叶绿素提取分离和理化性质.doc

华 南 师 范 大 学 实 验 报 告学生姓名 何茂辉 学 号 20062501302 专 业 生物科学 年级、班级 06科三 课程名称 植物生理学实验 实验项目 实验类型 验证 设计 综合 实验时间 08 年 11 月 11 日 实验指导老师 冷佳奕、黄胜琴 实验评分 叶绿素提取分离和理化性质实验材料：大叶紫薇叶片加入碳酸钙、石英砂、无水丙酮研磨实验操作：称取2g大叶紫薇叶片取少量滤液于试管荧光现象光破坏作用取少量滤液于2支试管分别观察反射光和透射光的一侧分别置于强光与黑暗处3h观察试管中溶液颜色的变化铜代反应取少量滤液于试管加浓盐酸至溶液出现褐绿色用酒精灯加热，观察试管中溶液颜色的变化色素分离取10ml滤液于盛有20ml乙醚的分液漏斗中，摇动加入30ml蒸馏水，摇动，静置片刻弃去下层丙酮和水用蒸馏水冲洗乙醚溶液2次加入5ml 30KOH甲醇溶液，摇动，静置10min加入10ml蒸馏水，摇动，静置分离得到绿色素和黄色素溶液分别测定390-770nm的光谱过滤，取滤液实验结果：理化性质现象荧光现象透射光一侧呈绿色 反射光一侧呈血红色光破坏作用黑暗处试管中溶液呈绿色 强光处试管中溶液呈褐绿色铜代反应试管中溶液颜色变化：褐绿色绿色分析： 叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光。 叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快。 叶绿素中的镁可被H+取代而生成褐绿色的去镁叶绿素。加入铜盐作用，去镁叶绿素则成为绿色的铜代叶绿素。思考题：为什么用80有机溶剂提取叶绿素？由于植物叶子中含有水分，用纯丙酮提取，其提取液中丙酮最终浓度近似80。在提取叶绿素过程中加碳酸钙的作用？对量有何要求？加入碳酸钙只要是为了保护色素，防止在研磨的过程中被破坏。加入少许即可，若加入过多，会影响渗透压破坏叶绿素。纸层析法分离叶绿素的原理？其中流动相和固定相分别是什么？利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中的分配系数差异，将它们分离。流动相是四氯化碳，固定相是滤纸上的水。为什么绿色叶子中的叶绿素在光下不被破坏？因为绿色叶子中的叶绿素与蛋白质结合，所以不被破坏。铜在叶绿素中取代镁的作用，有何使用意义？铜代叶绿素很稳定,在光下不易被破坏,故常用此法制做植物的原色标本华 南 师 范 大 学 实 验 报 告学生姓名 何茂辉 学 号 20062501302 专 业 生物科学 年级、班级 06科三 课程名称 植物生理学实验 实验项目 实验类型 验证 设计 综合 实验时间 08 年 11 月 11 日 实验指导老师 冷佳奕、黄胜琴 实验评分 叶绿素含量的测定实验材料：大叶紫薇叶片实验操作：称取0.1g大叶紫薇叶片80丙酮定容至25ml过滤，取滤液加入碳酸钙、石英砂、无水丙酮研磨测定OD663、OD645静置10min实验结果：OD6630.078OD6450.418代入公式得出叶绿素浓度Ca=12.7 OD663-2.69 OD645= -0.13382 mg/LCb=22.9 OD645-4.68 OD663= 9.20716 mg/LCT=8.02 OD663+20.21 OD645= 9.07334 mg/L代入公式得出叶绿素含量叶绿素含量=C25/1001/w物质含量(mg/g)叶绿素a-0.03346叶绿素b2.30179叶绿素2.268335分析：测定叶绿素含量的过程中造成的偶然误差过大，测得数值代入公式后得出负值，因此实验过程应尽量减少偶然误差，可做平行实验求平均值以减少误差。思考题：确定溶液测定光密度值时的波长依据？叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b的最大吸收峰在645nm，叶绿素a和b的吸收光谱曲线彼此有重叠。如何计算叶绿素？表示单位？公式中k值与什么因素有关？根据Lambert-Beer定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD之间有如下的关系：OD1=Caka1+Cbkb1OD2=Caka2+Cbkb2Ca 、Cb表示单位g/L, 公式中k值与组分、提取液、浓度有关。要获得较准确叶绿素含量结果，在操作过程中注意哪些影响因素？要获得较准确叶绿素含量结果，应该注意提取过程时充分研磨和洗涤研钵时尽量洗涤充分，确保提取液中的叶绿素含量与叶片的叶绿素含量接近。提出优化实验的想法。由于本次实验是根据Lambert-Beer定律间接测定叶绿素的含量，因此实验中的偶然误差对实验结果有很大的影响，因此应从设置平衡实验着手。华 南 师 范 大 学 实 验 报 告学生姓名 何茂辉 学 号 20062501302 专 业 生物科学 年级、班级 06科三 课程名称 植物生理学实验 实验项目 实验类型 验证 设计 综合 实验时间 08 年 11 月 11 日 实验指导老师 冷佳奕、黄胜琴 实验评分 红墨水测定种子活力及玉米种子萌发实验材料：玉米种子实验操作：测定OD560加入15ml NaAc缓冲液(pH=5.0)洗研钵称取0.1g大叶紫薇叶片收集研磨液与洗液，4000rpm离心10min取上清液70水浴5min加入碳酸钙、石英砂、无水丙酮研磨分别取0.5ml上清液+0.5ml 4mg/ml糊精 40水浴0min和10min分别加入5ml I2-KI溶液实验结果：玉米种子活力玉米种子萌发率0.950.325思考题：TTC法和红墨水法测定种子活力的优点与不足？优点：都能简单、快速、直观地测定种子活力。不足：