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分类号：R361学校代码： 10438密 级： 学 号： 硕士学位论文题目HIF-1、VEGF、uPA在胶质瘤中的表达及其与血管生成的关系院、系（所）临 床 学 院专业外 科 学学位类型医 学 专 业 学 位申 请 人 导师 教授 教授 论文起止日期: 2012年01月-2013年03月1分类号：R361学校代码： 10438密 级： 学 号： 硕士学位论文题目HIF-1、VEGF、uPA在胶质瘤中的表达及其与血管生成的关系院、系（所）临 床 学 院专业外 科 学学位类型医 学 科 学 学 位申 请 人 导师 教授 教授 论文起止日期: 2012年01月-2013年03月18潍坊医学院硕士学位论文学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中依法引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其它学位申请的论文或成果。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本人按照学校规定的方式，对因学位论文不当取得学位而给学校造成的名誉损害进行公开道歉；4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：_ 签字日期： 年 月 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解潍坊医学院有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权潍坊医学院可以将本学位论文全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用该学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为潍坊医学院。保密论文解密后仍适用于本声明。论文作者签名：_ 日期： 年 月 日导 师 签 名：_ 日期： 年 月 日（本声明的版权归潍坊医学院所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用）目 录一、中文摘要1二、英文摘要4三、符号说明7四、正 文（一）前 言8（二）材料和方法10（三）结 果17（四）讨 论20（五）结 论28五、附图表29六、参考文献37七、文献综述42八、致 谢59九、攻读学位期间撰写的论文60作用作用作用作用作用作用作用研 究 生：王 二 三专 业：病理学与病理生理学导 师：吕 一 一 教授中文摘要目的：本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验本实验。方法：参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照参照。 结果：一.尿酸对脑组织形态学变化的影响1.脑组织含水量：正常对照组的平均含水量是0.820.08，HI组的平均含水量是0.880.10，UA组的平均含水量是0.840.15。HI组新生大鼠脑组织含水量显著高于正常组（P0.01）, UA组新生大鼠脑组织含水量比HI组明显降低（P0.05）。2.氯化2，3，5-三苯基四氮唑（TTC）染色：各组新生大鼠在脑缺血24小时进行TTC染色，结果显示正常组脑组织无梗死，HI组脑组织梗死体积百分比为40.373.25%，UA组脑组织梗死体积百分比为30.071.52%，UA组脑组织梗死体积百分比显著低于HI组，差异具有统计学意义（P0.01）。而正常对照组与UA组相比脑组织梗死体积百分比仍有显著差别（P0.01）。 3.HE染色：正常对照组脑组织结构完整,神经元清晰,HI组脑组织结构紊乱，大片的神经元变性、坏死和凋亡。UA组较HI组神经元分布规则，细胞皱缩不明显、细胞核浓缩和神经元数量减少。UA组与HI组相比，神经元形态存在明显差别。结论：1.尿酸用药后可降低新生大鼠脑缺血缺氧损伤程度，对脑组织具有神经保护作用。2.尿酸的神经保护作用是通过抗氧化抗凋亡机制来实现的。关键词：尿酸、脑缺血缺氧、神经保护作用、三硝基酪氨酸、凋亡NEUROPROTECTIVE EFFECTS OF URIC ACID IN A NEONATAL HYPOXIC ISCHEMIC RAT MODELPostgraduateLi yiSpecialityPathology and PathophysiologySupervisor Professor Lu yiyiABSTRACTObjective: Methods: Results: Keywords: 符 号 说 明英文缩写英文全称中文全称HIhypoxic ischemia缺血缺氧HIEhypoxic ischemia encephalopathy缺血缺氧脑病HIBDhypoxic ischemia brain damage缺血缺氧性脑损伤ROSreactive oxygen specie 活性氧RNSreactive nitrogen species活性氮FRfree radical自由基TTC2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Hematoxylin eosin氯化2，3，5-三苯基四氮唑HEHematoxylin eosin苏木素Nissltoluidine blue甲苯胺蓝TUNELterminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labelingTDT介导的生物素dUTPNOCaspase-3nitric oxideCyteine aspartate specific proteinase-3一氧化氮半胱胺酸蛋白酶蛋白-3Caspase-9Cyteine aspartate specific proteinase-9半胱胺酸蛋白酶蛋白-9ANOVAanalysis of variance方差分析O2superoxide radicals超氧阴离子1O2singlet oxygen单线态氧H2O2hydrogen peroxide 过氧化氢OHhydroxyl radical 羟基ONOOperoxynitrite亚硝酸盐UAuric acid尿酸XDHxanthine dehydrogenase黄嘌呤脱氢酶XOxanthine oxidase黄嘌呤氧化酶SODsuperoxide dismutase超氧化物歧化酶前 言材料与方法一 实验材料1.