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临床生物化学习题1双缩尿法测血清白蛋白： 原理： 血清中蛋白质的肽键在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物，此反应和2个尿素分子缩合后生成的双缩尿在碱性溶液中与铜离子形成紫红色的反应相似，故称之双缩尿反应。这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清总蛋白含量成正比，经与同样处理的蛋白质标准也比较，即可得到蛋白质的含量。临床意义：1） 血清总蛋白浓度降低A蛋白质合成障碍:当肝功严重受损时，蛋白质合成减少，以减轻蛋白降低最为显著B蛋白质丢失增多：严重烧伤，大量血浆渗出；大出血；肾病综合征尿中长期丢失蛋白质；溃让性结肠炎可以从粪便中长期丢失一些蛋白质C营养不良或消耗增加：营养失调，低蛋白饮食，维生素缺乏症或慢性肠道疾病所引起的吸收不良是体内缺乏合成蛋白质的原料；长期换消耗病可导致血清总蛋白浓度降低D血浆稀释：如静脉注射过多低渗溶液或各种原因引起的水钠瀦流2升高A蛋白质合成增加：建元多发性骨髓瘤，是异常球蛋白增加，是血清总蛋白增加B血浆浓缩：如急性脱水，外伤性休克注意事项：A黄疸血清，严重溶血；葡萄糖，酚酞，溴磺酞钠对本法有明显的干扰，故用标准空白管来消除。但标本空白管吸光度太高，可影响测定的准确度B高脂血症浑浊血清会影响比色，消除用：取2支离心管，各加待测血清0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，倾去上清液，将是试管倒立于滤纸上吸取残余液体。想沉淀中分别加入双缩尿试剂及双缩尿空白试剂，在计算C本法也可用于血清总蛋白浓度的标准化，操作步骤完全与测定表本是相同，但显色温度需控制在（25+-1）度的范围内，以及使用经矫正的高级分光光度计进行比色，计算 血清总蛋白（g/l）=?2血清葡萄糖氧化酶法测定原理：葡萄糖氧化酶利用水和氧将葡萄糖氧化成葡萄酸，并释放过氧化氢，过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化物分解为水和氧，并将色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder，红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比临床意义：1） 生理性高血糖可见于摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时2） 病理性高血糖A糖尿病：常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者B内分泌功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进及对抗胰岛素分泌过多会出现高血糖，C颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢D脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻等也可引起血糖增高3） 生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动4） 病理性低血糖：特发性功能性低血糖多见，依次为药源性，肝原性，胰岛素瘤等A胰岛B细胞增生，使胰岛素分泌过多B对抗胰岛素的分泌不足，如垂体前叶机能减退使生长素，肾上腺皮质激素分泌较少C严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖原异生等功能减低，肝脏不能有限的调节血糖注意事项：A新配置的葡萄糖标准液主要是a型，故需放置2h以上，待变旋平衡后方使用B葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低C测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好D本法用血量终甚微，操作中应直接加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠E严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定邻甲苯胺法测定血清葡萄糖原理：在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺缩合，脱水生成希夫氏碱，经分子重拍生成蓝绿色化合物，其颜色深浅在一定范围内与血糖浓度成正比。临床意义：同氧化酶法注意事项：1、邻甲苯胺为浅黄色油状液体，易氧化。2、邻甲苯胺在冰醋酸中并不十分稳定，易氧化产生棕色物质而干扰比色，故在邻甲苯胺试剂中加入硫脲，使试剂有氧化作用，减少棕色干扰，增加试剂的稳定性，降低空白管的吸光度，并有一定的增色效应。3、沸水浴时废水一定要盖过管内的液面，否则温度不均匀，影响显色。乙酰丙酮显色发测定血清甘油三酯（TG）原理：血清甘油三酯经过正庚烷-异丙醇混合溶剂抽提，用氢氧化钾皂化生成甘油，在过点算的作用下甘油被氧化为甲醛，当有铵离子存在时，甲醛和乙酰丙酮发生缩合反应生成带荧光的黄色物质即3,5-二乙酰-1,4二氢二甲基吡啶，反应液颜色的身前与TG浓度成正比。临床意义：1、血清TG增高常见于家族性脂类代谢紊乱、肾病综合症、糖尿病、甲状腺功能减退，急性胰腺炎、糖原累积病、单道梗阻、原发性甘油三酯增高症、动脉粥样硬化等。2、血清TG降低比较少见，慢性梗阻性肺疾病、脑梗死、甲状腺功能亢进症、营养不良和消化吸收不良综合征等可引起血清TG的降低。注意事项：显色后吸光度随时间延长会有一定量的增高，故加样后要立即比色，当标本过多时，可置冰箱中逐管进行比色。血清胆固醇测定TC原理：胆固醇酯+H2O-（上胆固醇，下酸酶）胆固醇+游离脂肪酸 胆固醇+O2-（胆固醇氧化酶）三角号4-胆甾烯酮+H2O 2H2O2+4-氨基安替比林和酚-（POD）醌亚胺+4H2O临床意义：1、TC增高：常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症、糖尿病、肾病综合症、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。