兴安落叶松(Larix论文：兴安落叶松(Larix gmelinii) Actin CBF1 基因克隆 表达特性.doc

兴安落叶松(Larix论文：兴安落叶松转录因子CBF1和Actin基因的克隆及特性分析【中文摘要】低温是诸多非生物因素中对植物危害最为严重的胁迫因子之一,它极大地限制了植物正常代谢和分布地域。植物自身拥有一套抵低温的机制,例如改变生物膜的性质,渗透调节等,而这些代谢活动的改变都离不开抗寒基因的表达调控。CBF (CRT-binding factor)转录激活因子是一类受低温特异诱导的反式作用因子,它们可以调控多个抗寒基因启动子上的顺式作用元件,诱导启动子中含有这一调控元件的多个冷诱导基因的表达,从而激活植物体内的多种抗寒机制。因此,CBF基因的表达及调控机理的研究对于阐明植物的抗寒机理具有重要意义。在本研究中,我们克隆了兴安落叶松的CBF1同源基因序列,命名为LgCBF1,并调查了该基因的表达特性。兴安落叶松是我国东北、内蒙古林区以及华北、西南的高山针叶林的主要森林组成树种,在针叶树种中是最耐寒的,所以对LgCBF1基因的研究可为解明兴安落叶松的抗寒机理、开发其抗寒基因资源提供依据。另外,由于在检测LgCBF1表达特性的实验中需要一个稳定表达的内参基因,我们分离了兴安落叶松的肌动蛋白基因(LgAct),并对其基因结构和系统发育关系进行了分析。LgAct基因的分离对于以此基因为内参,研究兴安落叶松其.【英文摘要】Low temperature is one of the key factors that greatly restricts growth and distribution of plants. Plant has specific mechanism to resist low-temperature stress, such as regulating the characteristic of biomembrane, osmoregulation, and so on. Cold-regulated (COR) genes play an important role for regulating metabolic activity under cold-stress conditions. Transcription factor CBF is a class of trans-acting factor, who is specifically induced by low temperature, and can control expression of COR genes whose .【关键词】兴安落叶松(Larix gmelinii) Actin CBF1 基因克隆 表达特性【英文关键词】Larix gmelinii Actin CBF1 Gene cloning Expression pattern【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发【目录】兴安落叶松转录因子CBF1和Actin基因的克隆及特性分析摘要5-7ABSTRACT7-81. 引言12-181.1 CBF1与植物冷胁迫13-161.1.1 CRT/DRE的发现13-141.1.2 CBF转录因子的家族成员14-151.1.3 CBF的表达特性151.1.4 CBFI基因及其产物蛋白的特性15-161.1.5 CBF在植物冷驯化中的作用161.2 肌动蛋白简介16-171.3 研究目的与意义17-182. 材料和方法18-362.1 植物材料182.2 菌种182.3 试药和试剂182.4 实验仪器18-192.5 方法19-302.5.1 幼苗的培养及低温胁迫处理192.5.2 兴安落叶松核酸的提取19-212.5.2.1 兴安落叶松总RNA的提取(改良的CTAB法)192.5.2.2 总RNA质量的检测与浓度、纯度的测定19-202.5.2.3 兴安落叶松基因组DNA的提取(改良的CTAB法)20-212.5.2.4 兴安落叶松基因组DNA质量的检测与浓度测定212.5.3 总RNA的反转录21-222.5.4 兴安落叶松LgAct基因的克隆22-262.5.4.1 兴安落叶松LgAct基因目的片段的克隆22-232.5.4.2 LgAct基因末端的克隆23-262.5.5 LgAct全长的扩增26-272.5.6 AXYGEN凝胶回收试剂盒回收目的片段27-282.5.7 目的DNA片段与载体连接282.5.8 TB法制备感受态细胞28-292.5.9 转化292.5.10 重组子的筛选与鉴定29-302.5.11 阳性重组子的菌液的制备及测序302.6 兴安落叶松LgCBF1基因的克隆30-362.6.1 兴安落叶松LgCBF1基因的克隆30-362.6.1.1 兴安落叶松LgCBF1基因的克隆30-322.6.1.2 LgCBF1表达量的检测32-363 结果与分析36-463.1 兴安落叶松LgAct基因的克隆及序列分析36-393.1.1 获取兴安落叶松LgAct基因的克隆36-383.1.2 LgAct序列及基因结构分析38-393.2 兴安落叶松LgCBF1基因的克隆及表达分析39-463.2.1 兴安落叶松LgCBF1基因的克隆40-443.2.2 LgCBF1的半定量-PCR表达分析44-464. 讨论4