银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏保护作用的实验研究.doc

银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏保护作用的实验研究银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏保护作用的实验研究更新日期：2010-08-14 点击： 廖璞王淑琴廖雪松康格非 摘要：目的：研究银杏叶提取物（Extract of Ginkgo Bilboa,EGB）对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。方法：应用EGB对四氧嘧啶糖尿病大鼠进行了8wk治疗，观察其对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。结果：EGB能明显提高血清及肾组织中超氧化物歧化酶（SOD）及谷光甘肽过氧化物酶（GSHPx）活性，改善基底膜增厚及基质增生，减少实验大鼠肾脏尿蛋白排泄量，减轻肾功能损害。结论：EGB在预防与治疗糖尿病肾病方面有一定作用。 关键词：银杏叶提取物；糖尿病肾病；自由基；脂质过氧化 中图分类号：R965文献标识码：B文章编号：10010408（2000）03011402 An Experimental Study of Protective Effect of Ginkgo Bilboa Leaf Extract on Renal Lesions in Diabetic Rats LIAO Pu，WANG Shuqin，LIAO Xuesong (The Third Peoples Hospital of Chongqing,Chongqing 400014) KANG Gefei (Dept.of Laboratory Medicine,Chongqing University of Medical Sciences,Chongqing 400016) ABSTRACT：OBJECTIVE：To study the protective effect of extract of ginkgo bilboa leaf(EGB)on renal lesions in diabetic rats.METHODS：Allaxan diabetic rats were treated with EGB(120mg.kg.d1)for eight weeks,the protective effects of EGB on renal function were evaluated.RESULTS:The results showed that the contents of SOD and GSHPx significantly increased,and the excretion of urinary protein and the injury of renal function decreased,while the stroma proliferation and the basement membrane thickening were improved in diabetic rats treated with EGB.CONCLUSION：EGB plays definite role in preventing diabetic nephropathy. KEY WORDS：EGB;diabetic nephropathy;free radicals;lipid peroxide 糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）是糖尿病常见而难治的微血管并发症，其发生率可达47.661，一旦出现肾小球基底膜（GBM）增厚和以系膜区为主的细胞外基质（ECM）增生等病理变化，往往难于逆转，是糖尿病患者的主要死因之一2。目前，其发病机制还不完全清楚，尚无理想的治疗措施，更缺乏针对性强的治疗药物。大量的临床观察和动物实验表明，高血糖造成自由基的形成与清除失调是导致糖尿病血管病变的重要原因之一3。银杏叶提取物（EGB，由上海绿源实业公司提供，批号980705），主要活性成分为24黄酮苷和6银杏内酯。黄酮苷已被证实具有消除氧自由基、抗脂质过氧化等作用4，临床广泛应用于脑血管疾病的防治。但有关EGB对DN的保护作用，尚少见文献报道。本实验旨在通过观察EGB对大鼠肾脏功能与形态学的影响，探讨EGB在DN防治中可能的应用价值。 1材料与方法 1.1DN大鼠模型、实验分组及处理 雄性Wistar大鼠，体重150g200g（重庆医科大学动物实验中心提供），腹腔注射2.5四氧嘧啶（150mg/kg体重，溶于生理盐水）；正常对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水，1wk后，由尾静脉采血测定血糖，空腹血糖16.0mmol/L者18只及9只正常对照组大鼠纳入实验。实验大鼠分为正常对照组9只，DN组9只，EGB治疗组9只。治疗组灌胃给予EGB120mg/（kgd）治疗8wk5，其余两组灌胃给予生理盐水。所有大鼠常规饲养，不限制饮水，不使用胰岛素。 1.2观察指标及检测方法 用药第8wk末，用代谢笼收集24h尿液，称重后断头处死大鼠，取出一侧肾脏，去掉包膜称其湿重量，然后取1mm1mm肾皮质数块，磷酸盐缓冲液冲洗，1.25戊二醛溶液固定，光电镜检查。血糖用德国保灵曼公司快速血糖仪，24h尿蛋白用MA4210型尿液分析仪，血尿素用酶偶联速率法，血肌酐用苦味酸法，血及肾匀浆SOD活性用邻苯三酚氧化法，GSHPx活性测定用硫代巴比妥酸比色法。 1.3统计学分析 结果以s表示，显著性差异用组间t检验。 2结果 2.1EGB治疗后对实验大鼠肾脏形态学的影响 2.1.1光镜检查：DN组肾小球体积普遍大于正常对照组，EGB治疗组介于上两组之间，系膜细胞和基质细胞DN组较正常对照组明显增多，EGB治疗组与正常对照组差异不明显。 2.1.2电镜检查：DN组可见GBM弥漫性增厚，系膜区扩大，上皮细胞足突部分融合（见图1），EGB治疗组轻度系膜增生，基底膜增厚不明显（见图2），与正常对照组相比无明显改变（见图3）。 图1糖尿病大鼠肾小球基底膜电镜观察（20000） 图2EGB治疗组大鼠肾小球基底膜电镜观察（20000） 图3正常糖尿病大鼠肾小球西膜区电镜观察（20000） 2.2EGB治疗后对实验大鼠血、肾组织、SOD和GSHPx活性、肾重、肾重/体重的影响 实验结束时，DN组肾重和肾重/体重比值均高于正常对照 组（P0.01），血、肾组织中SOD和GSHPx活性明显低于其它两组（P0.01），治疗组肾重/体重比值明显低于DN组（P0.05），SOD和GSHPx活性明显高于DN组（P0.05），见表1。 表1EGB治疗后糖尿病大鼠肾重、肾重/体重、SOD和GSHPx活性的意义（s） 例数 肾重(g) 肾重/体重 (10-3) 血浆 肾组织 SOD GSH-Px SOD GSH-Px 正常 对照组 9 0.740.08 6.01.5 30.935.39 49.542.59 28.673.62 43.673.65 DN组 9 1.100.12* 10.81.7* 15.324.73* 29.904.34* 11.983.74* 24.392.56* EGB治 疗组 9 0.900.08* 8.30.9* 25.103.95* 40.355.26* 21.5644.48* 38.761.77* 与正常对照组相比：P0.01；与D