2、TC降低：常见于地址蛋白血症，贫血，败血症，甲状腺功能亢进，肝脏疾病，严重感染，营养不良，肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期。注意事项：试剂中酶的质量影响到测定结果还原钼蓝法测定血清磷原理：磷和钼酸铵在酸性溶液中生成磷钼酸复合物，对甲氨基酚硫酸盐还原生成钼蓝，与同样处理的标准液进行比色，可求的血磷的含量。试剂中加入聚山梨酯-80以抑制蛋白质干扰。临床意义血清磷增高见于：（1）甲状旁腺机能减退，由于肾小管对磷的重吸收增强使血磷增高。（2）排泄障碍：慢性肾炎晚期、尿毒症等磷酸盐排泄障碍而使血磷滞留（3）维生素D过多，促使肠道的钙磷吸收，使血清钙磷含量增高。（4）多发性骨髓瘤、淋巴瘤、白血病及骨折愈合期等可使血磷增高。血磷降低见于：（1）甲状旁腺机能亢进时，肾小管重吸收受抑制，尿磷排出增多，血磷降D低（2）维生素D缺乏所致的软骨病与佝偻病伴有继发甲状腺增生，使尿磷排泄增多，而血磷降低。 （3）碳水化合物吸收利用时，葡萄糖进入细胞内被酸化，磷可降低。（4）肾小管变性病变时，肾小管重吸收磷功能障碍，血磷偏低;长期服用制酸类药物可生成不溶性磷酸盐，吸收障碍，可是血磷降低。注意事项：血标本采用血清或肝素抗凝血。应避免使用枸橼酸钠、EDTA和草酸盐作抗凝剂。标本避免溶血。米吐尔试剂宜少量配置，放置时间不宜过长。二乙酰一呜测定血清尿素原理二乙酰一呜+水-酸性-二乙酰+羟胺二乙酰+尿素-酸性，加热-二嗪化合物（粉红色）临床意义：血液尿素浓度增高 分生理因素和病理性因素生理因素：高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量增高。血清尿素浓度男性比女性高0.30.5mmol/L,并随着年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均0.63mmol/ L.病理因素：（1）肾前性：最重要的原因是失水，因血液浓缩是肾血流量减少，肾小球滤过率减低致血液尿素浓度增加。见于剧烈呕吐、幽门梗阻、肠梗阻和长期腹泻等。（2）肾性：急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾衰竭、慢性肾盂炎及中毒性肾炎等影响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。（3）肾后性疾病：前列腺肥大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等都可使尿路阻塞，引起血液中尿素含量增高。1.血清尿素浓度降低较少见。严重肝病如急性黄色肝萎缩、肝硬化、肝炎合并广泛性坏死，尿素合成减少使血液尿素浓度降低。注意事项：1，试剂中加入氨基硫脲和镉离子可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象，因此，加热显色经冷却后，应及时比色。2.煮沸时间和煮沸时液体蒸发量影响结果。因此测定管和标准管的试管口径和煮沸时间要一致。煮沸时间延长吸光度而降低。3.尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需用去离子水作50倍以上稀释。赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶原理：L-丙氨酸+-酮戊二酸 （ALT） -丙酮酸+L-谷氨酸-丙酮酸+2,4-二硝基苯肼（碱性条件下）2,4-二硝基苯腙（红棕色，=505nm）利用比色分析原理将样品显色与丙酮酸标准品配制成的系列标准液比较，求出样品中ALT活性 临床意义：ALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细胞的可溶性部分。当肝脏受损时，此酶可释放入血，致血中该酶活性浓度增加，故测定ALT常作为判断指标。1.肝细胞损伤的灵敏指标 急性病毒性肝炎转氨酶阳性率为80%100%，肝炎恢复期，转氨酶转入正常。如在100U左右波动或再度上升为慢性活动性肝炎；重症肝炎或慢性重型肝炎时，再度上升的转氨酶在症状恶化的同时，酶活性会降低。以上说明，检测转氨酶可以观察病情的发展，并作预后判断。2.慢性活动性肝炎或脂肪肝转氨酶轻度增高（100200U），或属正常范围，且ASTALT。肝硬化、肝癌时ALT有轻度或中度增高，提示可能并发肝细胞坏死，预后严重。其他原因引起的肝损害，如心功能不全时，肝淤血导致肝小叶中央带细胞的萎缩或坏死，可使ALT、AST明显升高；某些化学药物如苯巴比妥、四氯化碳、砷剂等可不同程度的损害肝细胞，引起ALT的升高。3.其他疾病或因素亦会引起ALT有不同程度的增高，如骨骼肌损伤、多发性肌炎等亦可引起转氨酶升高。注意事项：1.丙酮酸标准液的配制 丙酮酸不稳定，见空气易发生聚合反应，生成多聚丙酮酸，而失去其化学性质。在配制标准曲线时，不会出现显色反应。此时应将变性的丙酮酸放在干燥箱（4055）23h，或干燥器中过夜后在使用。2.基质液中的-酮戊二酸和显色剂2,4-二硝基苯肼均为呈色物质，称量必须很准确。3.血清中ALT在温室可以保存2d，在4冰箱可保存1周，在-25可保存1个月。4.加入2,4-二硝基苯肼溶液后，应充分混匀，使反应完全。磷酸苯二钠比色法测定血清碱性磷酸酶原理：碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之水解释放出酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物，根据红色深浅确定ALP的活力。临床意义：在临床上，血清ALP活力测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断指标。1.血清ALP活性升高 肝胆疾病：阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸性肝炎、肝癌等；骨骼疾病：由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的碱性磷酸酶释放进入血液中，引起血清碱性磷酸酶