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专题限时集训(十五)专题十五生物技术实践(时间:40分钟)1从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是:采集菌样富集培养纯种分离性能测定。(1)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件,使其群落的数量大大增加,从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择_的培养基,并在_条件下培养。(2)接种前要对培养基进行_处理。在整个微生物的分离和培养中,一定要注意在_条件下进行。(3)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。如培养噬盐菌的菌样应从_环境采集。(4)下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图,请分析接种的具体方法。ab图t151获得图a效果的接种方法是_,图b效果的接种方法是_。某同学在纯化土壤中的细菌时,发现培养基上的菌落连成一片,最可能的原因是_。2图t152是基因型为aabb的菊花茎尖离体培养示意图,据图回答下列问题:培养基中培养图t152(1)图中b是_。菊花茎尖培养成植物体的根本原因是_。(2)菊花的组织培养形成试管苗的过程中,其中应大量供给的元素是_。试管苗形成过程中要给予一定光照,其目的是_。要促进茎尖细胞分裂、分化和生长,培养基中应含_(激素)。(3)脱分化是指_,脱分化和再分化这两个过程的进行除必要的温度、光照和氧气等外界条件外,还要保证_。否则植物组织培养就不能成功。(4)这样培养成的试管苗的基因型是_。3葡萄发酵可产生果酒、果醋,请利用相关的知识回答以下问题:(1)如图t153表示果酒和果醋制作过程中的物质变化,过程需要_适宜条件。图t153(2)将葡萄榨成汁后分别装入相应的发酵瓶中,在温度等适宜的条件下进行发酵,如图t154所示。发酵过程中,每隔一段时间均需排气一次。据图分析,操作错误的是_,发酵结束后,检验乙发酵过程中产物的方法是_。甲乙丙注:各发酵瓶的左侧管为充气管,右侧管为排气管图t154(3)自己在家中制作的果醋很容易腐败,而包装瓶上写着105 高温瞬时灭菌的果醋瓶上写着“不含任何防腐剂,最长保质期为一年”,其中的奥秘是_。(4)在图t155中用曲线表示正常果酒发酵阶段酵母菌种群个体数量的变化情况。图t1554某化工厂生产的一种加酶洗衣粉,其包装袋上印有如下说明。成分:含碱性蛋白酶等。用法:洗涤前先将衣物浸于洗衣粉溶液内一段时间,使用温水效果更佳。注意:切勿用于丝质及羊毛衣料。某研究性学习小组为探究该洗衣粉中酶催化作用的最适温度,设计了如下装置进行实验,并将结果用下列曲线图c、d表示。请回答以下问题:cd图t156(1)由图可知,使用该加酶洗衣粉的最适宜温度为_。(2)在0 和75 时,酶的催化效率基本都为零。但当温度再度回到45 时,后者酶的催化能力已不能恢复,这是因为_。(3)在实验过程中可通过直接测定_(指标)来表示该洗衣粉中酶的催化效率。(4)目前使用的加酶洗衣粉都是一次性的,某洗涤公司为降低生产成本研制了一种能多次重复使用加酶洗衣粉的设备,他们将酶固定在不溶于水的尼龙载体上,洗涤完衣物后,经过简单处理,这些酶还可以多次重复利用,这种方法制成的酶叫_。(5)除加酶外,很多洗衣粉中还加有香精,高档洗衣粉中的香精都是由植物芳香油制成的,目前从植物中提取芳香油的方法有_。(6)加酶洗衣粉中的淀粉酶可以从霉菌中提取。用固体培养基分离、纯化霉菌的方法有_、_。5. 多聚酶链式反应(pcr)是一种体外迅速扩增dna片段的技术。请回答下列问题:(1)dna的两条链是反向平行的,通常将_的末端称为5端,当引物与dna母链通过碱基互补配对结合后,dna聚合酶就能从引物的_开始延伸dna链。(2)pcr利用了dna的热变性原理解决了打开dna双链的问题,但又导致了dna聚合酶失活的新问题。到20世纪80年代,科学家从一种taq细菌中分离到_,它的发现和应用解决了上述问题。要将taq细菌从其他普通的微生物中分离出来,所用的培养基叫_。(3)pcr的每次循环可以分为_三步。