实验室常用试剂、缓冲液的配制方法.docx

附录一 实验室常用试剂、缓冲液的配制方法(一) 1 M Tris-HCl (1 L)1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中2. 加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解；3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值；PH值浓HCl7.4约70 mL7.6约60 mL8.0约42 mL4. 将溶液定容至1 L；5. 高温高压灭菌后，室温保存；注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1 C，溶液的pH值大约降低0.03个单位。(二) 0.5 M EDTA (1 L)1. 称取186.1 g Na2EDTA2H2O，置于1 L烧杯中；2. 加入约800 mL的去离子水，充分搅拌；3. 用NaOH调节pH值至8.0 (约20 g NaOH)；注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解；4. 加去离子水将溶液定容至1 L；5. 适量分成小份后，高温高压灭菌；6. 室温保存。(三) 50 TAE Buffer (pH8.5) (1 L)1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中；Tris242 gNa2EDTA.2H2O37.2 g2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解；3. 加入57.1 mL的醋酸，充分搅拌；4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。(四) 10 TBE Buffer (pH8.3) (1 L)1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中；Tris108 gNa2EDTA.2H2O7.44 g硼酸55 g2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解；3. 去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。(五) 40%丙烯酰胺(1 L)1. 称量下列试剂，置于2 L烧杯中；丙烯酰胺Alrylamatide380 g甲叉丙烯酰胺Bis-Alrylamatide20 g2. 向烧杯中加入约400 mL的去离子水，充分搅拌溶解；3. 去离子水将溶液定容至1 L；4. 37 C过夜，充分溶解。(六) 8%非变性聚丙烯酰胺凝胶(70 mL)1. 40%丙烯酰胺、TEMED和10% APS均放置于4 C冰箱中，要用时才取出；2. 按照顺序称量下列试剂，置于200 mL烧杯中；去离子水41 mL5 TBE Buffer14 mL40%丙烯酰胺14 mL10% APS650 LTEMED65 L3. 磁力搅拌器将其充分混合均匀(注意控制时间，特别是室温高的时候，容易凝结)；4. 将其缓慢倒入电泳玻璃板中。(七) 6 Loading Buffer (500 mL，DNA电泳用) 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中；EDTA4.4 gBromophenol Blue250 mgXylene Cyanol FF250 mg2. 向烧杯中加入约200 mL的去离子水，加热充分搅拌溶解；3. 加入180 mL甘油后，使用2 N NaOH调节pH值至7.0；4. 去离子水将溶液定容至500 mL后，室温保存。(八) 10 Loading Buffer (10 mL，RNA电泳用)1. 称量下列试剂，置于10 mL离心管中；0.5 M EDTA (pH 8.0)200 LBromophenol Blue25 mgXylene Cyanol FF25 mg2. 向烧杯中加入约4 mL的DEPC处理水，充分搅拌溶解；3. 加入5 mL甘油后，充分溶解；4. DEPC处理水定容至10 mL后，室温保存。(九) 组织裂解液(100 mL，鱼类用)1. 按照顺序称量下列试剂，置于200 mL烧杯中；1M Tris-Cl (pH 8.0)1 mL0.5M EDTA1 mL0.5M NaCl20 mL10% SDS10 mL2. 加去离子水将溶液定容至100 mL。(十) Hanks液(1L，淡水鱼用)1. 按照顺序称量下列试剂，置于2 L烧杯中；NaCl8.0 gKCl0.2 gMgSO4.7H2O