游离三碘甲状腺原氨酸测定SOP.doc

文件名称：游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）测定SOP版次： （共 页）文件编号：批准者：编写者：审核者：生效日期：1.目的 规范游离三碘甲状腺氨酸（FT3）测定程序，确保检测结果的准确性。2.测定方法 竞争性结合酶免疫检验。3. 测定原理 Access Free T3 测定是一种竞争结合免疫法测定，将样本添加到含碱性磷酸酶结合物抗T3 单克隆抗体的反应管中。在温育过程中，样本中的游离T3 与抗T3 抗体发生反应。然后将包被着链霉亲和素和生物素化T3 相似物的微粒添加到混合物中。抗T3 抗体上的未结合位点通过T3 相似物与微粒相结合。在反应管内温育完成后，结合在固相上的物质将置于一个磁场内被吸住，而未结合的物质被冲洗除去。然后，将化学发光底物 Lumi-Phos* 530添加到反应管内，然后由照度计对反应中所产生的光进行测量。所产生光的量与样本内游离T3 的浓度成反比。样本内分析物的量由所储存的多点校准曲线来确定。4.性能参数无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数和试剂条码的信息自动进行分析。标本量125 L。 4.1 精密度：批内CV 12.5。4.2 分析范围：0.3 30.0 pg/ml (0.4 50.0 pmol/L ) 。4.3 灵敏度：0.3 pg/ml。4.4 方法的有限性及干扰因素：胆红素10mg/L、TG 18 g/L、肝素、Hb 2.5 g/L在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。5.原始样本系统5.1 总则：符合本室检验标本采集手册 5.2 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。5.3 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。5.4 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。5.5 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。5.6 标本拒收标准5.6.1 标本量过少。5.6.2 检验申请单上姓名或条码与标本上姓名或条码不一致。5.6.3 检验项目与标本类型不符，或抗凝剂不符。5.6.4 标本送检时已放置时间过久。5.6.5 输液时在同侧血管抽血。5.6.6 标本严重容血或脂血。5.6.7 无标本（空管）5.6.8 条码包含信息不全（如无采样时间等）。 6.标本保存6.1 接收标本后在30min内将标本离心分离出血清, 避免溶血。6.2 标本保存时间：室温（1525）下可稳定8h，普通冰箱中（28）稳定48h。需较长时间保存应将血清存放于-20。冰冻标本仅可冻融一次。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均密闭保存。6.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置28冰箱内保存7d。7.设备和试剂7.1 设备： 美国Beckman Coulter公司 DXI 800免疫分析系统。7.2 试剂： ACCESS专用FT3测定试剂盒，由美国Beckman Coulter公司出品，产品号33830。未打开的试剂包保存于28在效期内稳定，不可冻存。开启的试剂包载入系统中可使用28d。7.3 试剂盒组分7.3.1 磁性微粒子：包被了链亲和素的磁性微粒子，和Tris缓冲液。7.3.2 液体试剂：鼠抗T3单克隆抗体-ALP结合物和Tris缓冲液。7.3.3结合于生物素上的T3类似物，Tris缓冲液。7.3.40.4N NaOH，和0.4N HCl。7.3.5试剂包即开即用，无须特殊准备。7.4 其他试剂与用品7.4.1 化学发光底物：ACCESS的通用发光剂底物液，Cat. No. 81906。7.4.2 清洗缓冲液、反应杯等。8.校准程序8.1 校准品: 美国Beckman Coulter公司提供的FT3配套校准液需贮28。5个浓度。有校准卡片。8.2 校准类型和校准点数目：非线性模式，6个校准点。8.3 校准周期：在同一批号试剂的使用效期内校准曲线有效，但在间隔14d后需要重新校准。每当：更换试剂批号或出现质控漂移时；仪器进行全面保养后；仪器的重要零件更换后，进行一次校准。8.4 校准液重建方法：液体试剂，直接使用。9.质量控制程序 9.1 质控品：采用美国Beckman Coulter公司提供配套的质控品。9.2 质控液准备9.2.1 小心打开瓶盖，避免内容物的任何损失。9.2.2 在2025的室温下，准确吸取5ml蒸流水复容1瓶质控血清。9.2.3 盖上橡皮塞，拧紧瓶盖，使用前避光30分钟。9.2.4 轻轻旋转，确保所有的冻干物完全溶解。9.2.5 勿摇晃小瓶。9.2.6 分装致离心管中，每管0.5ml -20保存。9.3质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次。9.4 质控规则：采用L-J质控图，以3s为失控限。标准差由本室实验数据得出。9.5 如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。10.检验程序步骤装载试剂 进行校准 进行质控 输入标本检测项目 加载标本 标本测定 结果复核 报告11. 结果计算仪器根据校准曲线自动给出每个标本测定结果。测定结果单位以pg/mL或pmol/L 表示。换算公式：pmol/L pg/ml1.53612. 检验结果的报告及范围12.1 结果的报告12.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。12.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。12.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2 报告范围0.3 30.0 pg/ml (0.4 50.0 pmol/L )，超过此范围的标本应当报告为50.0 pmol/L。对高值标本不作稀释后重测，因为稀释会干扰标本中游离激素和总激素之间的平衡。13. 参考范围参考值（血清）： 5.8 9.2pg/ml (3.86 pmol/L )14 临床意义14.1 FT3是血液中主要的具有生理活性的甲状腺素，甲状腺素结合蛋白浓度正常时，FT3水平与TT3相关。14.2当甲状腺素结合蛋白或血清白蛋白的浓度低下时，如 TT3的浓度有改变，测定FT3就很有意义。大约有5%甲亢患者有单独的FT3增高。14.3 当甲状腺机能亢进时，FT3浓度水平通常升高，这是区分甲状腺机能正常与中毒的界限，也是确认甲状腺机能亢进症及对其的治疗监测的良好指标。14.4 当甲状腺机能减退时，FT3浓度水平有减低趋势，但是这种减低并不能为诊断提供充分明确的信息。15 结果审核以及与相关项目的联系15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3 相关项目：审核与其他相关甲状腺激素等的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因16有关引用程序与文件16.1 DXI 800自动发光免疫分析仪仪器标准操作规程。16.2免疫检验室内质控标准操作程序。16.3检验结果审核程序。16.4标本送检和接收程序。17参考文献17.1陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社, 2004.17.2 Beckman Coulter 游离三碘甲状腺氨酸（FT3）测定试剂盒说明书。17.3 叶应妩，王毓三，申子瑜主编. 全国临床检验操作规程 (第三版). 东南大学