假设在pcr反应中,只有一个dna片段作为模板,请计算在5次循环后,反应物中大约有_个这样的dna片段。(4)简述pcr技术的主要应用(要求答两项)。6植物的花药培养在育种上有特殊的意义,诱导花粉植株能否成功及诱导成功率的高低,受多种因素形响,其中材料的选择与培养基的组成是主要的影响因素。以下是月季花药离体培养的有关问题,请回答:(1)通过花药培养产生花粉植株(即单倍体植株)一般有两种途径:一种是花粉通过胚状体阶段发育为植株,另一种是花粉在诱导培养基上先形成_,再将其诱导分化成植株。(2)在花粉发育的过程中,只有某一个时期对离体刺激敏感,一般来说,在_期,花药培养成功率高,为了挑选到此期的花药,通常选择_的花蕾。(3)为了进一步确定花粉是否处于适宜的发育期,一般要通过_来观察,通常需要用_来染色,但有些植物的花粉核不易着色,需采用焙花青铬矾法,此方法能将花粉细胞核染成_色。(4)采用的ms固体培养基中除含有多种大量元素和微量元素外,还需添加植物激素,其中主要是_。(5)为避免杂菌污染培养物和环境,花药培养的培养基在接种前和完成实验后都要进行_。7根据从胡萝卜中提取胡萝卜素的相关知识,回答下列问题:(1)胡萝卜素可以采用萃取的方法提取,原因是_;用这种方法提取胡萝卜素的主要流程是:粉碎干燥萃取_浓缩。(2)为保证萃取效果材料需要进行粉碎和干燥处理,干燥过程需要注意控制_和_。(3)萃取过程应采用_加热的方法。(4)萃取液的浓缩可采用玫瑰精油提取实验中的_装置。(5)提取的胡萝卜素可通过_法进行鉴定,在鉴定中需要用_对照。专题限时集训(十五)1(1)以淀粉为唯一碳源高温(2)高压蒸汽灭菌无菌(3)(海滩等)高盐(4)稀释涂布平板法平板划线法菌液浓度过高(土壤溶液稀释不够)解析 (1)富集培养产耐高温淀粉酶微生物的培养基以淀粉为唯一碳源并且还需高温条件选择。(2)接种前要对培养基进行高压蒸汽灭菌,在实验中要注意在无菌条件下进行。(3)噬盐菌的菌样应从高盐环境采集。(4)图a菌落分布较均匀,接种方法是稀释涂布平板法,图b菌落集中呈线状,接种方法是平板划线法。菌液浓度过高(土壤溶液稀释不够)会导致细菌密度大、有重叠,长成的菌落连成一片。2(1)具根、芽的胚状体(丛芽、根和芽)植物细胞具有全能性(2)n、s、p、k、ca、mg试管苗形成过程中要进行光合作用合成有机物细胞分裂素和生长素(3)高度分化的植物器官、组织或细胞,通过离体培养产生愈伤组织的过程无菌(4)aabb解析 (1)离体的植物组织或细胞,在培养了一段时间以后,会通过细胞分裂,形成愈伤组织。脱分化产生的愈伤组织继续培养,又可以重新分化成根或芽等器官,这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗,移栽到地里,可以发育成完整的植物体。菊花茎尖培养成植物体的根本原因是植物细胞具有全能性。(2)离体的植物组织和细胞,对营养、环境等条件的要求相对特殊,需要配制适宜的培养基。常用的一种培养基是ms培养基,其主要成分包括:大量元素,如n、s、p、k、ca、mg;微量元素,如fe、mn、b、zn、cu、mo、co、i;植物激素等。试管苗形成过程中要每日给予日照时间12 h,其目的是试管苗形成过程中要进行光合作用合成有机物。植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。(3)由高度分化的植物组织或细胞,通过离体培养产生愈伤组织的过程称为植物细胞的脱分化,或者叫做去分化。脱分化和再分化这两个过程的进行除必要的温度、光照和氧气等外界条件外,还要保证无菌,原因是杂菌产生的毒素等物质会影响或阻碍植物组织脱分化形成愈伤组织或再分化为根和芽,且杂菌的繁殖能力很强,会与植物组织争夺培养基中的营养物质,使植物得不到营养,同时还会侵染植株,使之受到损害。所以,培养基、培养用具都必须灭菌。在组织培养过程中,涉及培养瓶、培养基、器皿、材料、接种工具、操作环境、培养室和工作台面等,都要保证无菌,才能达到无菌的目的。否则植物组织培养就不能成功。(4)由于植物组织培养过程,细胞进行有丝分裂,这样培养成的试管苗的基因型是aabb。3(1)氧气、3035 (2)甲、丙在酸性条件下,重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色(3)高温杀死了微生物(4)如图解析 (1)过程为制作果醋的阶段,用到的醋酸菌为好氧性细菌,生长的最适温度为3035 。