动物细胞培养.ppt

专题2 2动物细胞工程 动物细胞工程 其中 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 2 2 1动物细胞培养和核移植技术 教学目标 新课标要求简述动物细胞培养的过程 条件及应用 简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景 教学重点动物细胞培养的过程及条件 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 教学难点用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 资料 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植 但对于大面积烧伤病人来讲 健康皮肤很有限 请同学们想一想如何来治疗该病人 取该患者的皮肤进行细胞培养 获得足量的细胞后再移植 一 动物细胞培养 不能 动物细胞培养只能使细胞数目增多 动物细胞培养的目的是获得细胞或细胞产品 一 动物细胞培养 1 概念 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织 将它分散成单个细胞 然后 放在适宜的培养基中 让这些细胞生长和增殖 原理 细胞增殖 目的 获得细胞或细胞产品 2 过程 动物胚胎或幼龄动物的组织 器官 剪碎组织 分散成单个细胞 细胞悬液 10 50代细胞 发生癌变无限传代 培养液 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 原代培养 传代培养 不死性细胞 继续传代培养 第1代细胞到第10代细胞 细胞的生长特性 细胞贴壁 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上 称为细胞贴壁 要求 培养瓶或培养皿的内表面光滑 无毒 易于贴附 细胞的接触抑制 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时 细胞就会停止分裂增殖 这种现象称为细胞的接触抑制 细胞贴壁 培养器皿 返回 动物胚胎或幼龄动物的组织 器官 细胞悬浮液 原代细胞 10代细胞 无限增殖 单个细胞 加培养液 细胞株 细胞系 原代培养 第1代细胞传至10代左右传代培养 将原代细胞从培养瓶中取出 分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养 细胞株 10到40 50代的细胞 遗传物质没发生改变 细胞系 超过50代的细胞 遗传物质发生改变 失去接触抑制 可无限增殖 过程点拨 等同于癌细胞 寻根问底 1 进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞 说明细胞间的物质主要是什么成分 用胃蛋白酶行吗 细胞间的成分主要是蛋白质 不行 胃蛋白酶适宜的PH约为2 当PH 6时 胃蛋白酶就会失去活性 而胰蛋白酶适宜PH为7 2 8 4 多数动物细胞培养的适宜PH为7 2 7 4 胃蛋白酶在此环境中没有活性 胰蛋白酶在此环境中活性较高 因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化 2 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗 为什么 细胞膜成分 磷脂和蛋白质长时间的作用也会消化细胞膜蛋白 对细胞有损伤作用 因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间 3 目前使用的或冷冻保存的正常细胞为几代以内的 10代以内 以保持细胞正常的二倍体核型 5 为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞 6 动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体 成块组织不利于培养 分散了并制成细胞悬浊液 利于细胞与培养液充分接触 利于培养 不能 动物细胞培养只能使细胞数目增多 动物细胞培养的目的是获得细胞或细胞产品 4 为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料 分化程度低 分裂和增殖旺盛 易培养 思考 二 动物细胞培养条件 1 无菌 无毒的环境2 营养3 温度和PH温度36 5 0 5度 pH7 2 7 44 气体环境O2和CO2 95 空气和5 CO2 维持培养液的PH 培养液和所有培养用具进行无菌处理措施 培养液中加一定量的抗生素 葡萄糖 氨基酸 无机盐 微量元素 促生长因子 维生素 激素等 和动物血清 较植物组织培养基 动物细胞培养液的独特之处 液体培养基 成分中有动物血清等 想一想 为什么对动物细胞进行培养时要添加血清 血清中含有蛋白质 氨基酸 葡萄糖 激素等 其中蛋白质为白蛋白和球蛋白 氨基酸有多种 是细胞合成蛋白质的基本成分 有些动物细胞不能合成 必须由培养液提供 激素有胰岛素 生长激素等促进细胞的生长 增殖 贴附 还有很多未知的促细胞生长因子等其他活性物质 因此 细胞培养要保证细胞能顺利生长和繁殖 一般要添加10 20 的血清 三 动物细胞培养技术的应用 1 生产蛋白生物制品 病毒疫苗 干扰素 单克隆抗体等2 基因工程技术中的受体细胞 3 用于检测有毒物质 4 培养正常或病变的细胞 用于生理 病理 药理等方面的研究 可用于健康细胞的培养 如获得大量自身的皮肤细胞 用于植皮 用于筛选抗癌药物等 为治疗和预防疾病提供理论依据 细胞的全能性 细胞株 细胞系 植物体或组织 培养结果 快速繁殖 培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖 动物血清 蔗糖 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较 1 在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞 A 细胞系B 细胞株C 原代细胞D 传代细胞 2 动物细胞工程技术的基础是 A 动物细胞融合B 单克隆抗体C 胚胎移植D 动物细胞培养 A D 3 动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别