氢钾： 0.1mol/L磷酸氢二钾＝ 480： 20。 5.2.5 流速： 0.6mL/min。 5.2.6 进样量： 10L。 5.2.7色谱分析：量取 10μ L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定 性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。 5.2.8 保留时间 在上述色谱条件下 , 5 种核苷酸的保留时间见色谱图 , 浓度分别为 胞嘧啶核苷 （ CMP） 12.4μ g/mL，脲嘧啶核苷（ UMP） 14.6μ g/mL、腺嘌呤核苷（ AMP） 16.3 μ g/mL、鸟嘌呤核苷（ GMP） 12.6μ g/mL、次黄嘌呤核苷（ IMP） 12.3μ g/mL。 5.3 分别配制浓度为 1.0、 2.0、 5.0、 10.0、 16.0μ g/mL 的 4 种核苷酸标准溶 液 , 在给定的仪器条件下进行液相色谱分析 , 以峰面积对浓度作标准曲线。 6 分析结果表述 6.1 计算 1 0 0 0 1 0 05 2 1 mh KChX 式中： X － 试样中核苷酸的含量， mg/100g； h1 － 试样峰高或峰面积； C － 标准溶液浓度， g/mL； K － 稀释倍数； h2 － 标准溶液峰高或峰面积； m － 试样量， g。 6.2 结果表示：检测结果保留三位有效数字。 8 技术参数 回收率：回收率在 85.0％～ 96.7％之间。 使用相同方法对同一试样平行测定的绝对差值在 10%范围内。 44 15.保健食品中洛伐 他丁含量测定 Determination of lovastatin in health food 1 范围 本方法规定了保健食品中洛伐他丁含量的测定方法。 本方法适用于洛伐他丁作为功效成分添加于片剂、胶囊以及红曲发酵原料等 试样类型中含量的测定。 本方法的最低检出量 2.0mg/kg。 本方法的最佳线性范围 2.00～ 300 μ g/mL。 2 原理 将酸性介质中的试样使用三氯甲烷进行提取 ，挥干提取溶剂，以流动相定容， 根据高效液相色谱紫外检测器在 238nm处的响应进行定性定量。 3 试剂 3.1 甲醇 色谱纯。 3.2 三氯甲烷 分析纯。 3.3 磷酸 分析纯。 3.4 洛伐他丁标准储备液 准确称量洛伐他丁标准品 0.0400g，加入检测用流 动相并定容至 100mL。此溶液每 mL含 0.4mg 洛伐他丁。 3.4 洛伐他丁标准使用液 将洛伐他丁标准储备溶液用流动相稀释 10倍。此溶 液每 mL含 40g洛伐他丁。 4 仪器设备 4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（ UV） 4.2 超声波清洗器 4.3 涡旋混匀器 4.4 离心机 4.4 真空泵 5 分析步骤 5.1 试样处理： 5.1.1 将片剂、胶囊或红曲发酵产物试样粉碎并混合均匀 , 根据试样中洛伐他 丁含量准确称取一定量试样于 50mL试管中，加入 10.0mLpH=3磷酸水溶液。超声 提取 10min后再加入 10.0mL三氯甲烷，置于涡旋混匀器 3min。静置后去掉上层 水相， 将三氯甲烷层以 3000rpm/min离心 3min。 5.1.2 准确吸取上清液 1.0mL至 5mL试管中，将试管置于 50℃左右水浴中 使用 真空泵减压干燥至挥去全部溶剂。 5.1.3 向试管中加入流动相并定容至 5.0mL，彻底混匀 ,经 0.45m 滤膜过滤后 待进样。 5.2 液相色谱参考条件 45 5.2.1 色谱柱 : C18 柱 4.6× 250mm 5.2.2 柱温：室温 5.2.3 紫外检测器：检测波长 238nm 5.2.4 流动相：甲醇：水 : 磷酸＝ 385： 115： 0.14 5.2.5 流速： 1.0mL/min。 5.2.6 进样量： 10L。 5.2.7 色谱分析：量取 10μ L标准溶液系列及试样溶液注入色谱仪中，以保留时 间定 性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。 