(2)酵母菌无氧呼吸可以产生酒精和co2,是葡萄酒制作过程中发挥作用的微生物。酵母菌只有在无氧条件下,才能进行无氧呼吸产生酒精;甲装置的充气口始终开放,不能创造瓶内无氧环境,不能用来生产果酒;在有氧条件下,醋酸菌可以能利用葡萄糖产生醋酸。酵母菌在发酵过程中产生的co2导致乙装置中气压升高,要定期打开排气管进行放气。丙装置瓶中发酵液过多,淹没了排气管在瓶内的管口,不利于排气;同时导致瓶内氧气过少,不利于发酵前期酵母菌的大量繁殖。(3)105 高温能使微生物的蛋白质及酶发生变性而死亡,达到杀灭致病微生物的目的。(4)在有氧气的环境中,酵母菌可以增殖;在无氧环境中,酵母菌不能增殖。4(1)45 (2)高温条件下酶的结构已遭破坏(或酶的活性已丧失)(3)胶片上的蛋白膜存在时间的长短(或其他合理答案)(4)固定化酶(5)萃取法、蒸馏法、压榨法(6)平板划线法稀释涂布平板法解析 由题图看出该加酶洗衣粉在45 时催化效率最高。高温条件下酶的结构会发生不可逆的破坏,即使再回到最适温度,酶的活性也不能恢复。胶片上的蛋白膜存在时间的长短反映了酶的催化效率。将酶固定在不溶于水的尼龙载体上,使酶多次重复利用,这种方法制成的酶叫固定化酶。从植物中提取芳香油的方法有萃取法、蒸馏法、压榨法等。固体培养基分离、纯化霉菌的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。5(1)磷酸基团3端(2)耐高温的taqdna聚合酶选择培养基(3)变性、复性和延伸32(4)遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和dna序列测定等(要求答两项)解析 本题考查pcr技术有关知识。dna的两条链是反向平行的,通常将含有游离的磷酸基团的末端称为5端,而dna聚合酶从引物的3端开始延伸dna链;在体外扩增dna时不用解旋酶而是用热变性处理的方法打开dna双链,因此需要使用耐高温的dna聚合酶;pcr的每次循环可以分为变性、复性和延伸三个步骤,五次循环后得到25个dna片段。pcr技术有广泛的应用,可以用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、克隆基因等方面。6(1)愈伤组织(2)单核(靠边)完全未开放(3)显微镜醋酸洋红法蓝黑(4)生长素和细胞分裂素(5)高压蒸汽灭菌解析 (1)植物组织培养主要包括脱分化、再分化两个过程,花粉在诱导培养基上经脱分化先形成愈伤组织,再将其诱导分化成植株。(2)花粉发育过程中,在单核期,花药培育成功率高,在此时期挑选花药,应该选择完全未开放的花蕾,有利于组织培养。(3)要观察花粉的发育应用显微镜观察,用醋酸洋红法染色,对于不易着色的,采用焙花青铬矾法能将花粉细胞核染成蓝黑色。(4)植物组织培养添加生长素和细胞分裂素有利于离体组织、细胞脱分化、再分化形成植物体。(5)高压蒸汽灭菌有利于培养基在接种前和完成实验后的灭菌。7(1)胡萝卜素易溶于有机溶剂过滤(2)温度时间(3)水浴(4)蒸馏(5)纸层析标准样品解析 (1)萃取法的原理利用的是不同的物质在同一溶剂中的溶解度不同。(2)在对材料的干燥过程中温度不能过高,温度过高则容易使材料发焦变糊,同时也要注意控制干燥的时间,防止时间过长导致材料变化。(3)水浴加热可以控制温度,防止温度过高。(4)植物芳香油具有较强的挥发性,还能随水蒸气蒸发,因此可以利用蒸馏法提取植物芳香油。(5)对色素的分离和鉴定可以采用纸层析法,在对其纯度鉴定时应与标准样品互相对照。专题限时集训(十六)1(1)37(或36.50.5)反(或逆)转录(2)a(3)终止(4)抗原抗体解析 (1)人体的体温是37 ,因此培养人体细胞的最适宜温度就是37 。由mrna到cdna的过程是反转录过程。(2)根据图解可知目的基因的两端分别是由限制酶ecor、bgl切割的,同一限制酶切割才能形成相同的黏性末端,表达载体1中具有ecor的识别位点,因此位点a应与限制酶bgl的识别位点相同,才能成功构建表达载体2。(3)mrna中如果含有终止密码子,则会导致翻译终止,不能合成目的蛋白。(4)检测蛋白质,可以利用蛋白质作为抗原,导致机体产生抗体进行检测,由于抗体具有专一性,因此抗原抗体杂交技术可以迅速检测出酵母菌是否表达出il2hsa融合蛋白。