主要仪器和器材250-500透明动物加压仓上海701所杨园医用氧舱厂501型超级数显恒温水浴上海浦东跃欣科学仪器厂SW-CJ-IF型超净工作台德国Leica公司Leica020-519.010 光学显微镜德国Leica公司5810 R 低温高速离心机德国Eppendorf公司摄像及FR-988生物显微图像分析系统上海复日科技有限公司Smart Scape 2002生物图像分析软件 上海复日公司MTFG-A 通风柜 深圳医疗器械公司微量可调移液器 法国Gilson公司THZ-C 恒温振荡器 江苏太仓市实验设备厂MLS-3020 高压蒸汽消毒锅 日本三洋电器公司EL800 酶联免疫检测仪 美国Biokit公司EL800 Bioelisa Reader 美国Bio-Tek InstrumentsPOLARstar microplate reader 德国BMG公司DL-360超声波仪 浙江石浦海天电子仪器厂Milli-Q 去离子水制备仪 美国Millipor有限公司AB 104-N 精密电子天平 美国Mettler Toled有限公司Delta 320 电子PH计美国Mettler Toled有限公司电子天平上海第一天平厂电子摇床上海离心机研究所THZ-C恒温振荡器 江苏太仓市实验设备厂水浴锅上海医疗器械七厂Incucell 55型温箱 德国Incucell有限公司DK-8A型电热恒温水槽上海精宏实验设备有限公司DK-8D型电热恒温水槽 上海精宏实验设备有限公司超低温冰箱美国公司LKB-型超薄切片机德国Leica公司CM1900恒温冷冻切片机 德国Leica公司微波炉Galanz公司-70冷柜 Harris Manufacturing公司干热消毒柜Stuart Scientific2.试剂及药品尿酸 美国Sigma公司一氧化氮检测试剂盒碧云天生物技术研究所甲苯胺蓝 中国医药集团上海化学试剂公司In Situ Cell Death Detection Kit瑞士Roche公司Caspase-3/CPP32 Fluorometric Assay Kit 美国Bio Vision公司Ant-nitrotyrosine:兔抗鼠美国Upstate公司TTC 中国医药集团上海化学试剂公司多聚甲醛中国医药集团上海化学试剂公司NaCl 上海生化试剂一厂NaH2PO4.2H2O上海生化试剂一厂Na2HPO4.12H2O 上海生化试剂一厂考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒南京建成生物科技公司蛋白酶抑制剂 康成生物有限公司甲醛 中国医药集团上海化学试剂公司二甲苯 中国医药集团上海化学试剂公司中性树胶 中国医药集团上海化学试剂公司乙醚 中国医药集团上海化学试剂公司30%H2O2 中国医药集团上海化学试剂公司无水乙醇中国医药集团上海化学试剂公司工业氮气工业氧气 上海江南气体公司上海江南气体公司 3.主要试剂的配制（1）0.9%生理盐水NaCl ddH2O 混匀后高温高压消毒备用9g1000 ml（2）0.2M PBS (PH7.4) NaH2PO4.2H2O Na2HPO4.12H2O 加入ddH2O定容至1000 ml5.6 g61.6 g（3）1% TTC TTC 0.2M PBS 即配即用，避光保存0.5 g50 ml（4）尿酸 尿酸 0.9%生理盐水 溶解后振荡，用时振荡0.3 g10 ml（5）4%中性甲醛 40%甲醛 0.2M PBS 加入ddH2O定容至100ml10ml50ml（6）0.01M PBS(PH7.4) Na2HPO4.12H2O NaH2PO4.2H2O NaCl 加入ddH2O定容至1000 ml2.90 g0.2964 g9 g（7）1mol/l MgCl2溶液 MgCl2 加入ddH2O定容至100ml高温灭菌，室温储存20.33 g(8)TSM1溶液Tris-base NaCl 1mol/l MgCl2溶液 加入双蒸水400ml使其完全溶解用适量浓HCl调pH至8.0后定容至500 ml6.057 g2.922 g5 ml(9) TSM2溶液Tris-base NaCl 1mol/l MgCl2溶液 加入双蒸水400ml使其完全溶解用适量浓HCl调pH至9.5后定容至500 ml6.057 g2.922 g25 ml（10）1%甲苯胺蓝 甲苯胺蓝 蒸馏水 混匀器上混匀1 g100 ml（11）甲醇过氧化氢 36%乙酸 无水乙醇 30%过氧化氢 0.01M PBS 7.5 ml15 ml1 ml至30 ml（12）10PBS(pH7.4) NaCl KCl Na2HPO4.12H2O NaH2PO4.2H2O 加入双蒸水定容至100ml，过滤除菌分装保存于-208.0 g4.0 g3.48 g0.2 g（13）考马斯亮蓝蛋白贮备液（100T） 临用时按所需量用蒸馏水1:4稀释（即5倍稀释），配成应用液（现用现配）。4保存。（14）一氧化氮标准品NaNO2在1 ml中取50 ml,用0.9%的生理盐水稀释标准品。二 实验方法结 果 讨 论结 论附 图 表参考文献1Felderhoff-Mueser U, Bittigau P, Sifringer M, et al. Oxygen causes cell death in the developing brain J. Neurobiol Dis, 2004, 17(2):273282.2Hintz SR, Kendrick DE, Vohr BR, et al. Changes in neurodevelopmental outcomes at 18 to 22 months corrected age among infants of less than 25 weeks gestational age born in 19931999J. Pediatrics, 2005,115 (6):16451651.文献综述一一的研究进展综述：王二三 审校：李二三 参考文献1Snchez-Lozada LG, Nakagawa T, Kang DH, et al. Hormonal and cytokine effects of uric acid J. Curr Opin Nephrol Hypertens, 2006, 15 (1):30-33.2Chamorro A, Planas AM, Muner DS, e