5.2.8 色谱图 色谱图中洛伐他丁浓度为 25μ g/mL 5.3标准曲线制备 : 配制浓度为 2.0、 10、 50、 100、 300μ g/mL洛伐他丁标准溶 液 , 在给定的仪器条件下进行液相色谱分析 , 以峰高对浓度作标准曲线。 5.4分析结果表示 5.4.1计算 1000 10050 2 1 mh chX 式中： X－试样中洛伐他丁的含量， g/100g； h1－试样峰高或峰面积； c －标准溶液浓度， mg/mL； 50－试样稀释倍数； h2－标准溶液峰高或峰面积； m－试样量， g。 5.4.2 结果表示 : 检测结果保留三位有效数字。 6 技术参数 准确度 方法的回收率在 93.3%～ 108.4%之间 允许差 平行样测定相对误差 ± 5%。 46 16.保健食品中植物类功效成分鉴别试验方法 Distinguish method of plant function component in health food 1 范围 1 本方法适用于保健食品中人参、西洋参、陈皮、甘草、大黄、银杏叶、芦荟、 葛根等植物中的功效成分的鉴别。 2 本方法规定了保健食品中人参、西洋参、陈皮、甘草、大黄、银杏叶、芦荟、 葛根等植物中的功效成分的鉴别方法。 一 . 陈皮 1. 供试液制备 1.1 片剂或胶囊 称取研细的试样 2g，加甲醇 20mL，水浴上回流 20min 或超声 处理 15min，过滤，取滤液 10mL，浓缩至干，加甲醇 1mL溶解残渣作为供试品溶 液。 1.2 糖块：取本 品 30g，加 30mL 水使溶解，用稀盐酸调节 PH 至 5— 6，以水饱 和的正丁醇提取 3 次（ 25、 25、 20mL）合并正丁醇液，用水洗两次（ 30mL、 30mL） 取正丁醇液的 1/3 量置水浴上蒸干，残留物用甲醇 1mL溶解制成供试品溶液。 2. 对照液制备 称取陈皮对照药材 0.3g，同上处理。另取橙皮甙对照品加甲醇 制成饱和溶液，作为对照品溶液。 3. 薄层板 硅胶 G加 5%氢氧化钠溶液的自制板 5× 20cm，厚 300μ m。 4. 点样 供试液点样 2— 4μ L，对照液点样 2μ L。 5. 展开剂 S-1 乙酸乙酯 — 甲醇 — 水（ 100:17:13） S-2 甲苯 — 乙酸乙酯 — 甲酸 — 水（ 20:10:1:1）上层溶液 6. 展开方式 上行展开两次展开：展距：第一次 3cm，第二次 8cm。 7. 显色 喷以 3%三氯化铝乙醇溶液后略加热吹干，置紫外光灯 365nm 下检视。 8. 色谱识别 供试品色谱除观察到橙皮甙荧光斑点外，供试品与对照药材在 相同的位置上显相同颜色的荧光点。在色谱的中部有明显的 3 个兰 -兰白色荧光 主斑点，为主要鉴别特征。 47 10. 艾得康牌立即俏胶囊 11. 陈皮对照药材 12. 陈皮甙 二 . 大黄 1. 供试液制 备 取研细的片剂或胶囊粉末 0.1g，加甲醇 20mL 浸渍 1h，过滤， 取滤液 5mL 蒸干，加水 10mL 使溶解，再加盐酸 1mL 置沸水浴上加热 30min， 立即冷却，用乙醚提取两次，每次 20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷 溶解使成 1mL 作为供试品溶液。 2. 对照液制备 取大黄对照药材 0.1g，同法制成对照药材溶液，另取大黄酸对 照品，加甲醇制成每 1mL 含 1mg 的溶液作为对照品溶液。 3. 薄层板 硅胶 H 加 0.3%羧甲基纤维素钠自制板， 5× 20cm，厚度 300μ m。 4.点样 分别点样 4μ L。 5.展开剂 正己烷 — 乙酸乙酯 — 甲酸（ 30:10:0.5） 6.展开方式 上行 8cm。 7.显色 紫外光灯（ 365nm）下检视，再置氨蒸气中熏数分钟后，日光下检视。 8.色谱识别 紫外光灯（ 365nm）下， 供试品 色谱 中在与对照药材色谱相应的位 置上显相同的 5 个橙黄色主斑点，在与大黄酸对照品色谱相应的位置上显相同的 橙黄色荧光斑点。经 氨蒸气熏后，置日光下检视 斑点变为红色。 48 1. 金多靶减肥降脂素 2. 大黄对照药材 三 . 