培养基质量控制.doc

微生物检验中培养基的质量控制分析摘要：培养基的制备和使用是微生物实验室检测工作非常重要的一个环节，培养基的质量直接影响到检测结果的准确性与有效性。本文就目前微生物检验中培养基的购置储存、制备及使用过程中可能存在的问题，从培养基的用水、容器选择、称量、灭菌、pH值测定，培养基的制备、融化、接种和培养、物理学和生物学质量控制等方面进行讨论，主要分析微生物检验中培养基的质量控制。关键词：检测；培养基；质量控制Abstract:Preparation of media and use is microbiology laboratory testing work very important links, culture medium quality directly affect the results of detection accuracy and effectiveness. This paper on the present in the microbial inspection of the storage medium purchase, preparation and process in the use of the possible problems, from the water, the container medium choice, weighing, sterilization, pH value determination, the preparation of media, melting, vaccination and training, physics and biology quality control are discussed, the main analysis in the medium of microbial examination quality control.Keywords:Detection;The culture medium; Quality control微生物实验室的检测依赖于培养基的质量，培养基质量的好坏直接影响检测结果的可靠性与准确性。自上世纪 80年代以来，微生物培养基专业在研制开发领域发展迅速，但因在国内受生产工艺及设备的影响，欠缺对产品的有效分析方法，致使成品的培养基质量不等，对整体质量水平有一定的影响。培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般含有碳水化合物、无机盐（包括微量元素）含氮物质、以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。培养基的配置、灭菌是否合格，对微生物的生长、分离、鉴定及检验结果的正确与否起着至关重要的作用。因此把好培养基的质量关，对顺利完成实验及保证微生物检验结果的正确性和有效性起着至关重要的作用。1、 培养基原料的购置于储存1.1购置培养基购置时应选择通过 ISO9000质量认证的生产厂家 ，质量必须符合相关标准，同时要求生产厂家提供详细产品说明书，如产品名称、产品编号、批号、成分、培养基使用前的 pH值 、贮存条件及有效期等信息。另外企业是否通过了质量管理体系的认证是一项较为客观的评价依据。1.2储存干粉培养基应保存在专用药品柜中，药品柜要选择阴凉干燥处，避免阳光直射；开封后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮措施，使用期限为 6个月。定期对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性、首次开封日期、培养基的感官状态、气味等，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象不应再使用。2、 培养基制备流程中各项指标的控制2.1 培养基用水制备培养基所用水应使用蒸馏水或与其同质的水，最好不使用离子交换器生产的去离子水，更加不能使用自来水。2.2 容器的选择配制培养基常用容器为玻璃、搪瓷或不锈钢制品，不可以使用铜、铁材质的容器。玻璃器皿必须是中性硬料玻璃，否则影响培养基的酸碱度。分装培养基的容器最好为一次性无菌容器，若不能满足这样的条件，应将容器进行灭菌处理。2.3 称量称量时每个培养基都要用专用的药匙，避免交叉污染而影响检验结果，称量用药匙要保证干净无杂物。干粉培养基易吸潮，如有条件，要在相对干燥的环境下称取。