植物组织培养母液配置.doc

植物组织培养母液配置一、实验目的学习配置培养基的母液，掌握配制方法，了解母液存储方法二、实验原理配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的 母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。三、实验器材、试剂1器材 电子天平 烧杯（50ml 100ml 500ml 1000ml）量筒（1000ml 100ml 25ml） 容量瓶（100 500 1000）2试剂NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl22H2O,MgSO47H2O,FeSO47H2ONa2-EDTA,MnSO44H2O,ZnSO47H2O,H3BO3,KI,Na2MoO42H2OCuSO45H2O,CoCl26H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水四、实验步奏：一、母液的配置1、MS大量元素母液的配制一般将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 ,KH2PO4 、MgSO4.7H2O 、CaCl2.2H2O的量，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至1000ml，转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，置于冰箱中保存备用。2、MS微量元素母液的配制一般将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO44H2O、ZnSO47H2O 、H2BO3 、NaMoO42H2O、 CuSO45H2O、 CoCl26H2O扩大100倍的量，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至1000ml，转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，置于冰箱中保存备用。3、MS铁盐母液配制一般将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：FeSO47H2O和Na2EDTA?2H2O的量，把FeSO47H2O和 Na2EDTA?2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积1000ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡12min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于冰箱中保存备用。二、植物激素的配置常见激素：2，4D、萘乙酸、吲哚乙酸、6苄氨基嘌呤（6BA）、赤霉素（GA3）、1、生长素类： （1）生长素类：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织（2）常见生长素：二氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸、吲哚3丁酸。NAA、IAA、IBA被广泛用于生根，2，4D有利于愈伤组织的诱导和生长。（3）保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存2、细胞分裂素 细胞分类素：促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不定芽。细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。 （1）常用的细胞分裂素有： 6苄氨基嘌呤（6BA）、激动素KT）、玉米素、噻二唑苯基脲（2）保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存3、赤霉素（GA3） （1）保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存 （三、培养基的制备与灭菌（一）、培养基的制备1、将所需的各种母液和植物激素按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿等放在指定位置。2、取烧杯一个内盛200ml蒸馏水，按照培养基配方所需量依次取母液和植物激素加入烧杯，搅拌，按相应培养基称量蔗糖和琼脂，并添加到烧杯中，在电炉上加热待琼脂完全融化后加蒸馏水定容至所需体积。3、充分混合后，用1mol/LNaOH和1mol/LHCl调节培养基的pH为培养基要求pH值。4、趁热把培养基分装到广口瓶中。封好瓶口。待灭菌。（二）、培养基的灭菌灭菌温度及灭菌时间：121（1.06kg/cm2）下灭菌20分钟。（如是实验所用菌材灭菌，如无菌水及器械，则是121（1.06kg/cm2）下灭菌30分钟）1、检查灭菌锅外层锅内水位，水量过少时应加水。把分装好的培养基放入灭菌锅的消毒桶内。2、盖上锅盖，注意按照说明操作并确定已盖好，设置好温度和时间参数，开启电源加热灭菌。3、灭菌时间到后，先切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，待灭菌锅压力表指针降到0时，打开排气阀，旋松螺栓，开启锅盖，取出已灭菌的培养基。4、刚灭过菌的培养基成液体状，取出时不要用力摇动，否则会导致部分培养基沾附在瓶壁。放置在水平桌面上自然冷却。在室温下放置1-2天，观察有无微生物生长，以确定培养基是否彻底灭菌。经检查没有杂菌生长的方可使用。五、培养基凝固不好的原因1.培养基组分中琼脂的用量和质量 2. PH值试纸检测培养基的酸碱度，看培养基是否过酸，一般PH值低于4.8