SC10422000 奥利亚罗非鱼.pdf

s C 1 0 4 2 2 0 0 0 前言 奥利亚罗非鱼 原产于非洲 8 0 年代引进我国 为保护和保存引进的奥利亚罗非鱼的优良经济性 状 防止苗种生产中种质混杂和性状退化 并开展该鱼种质的有效监测 特制定本标准 本标准是 七五 八五 科技攻关成果的总结 本标准的附录A 附录B 附录C都是标准的附录 本标准由农业部渔业局提出 本标准由中国水产科学研究院长江水产研究所归口 本标准起草单位 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 本标准主要起草人 潘锋 王和海 胡玫 中华人民共和国水产行业标准 奥利亚罗非鱼 s c 1 0 4 2 一2 0 0 0 B l u e t i l a p i a 1 范围 本标准给出了奥利亚罗非鱼 O r e o c h r o m i s a u r e a 主要生物学性状 生长与繁殖 遗传学特性及检测 方法 本标准适用于奥利亚罗非鱼的种质检测 2 名称与分类 2 1 名称 2 学名 奥利亚罗非鱼 O r e o c h r o m i s a u r e a e 2 1 2 别名 蓝罗非鱼 奥利亚非娜 奥利亚丽绷等 2 2 分类位置 属妒形目 P e r c i f o r m e s 丽鱼科 C i c h l i d a e 孵光鳃罗非鱼属 O r e o c h r o mi s 3 主要生物学性状 3 1 外部形态特征 3 1 1 形态特征 体形侧扁 背部隆起 腹部呈弧形 无腹棱 吻圆钝 突出 口小端位 口裂不达眼前缘 无口须 体 披栉鳞 体色蓝灰色 鳃盖后部有一深蓝色斑块 咽喉部呈银灰色 体侧上鳞片中央的色素较边缘深 鱼体两侧有垂直暗带 成鱼背部略带蓝黑色 腹部颜色较淡 背鳍边缘红色 胸鳍淡灰色透明 臀鳍深 蓝色 尾鳍终生有蓝绿色斑点 不形成明显的纵向或横向暗带条纹 其末端平截不分叉 呈现橙红色 腹 鳍深蓝色 长有生殖突起 稚鱼青灰色带金色光泽 体侧有深灰色垂直暗带 背鳍硬棘幼鱼前期有一较大 黑点 以后逐渐消失 各龄鱼体色因环境改变而迅速变淡或加深 奥利亚罗非鱼外形见图1 a S C 1 0 4 2 一2 0 0 0 3 1 2 可数性状 3 1 2 1 背鳍鳍式 D X V XV 0 1 1 1 3 3 1 2 2 胸鳍鳍式 P 0 1 1 1 4 3 1 2 3 腹鳍鳍式 V 1 5 3 1 2 4 臀鳍鳍式 A 1 9 1 1 3 1 2 5 左侧第一鳃弓外侧鳃耙数 2 5 2 9 0 3 1 2 6 侧线断折 呈不连续两行 侧线鳞数 上段为 1 8 2 9 下段为 1 2 1 8 3 门 2 了 领齿 上下领有圆锥状领齿各为三列 最外一列为 Y 型 3 1 3 可量性状 可量比例性状变动值见表 t o 表 1 可量比例性状变动值 项目范围 全长 c m2 0 5 3 4 5 体长 c m1 7 0 2 9 6 体长 体高2 5 3 2 9 4 体长 头长 2 5 6 4 2 9 体长 尾柄长5 8 9 9 8 7 体长 尾柄高6 0 6 1 0 2 1 头长 吻长2 3 9 3 5 0 头长 眼径3 7 2 5 2 4 头长 眼间距2 0 6 2 3 5 注 此表为无锡地区2 至 3 龄奥利亚罗非鱼的实侧数据 3 2 内部结构特征 3 2 1 缥 缥分二室 前室较大 后室细长 3 2 2 肋骨 肋骨数 1 3 对 3 2 3 下咽齿 左 右下咽骨愈合 其上有浓密的蓖齿 3 2 4 脊椎骨 脊椎骨总数 颅后椎数 腹椎数 尾椎数之和 为2 9 3 0 3 2 5 腹膜 黑色 4 生长与怪殖 4 1 生长 池塘饲养条件下 不同年龄组鱼的体长和体重的理论值见表2 S C 1 0 4 2 一 2 0 0 0 表 2 不同年龄组鱼的体长和体重理论值 年龄 龄123 体长 c m1 3 0 6 士 0 4 71 9 4 9 士1 2 32 3 9 3 士1 4 9 体重 98 5 6 9 士1 0 1 72 3 1 9 5 士 3 7 64 1 7 1 4 士4 4 9 9 注 主要根据鳞片上的年轮数 在同等饲养条件下 雌鱼的生长率仅为同龄雄鱼的5 4 9 0 4 2 繁殖 4 2 1 性成熟年龄 雌 雄鱼初次性成熟为4 6 月龄 4 2 2 产卵 越冬鱼种在水温 2 4 2 6 条件下 饲养 1 1 5个月即可繁殖 年产卵 3 5次 每次间隔 1 5 3 0 d o 4 2 3 繁殖水温 繁殖最适水温为2 4 2 6 0C 水温低于 2 0 或高于3 0 0C 繁殖减少 4 2 4 怀卵量 不同年龄组鱼的个体怀卵量见表 3 表 3 不同年龄组鱼的个体怀卵量 年龄 龄12 3 体重 g 5 0 1 5 0 2 0 0 3 5 04 0 0 6 0 0 绝对怀卵量日 粒 2 5 0 6 