2.4 灭菌一般培养基采用湿热灭菌，通常灭菌条件是 121 15-20min；干热灭菌条件为180-200灭菌0.5-1h，含糖或特殊培养基，按照国家标准或生产商提供的说明灭菌。已配制好的培养基必须立即灭菌，避免微生物消耗养分。同时高温容易破坏培养基的营养成分，还会使琼脂的凝胶强度下降，因此必须严格控制灭菌温度和时间，并且不可重复灭菌。2.5 培养基pH值的测定微生物的生长不仅仅依赖丰富的营养，还需要在适宜的 pH 范围内才能正常生长繁殖或体现其生物学特性。培养基配方要求的pH为培养基灭菌后的pH，除了特殊说明外，培养基灭菌并冷却到室温时培养基的 pH 变化不应超过0.2个 pH 单位 。在进行培养基 pH 值的调整时，一般使用浓度为 0.5molL的 NaOH 或浓度为 1molL的 HCI溶液。pH值测量通常在室温下进行，pH的测量通常采用精密酸度计，酸度计每次使用前都需要配平处理，以保障测量的准确性。琼脂培养基的pH 值测量，在实验室条件通常采用灭菌前测量的方式，在条件允许的情况下，则选择特殊的胶体表面测量电极进行测量。2.6 培养基的融化培养基灭菌后应迅速冷却至所需要的温度，避免长时间保存在灭菌锅内造成灭菌过度或培养基湿度过高，影响培养基的营养成分。一般用水浴锅在温度为 (472) 中冷却，或者直接选择室温静置。融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不要超过4小时。倾注平板培养基时取出培养基自然降温至 4045为宜 ，建议先从灭菌锅取出培养基，冷却一段时间后再进行平板倾注，以此减少对样品中微生物的热损伤，同时可减少平板表面的冷凝水，既减少污染又利于观察培养结果。3、 培养基的接种与培养3.1培养基的接种 平板培养基在使用时表面必须无水珠，有水珠的平板易使菌落粘连、扩散、不易计数、不易得到单个纯菌落，更容易造成污染。此时应先将平板培养基表面进行干燥，可将平板倒扣在烤箱或恒温培养箱中，调试温度 2050，在不影响培养基营养成分的前提下进行干燥处理，或者将平板培养基放在有对流风的超净工作台中，至培养基表面的水滴完全消失为止。对于保存在冰箱中的平板培养基，应待温度恢复到室温后才能使用，使用前应检查有无污染的菌落产生，有无干裂现象，颜色是否发生改变，如果发现异常，应该将该批培养基作废处理。对于液体培养基，灭菌后降到室温即可使用。从灭菌锅中取出液体培养基放置在超净工作台静置降温。3.2 培养基的培养平板培养基培养时每垛最好不要多于 6个平板，留一定的空间使空气流通，使平板的温度尽快与培养箱温度达到一致。对于液体培养基，要依据培养基的体积、内容物量、容器类型及培养类型而定，若需使用摇床培养，要设定摇床的转速和温度。因培养过程中，培养基会损失水分，当水分损失的量大于培养基总量的15%时就会影响微生物的生长，所以必要时可放入装水容器，以维持培养箱内的湿度。4、 培养基的质量控制4.1物理学控制商品化的干燥培养基包装应易于达到密封条件，利于保存培养基的干燥性及光敏感成分的活性；制备的平板培养基应澄清，特殊的培养基应有相应的颜色，无浑浊、无沉淀；对于倾注平板的培养基，凝固温度室温为宜，最高不应高于 40，以利于低温倾注平板，并减少样品中微生物的热损伤；液体培养基应无分层、无未溶解物质。所有培养基使用前应检查培养基的颜色是否发生变化，是否被污染，是否有蒸发、脱水的现象。4.2 培养基的生物学控制培养基在灭菌后，应做无菌实验，按照该培养基规定的温度及时间来培养，看是否有细菌或霉菌生长，以确保灭菌效果。对每批产品应用相应的标准菌株进行检定，并对实验的结果加以记录。5 结论培养基的质量关系到微生物实验室检验结果的准确性，在检验工作中任何一个环境都不容忽视，如其中的任一环节出现问题，都有可能影响到对检验结果的科学性与客观性的判断。所以，加强对培养基的实验室质量控制，认真做好培养基的质量控制工作，不断完善与提高培养基的质量控制水平，才能保证微生物检验结果的准确性。做好培养基的质量检查，配备好所需硬件，包括酸度计、电子天平、密封电子称、分光光度计、水分测试仪、恒温培养箱、超净工作台、摇床培养箱、二氧化碳培养箱、多功能培养箱、显微镜和琼脂强度测定仪等。实验室不得使用不符合要求的培养基及培养基原料，重视培养基灵敏度和特异性的质量特性参考文献1 汪穗福.微生物检测验证技M.北京：中国医药科技出版社，2005：671002 纪晓梅.微生物培养基质控与图解M北京：北京科学技术出版社 ，2006：292383 周小明微生物实验室的质量控制和质量保证 J职业与健康 ，2009，25(15)：166