磁性纳米颗粒金纳米颗粒生物条形码PCRDNA探针大肠杆菌O157H7硕士论文.doc

应用生物功能化纳米颗粒检测大肠杆菌O157：H7的研究.【摘要】 大肠杆菌O157：H7(Escherichia coli O157:H7, E. coli O157:H7)是肠出血性大肠杆菌的一个主要菌型,曾在世界范围内多次暴发,严重威胁着人们的健康并造成巨大经济损失。本文建立了两种生物功能化纳米颗粒对大肠杆菌0157：H7进行检测的方法,并用于对人工污染牛奶样品的检测,主要研究方面如下：生物功能化纳米颗粒的制备。利用柠檬酸钠还原法制备粒径为13 nm的金纳米颗粒(Au-NPs),用大肠杆菌O157：H7多克隆抗体、巯基化捕获DNA链、条形码DNA链、探针DNA链等制备生物功能化Au-NPs,利用UV-vis、TEM等对制备和修饰过程进行表征。通过共沉淀法制备粒径为274 nm的磁性纳米颗粒(MNPs),采用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)修饰和戊二醛交联制备得到大肠杆菌0157：H7单克隆抗体功能化的MNPs。生物功能化纳米颗粒检测大肠杆菌0157：H7方法研究。利用生物功能化的MNPs和Au-NPs与目标物大肠杆菌0157：H7进行免疫反应,形成MNPs/目标物/Au-NPs 三明治”式复合体,磁场分离后去杂交将Au-NPs上标记的条形.更多还原【Abstract】 E. coli O157:H7 (Escherichia coli O157:H7, E. coli O157:H7) is the enterohemorrhagic E. coli serotype most often associated with disease outbreaks and with the onset of severe disease in worldwide, which resulted in serious threat for people health and huge economic losses. In this paper, we describe two methods for E. coli O157:H7 object detection based biofunctionalized nanoparticles, and applied methods for the detection of contamination of milk by E. coli O157:H7. The main research areas:Pre.更多还原 【关键词】 磁性纳米颗粒； 金纳米颗粒； 生物条形码； PCR； DNA探针； 大肠杆菌O157:H7； 【Key words】 magnetic nanoparticles； gold nanoparticles； bio-bar codes； PCR； DNA probes； Escherichia coli O157:H7； 摘要 5-6 Abstract 6 第一章 引言 7-15 1.1 传统的检测方法 7 1.2 免疫学检测方法 7-9 1.2.1 酶免疫测定技术 7-8 1.2.2 免疫层析技术 8 1.2.3 免疫磁珠分离技术 8-9 1.3 分子生物学检测方法 9-10 1.4 纳米技术及其在生物分析中的应用 10-14 1.4.1 纳米材料概述 10 1.4.2 纳米技术在生物分析中的应用 10-14 1.5 立题背景及本文的主要研究内容 14-15 第二章 材料与方法 15-23 2.1 材料 15-16 2.1.1 实验用微生物 15 2.1.2 培养基 15 2.1.3 化学试剂 15 2.1.4 生化试剂 15-16 2.1.5 主要仪器和设备 16 2.1.6 主要溶液的配制 16 2.2 方法 16-23 2.2.1 抗体和寡核苷酸双修饰金纳米颗粒的制备 16-18 2.2.2 探针修饰金纳米颗粒的制备 18 2.2.3 生物功能化的磁性纳米颗粒制备 18-19 2.2.4 食源性病原微生物的制备 19 2.2.5 基于生物条形码的常规PCR检测方法的建立 19-20 2.2.6 基于生物条形码探针和金纳米颗粒检测方法的建立 20-21 2.2.7 对人工污染牛奶中的大肠杆菌O157:H7的实测 21-23 第三章 结果与讨论 23-41 3.1 生物功能化金纳米颗粒和磁性纳米颗粒的制备和鉴定 23-28 3.1.1 金纳米颗粒的鉴定结果 23-24 3.1.2 抗体和DNA双修饰金纳米颗粒的制备及鉴定结果 24-26 3.1.3 探针修饰的金纳米颗粒的鉴定结果 26-27 3.1.4 生物功能化磁性纳米颗粒表面抗体偶联效率测定 27-28 3.2 生物功能化纳米颗粒检测大肠杆菌O157:H7方法研究 28-36 3.2.1 基于生物条形码的常规PCR检测大肠杆菌O157:H7 28-32 3.2.2 基于生物条形码和金纳米颗粒检测大肠杆菌O157:H7 32-36 3.3 对人工污染牛奶中大肠杆菌O157:H7检测结果 36-41 3.3.1 基于生物条形码的常规PCR对人工污染牛奶检测结果 36-37 3.3.2 基于生物条形码和金纳米颗粒对人工污染牛奶检测结果 37-41 结论 41-43 致谢 43-45 参考文献【索购全文】Q联系Q：138113721 1030850491 全文提供服务费：25