0 08 0 0 1 2 0 01 3 0 0 2 5 0 0 相对怀卵ta 粒5 34 33 2 1 绝对怀卵f 指直观可数的卵位数 2 相对怀卵t 指单位体重 9 所含卵粒数 5 遗传学特性 5 1 同功酶 醇脱氢醇 A D H 电泳图谱 肝中AD H有 2 个位点 2 条谱带 无多态 见图 2 邸 即 靡 一 辱 0 图 2 奥利亚罗非鱼肝组织A D H同工酶电泳图谱 5 2 染色体数 体细胞染色体数2 摊 4 4 5 3 核型 雌 雄鱼核型完全一致 有亚中部着丝粒染色体 s m组 3 对 亚端部着丝粒染色体 s t 组 1 2 对 端 部着丝粒染色体 t 组 7 对 染色体育数 N F 5 0 见图3 e S C 1 0 4 2 一 2 0 0 0 八人几井 古住p nU 入 八 沪 侧 办 介 八 沪 i t 几八晚 八 八六 扣介 八 图 3 奥利亚罗非鱼染色体组型 核型公式 6 s m 2 4 s t 1 4 t 6 检测方法 6 1 生化遗传分析 6 1 1 电泳样品制备 将鱼杀死 取肝脏组织0 3 g 以4 倍体积0 3 的氧化型辅酶I 液匀浆 在冷冻离心机中以1 7 0 0 0 r m i n离心 2 次 第一次离心后 去除上层油膜 再第二次离心 至上层溶液澄清为止 取上清液点样 6 1 2 电泳步骤 使用水平平板电泳仪和浓度为7 5 Y o 聚丙烯酞胺凝胶 电极缓冲液采用E B T缓冲液 见附录A 标 准的附录 步骤为 a 预电泳 恒温 5 时 将预先制备好的象丙烯酸胺凝胶放在冷却板上 在 5 0 mA电流下 预电泳 3 0 mi n b 前电泳 预电泳后 用微量加样器在每个点样孔内加人 8 K L样品 在2 5 m A电流下 前电泳 1 0 m i n 再进行正式电泳 c 正式电泳 在 2 7 5 V电压下 电泳时间为3 5 h d 染色 将电泳后的电泳胶板放人在恒温箱3 7 保温的染色液中染色 至酶带清晰显示为止 染 色液配方见附录 B 标准的附录 62 染色体检测 6 2 1 标本制备 采用肾组织细胞加植物血凝聚素 P H A 短期培养法及空气自然干燥法 制片 吉姆萨 G i e m s a 染 色 吉姆萨染色液配方见附录C 标准的附录 6 2 2 计数 在光镜下 选取染色体铺散良好 完整的中期分裂相计数染色体数目 确定 2 n 数 6 2 3 形态分类 选择 1 0 个以上的分裂相 进行显微拍照 按放大照片对染色体组型分析 按形态归类 6 3 结果判定 各项测定结果 对照标准指标 综合分析判定 是否符合标准 同时 计算出符合标准的百分数 s C 1 0 4 2 一 2 0 0 0 附录A 标准的附录 E B T电极级冲液的配制 A l 原液配制 三轻甲基氛基甲烷 T r i s 6 5 4 g 乙二胺四乙酸钠盐 N a E D T A 3 5 1 g 蒸馏水1 3 0 0 m L 另称硼酸约2 7 g 用来调节p H值至8 6 并稀释至1 5 0 0 m L A 2 电极用液 正极用液 取原液 7 9 4 mL稀释至 1 0 0 0 mL 浓度为 0 2 8 6 m o l L 负极用液 取原液 1 1 1 m L稀释至 1 0 0 0 m L 浓度为0 0 4 m o l L 附录B 标准的附录 染 色 液 配 方 B l 0 2 5 m o l L T i r s H C I 染色级冲液的配制 称取T i r s 3 0 2 9 g 加燕馏水 9 0 0 m L 和盐酸调节p H值至8 0 再稀释至1 0 0 0 m L B 2 染色液配方 2 5 m o l 染色缓冲液 氧化型辅酶I 抓化硝基四氛哇兰 N B T 吩喃甲醋硫酸盐 P MS 9 5 乙醇 1 4 0 mL 2 2 mg 1 0 5 mL 1 0 5 mg 4 5 mL 附最C 标准的附录 古姆萨 G i e m s a 染色液配制 C l G i e m s a 染色母液的配制 称取 5 g G i e m s a 粉 量取3 3 m L甘油 在研钵中先用少I甘油与G i e m s a 粉混合 研磨至无颗粒 时再将剩余甘油加人 在5 6 条件下保温2 h 后 加人3 3 m L申醇 保存于棕色瓶内 C 2 0 2 m o l 确睑级冲液配制 C 2 1 A液 0 2 mo l L磷酸氢二钠 N a 2 H P O 液液 称取磷酸氢二钠 N a H P O H z 0 3 6 6 1 g 定容于1 L蒸馏水中 或称取磷酸氢二钠 N a z H P O s c 1 0 4 2 一2 0 0 0 2 H 2 0 7 1 6 4 g 定容于1 L蒸馏水中 C 2 2 B液 0 2 mo l L磷酸二氢钠 N a H 2 P O 溶液 称取磷酸二氢钠 N a H P O H 0 2 7 6 g 定容于1 L蒸馏水中 或称取磷酸二氢钠 N a