甘草 1 供试液制 备 1.1 固体试样 1.1.1 片剂及不含油的胶囊 称取研细的试样 2g 置于具塞锥瓶中，加乙醚 40mL 置水浴上加热回流 1h，过滤，药渣加甲醇 30mL 置水浴上加热回流 1h，过 滤，滤液蒸干，残渣加水 40mL 使溶解，用水饱和的正丁醇提取 3 次，每次 20mL 合并正丁醇提取液，用水洗涤 3 次后置水浴上蒸干，残渣加甲醇 2mL 使溶解作 为供试品溶液。 1.1.2 含油胶囊 称取试样 2g 置于折叠滤纸上，用石油醚分数次洗去油脂，再 将滤纸上的试样转入具塞锥瓶中，按 1.1.1 项下自“加乙醚 40mL”起依法操作。 1.2 液体试样 取样 10mL，加水稀释至 40mL。 糖块 取适量试样加水 40mL 溶解。 按 1.1.1 项下自“用水饱和的正丁醇提取 3 次”起依法操作。 2 对照液制备 取甘草对照药材同法制成对照药材溶液。再取甘草酸铵对照 品，加甲醇制成每 1mL 含 2mg 的溶液，作为对照品溶液。 3 薄层板 硅胶 G 加 1%氢氧化钠溶液的自制板， 5× 20cm，厚度 300μ m。 4 点样 供试液与对照液分别点样 1— 2μ L。 49 5 展开剂 乙酸乙酯 — 甲酸 — 冰乙酸 — 水（ 30:2:2:4） 6 展开方式 展开箱用展开剂预平衡 15min，上行展开，展距 8cm。 7 显色 喷以硫酸乙醇 (1→ 10),105℃加热数分钟至斑点显色清晰 , 置紫外 光灯（ 365nm）下检视。 8 色谱识别 供试品 色谱与对照药材色谱基本相符，甘草酸位于色谱的下部。 1. 鹰牌川贝枇把糖 2. 甘草对照药材 3. 甘草酸 四 . 人参 、 西洋参 1 供试液制备 1.1 固体试样 1.1.1 片剂及不含油的胶囊 称取研细的试样 2g 置于具塞锥瓶中，加三氯甲烷 40mL，置水浴上加热回流 1h，弃去三氯甲烷液，药渣挥干残留溶剂，加水 0.5mL 搅匀湿润后，加水饱和的正丁醇 10mL，超声处理 30min，吸取上清液，加氨试 液（ 400→ 1000） 3 倍量，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，加甲醇溶解使成 1mL， 作为供试品溶液。 50 1.1.2 含油胶囊 称取试样 2g 置于折叠滤纸上，用石油醚分数次洗去油脂，再 将滤纸上的试样转入具塞锥瓶中，自“加三氯甲烷 40mL”起同上操作。 1.2 液体试样 取 样液 10mL，加水饱和正丁醇 20mL，振摇提取，分取正丁 醇层，加氨试液（ 400→ 1000） 3 倍量，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，加甲 醇溶解使成 1mL，作为供试品溶液。 2 对照液制备 取人参或西洋参对照药材约 1g，依上法同样处理，为药材对照 液。另取人参皂甙 Rb1 Re Rg1 F11 对照品，加甲醇溶解，使成每 1mL 各含 2mg 的混合溶液，作为对照品溶液。 3 薄层板 硅胶 G 自制板， 5× 20cm，厚度 300— 500μ m。 4 点样 供试液 2— 10μ L，对照液 2μ L，点样后的薄层板置硅胶干燥 器中过 夜。 5 展开剂 三氯甲烷 — 乙酸乙酯 — 甲醇 — 水（ 15:40:22:10）置于 100mL 具塞 量筒中混匀，置 4℃冰箱中放置，待分层至上层体积为 5mL时，将上层液体吸出， 弃去，摇匀后使用。 6 展开方式 展开槽内加入展开剂 10mL，槽内用硫酸控制相对湿度为 42%（硫 酸 57mL+水 100mL）。室温 25℃，平衡 15min 后，上行展开 12— 14cm，取出挥干 溶剂。 7 显色 硫酸乙醇溶液（ 1→ 10） 105℃加热数分钟至斑点显色清晰，分别置日 光和紫外光灯（ 365nm）下观察 8 色谱识别 供试品的可见光色谱及荧光色谱与对照药材色谱基本相符，主斑 点自下而上为 Rb1 Re Rg1 。西洋参用与人参相同方法制备供试液，在薄层色 谱上，西洋参含有的人参皂甙 F11，人参不含，而人参含有的人参皂甙 Rf ，西 洋参不含，可作为人参与西洋参鉴别的依据，人参皂甙 Rf 位于 Rg1 的上方， F11 位于人参皂甙 Rf 的上方。

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