2(1)灭活的甲型h1n1病毒b淋巴(2)聚乙二醇3杂交瘤克隆化抗体(3)抗体存留时间较短、h1n1病毒易变异解析 (1)a过程是在小鼠中获取产生特定抗体的效应b淋巴细胞,因此在a过程之前应对小鼠注射相应的抗原,即灭活的甲型h1n1病毒。细胞甲是小鼠的骨髓瘤细胞,则细胞乙是已经免疫的b淋巴细胞。(2)促进动物细胞融合的化学诱导剂是聚乙二醇,若只考虑两个细胞融合,则有骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合、b淋巴细胞与b淋巴细胞融合、骨髓瘤细胞与b淋巴细胞融合,共3种。在特定的培养基筛选出杂交瘤细胞用于培养,因为此细胞既能无限增殖又能产生抗体。筛选出此细胞后,还需要进行克隆化培养和抗体检测,经过多次筛选,才能获得足够数量的能够分泌抗体的杂交瘤细胞。(3)由于抗体是免疫球蛋白,蛋白质易被分解,在人体内不能长时间存留,又由于甲型h1n1病毒的遗传物质是rna,易发生变异,因此注射了抗体的人群不能长期具有对甲流感的免疫力。3(1)限制性核酸内切酶dna连接酶卡那霉素(2)植物组织培养植物细胞的全能性(3)胚状体(4)放射性同位素(或荧光分子)标记的抗虫基因解析 (1)对抗虫基因和质粒进行切割使用同种限制性核酸内切酶,将抗虫基因和质粒结合成重组质粒使用dna连接酶,在培养基中加入卡那霉素,可以筛选出已导入抗虫基因的植物组织细胞。(2)植物细胞具有全能性,利用植物组织培养技术,可以将单个的植物细胞培养成一株幼苗。(3)通过组织培养技术,可把植物组织的细胞培养成有根、茎、叶、分生组织等结构的胚状体。(4)dna探针是以检测对象的特异性dna片段为模板,人工合成的带有放射性同位素标记的单链dna片段。4(1)抗原免疫电激(2)限制性核酸内切酶检测目的基因在受体细胞中是否进行了表达(或检测受体细胞是否显示出目的基因控制的性状)既能无限增殖又能产生专一性的抗体(3)解析 (1)若用细胞融合技术制备单克隆抗体,为获得能产生特定抗体的小鼠b淋巴细胞,必须对实验小鼠进行抗原免疫处理。诱导融合时常用的物理方法是电激。(2)基因工程主要包括四个步骤:目的基因的提取,表达载体的构建,将目的基因导入受体细胞,目的基因的检测和表达。其中,为检测,其目的为检测目的基因在受体细胞中是否进行了表达;代表的细胞具有的特点是既能无限增殖,又能产生专一性的抗体。(3)利用的方法为:用无限增殖细胞的细胞质和特定抗原刺激的b细胞的细胞核构建重组细胞再进行体外培养。5(1)促性腺激素(2)胚胎(3)生理状态(4)d、e(5)滋养层(6)不一定相同因为这些胚胎可能由不同的受精卵发育而来,基因型不同,也可能是分割胚胎,基因型相同解析 (1)促进超数排卵的方法是向供体母牛体内注射促性腺激素。(2)在胚胎移植中冲卵是将供体母牛子宫内的早期胚胎冲洗出来。(3)做同期发情处理后,供体与受体动物的生理状态相同。(4)图中的d为桑椹胚,e为囊胚,胚胎移植时通常移植桑椹胚或囊胚,因为它们还没有与母体建立组织和生理上的联系。(5)囊胚包括滋养层和内细胞团,图中3为滋养层,将来发育成胎膜和胎盘。(6)胚胎由不同的受精卵发育而来,基因型不同,若来源于分割的胚胎,基因型相同。6(1)使卵母细胞成熟(或使卵母细胞获得受精能力)获能(2)co2培养液(基)的ph(3)胚胎移植提高优良母畜的繁殖率(4)细胞核去核的卵核移植(或克隆)(5)显微注射法牛奶中含有人类白细胞介素(或牛乳腺细胞已合成人类白细胞介素)解析 (1)人工采集的卵母细胞要在体外培养成熟后才能与获能的精子完成受精,同理,在体外受精前,要对精子进行获能处理。(2)体外培养受精卵所需气体主要有o2和co2,o2是细胞代谢必需的,co2的主要作用是维持培养液(基)的ph稳定。(3)把早期胚胎移入受体母牛子宫的过程称为胚胎移植,意义在于可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。(4)将转基因牛体细胞的细胞核转入去核的卵母细胞中,构成重组细胞,发育成与供体相同性状的个体,该技术为核移植技术。(5)基因工程中把目的基因导入动物细胞最常用的方法是显微注射法;获得基因表达产

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