芦丁和槲皮素的化学检识 ppt课件.ppt

芦丁的鉴别及含量测定 小组成员 陈丽 陈惠渝 黄雄 李钰川 实验目的 熟悉黄酮类化合物的化学检识的常用方法掌握芦丁紫外吸收光谱测定的方法与原理学习用紫外分光光度法测定芦丁提取物的含量 实验原理芦丁和槲皮素的化学检识 实验原理 对不同强度碱液的溶解度试验 黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基 故显酸性 可溶于碱性水溶液 吡啶 甲酰胺及二甲基甲酰胺中 由于酚羟基的数目及位置不同 酸性强弱也不同 以黄酮为例 其酚羟基酸性强弱顺序依次为 7 4 二OH 7 或4 OH 一般酚OH 5 OH 3 OH因此 酚羟基的数目及位置不同的黄酮类化合物酸性不同 在不同强度碱液中的溶解度也不同 实验原理 浓硫酸和浓盐酸反应 吡喃环上的1 氧原子 因有未共用的电子对 故表现微弱的碱性 可与强无机酸 如浓硫酸 盐酸等生成盐 但生成的盐极不稳定 加水后即可分解 另外 黄酮类化合物溶于浓硫酸中常常表现出特殊的颜色 可用于鉴别 实验原理 Molish反应 糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与 萘酚作用形成紫红色复合物 在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环 因此又称紫环反应 Molish反应可以鉴定单糖的存在 实验原理 盐酸 镁粉试验 盐酸 镁粉反应的机制过去解释为由于生成了花色苷元所致 现在认为是因为生成了阳碳离子的缘故 FeCl3及AlCl3反应 黄酮类化合物分子中常含有下列结构单元 故常可与铝盐 铅盐 锆盐 镁盐等试剂反应 生成有色络合物 实验原理 苯甲酰基 桂皮酰基 黄酮类化合物结构中的交叉共轭 芦丁的紫外吸收光谱的测定 实验原理 芦丁的紫外吸收光谱的测定多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成 带I在300 400nm区间 由B环桂皮酰系统的电子跃迁引起 B B 实验原理 带II在240 285nm区间 由A环苯甲酰系统的电子跃迁所引起 A A 实验原理 苯甲酰基 桂皮酰基 黄酮类化合物结构中的交叉共轭 芦丁的紫外吸收光谱的测定 说明 1 NaOMe或NaOAc OH ONa 变为离子化合物 共轭系统中的电子云密度增加 红移另有3 4 OH或3 3 4 OH时 在NaOMe作用下易氧化破坏 故峰有衰减 2 NaOAc为弱碱 仅使酸性较强者 如7 4 OH解离 实验原理芦丁的紫外吸收光谱测定 3 形成络合物的能力 黄酮醇3 OH 黄酮5 OH 二氢黄酮5 OH 邻二酚羟基 二氢黄酮醇5 OH邻二酚羟基和二氢黄酮醇5 OH在酸性条件下不与AlCl3络合 但不在酸性条件下 五者皆与Al3 络合 形成络合物越稳定 红移越多 4 根据只加AlCl3和加入AlCl3及盐酸的紫外光谱吸收峰位相减的结果 可以判断邻二酚羟基的取代情况 加入诊断试剂后引起的位移及结构测定 实验原理 芦丁提取物含量的测定 在黄酮类化合物的紫外光谱图上主要有两个吸收带 环肉桂酰系统引起的吸收带1 300 550nm 和环苯酰系统引起的吸收带2 240 280nm 若加入铝盐 则铝离子与黄酮化合物形成稳定的配合物 带2会明显向长波方向移动 红移 在NaNO2的强碱性溶液中 其在500nm左右吸光度值最大 从而为分光光度法测定提供了可靠的依据注意 用NaNO2 Al NO3 3 NaOH体系分光光度法测定总黄酮含量时 必须严格保证稀释定容用乙醇的浓度 试剂加入时间 显色时间等测试环节前后完全一致 否则会出现很大误差 实验试剂及仪器 试剂 芦丁及槲皮素样品 稀氨水 5 NaHCO3水溶液 5 Na2CO3水溶液 1 NaOH水溶液 浓酸 浓硫酸 乙醇 萘酚 镁粉 1 FeCl3醇溶液 1 AlCl3醇溶液 无水甲醇 甲醇钠溶液 AlCl3无水甲醇溶液 1 1 盐酸 无水醋酸钠 硼酸 60 乙醇 30 乙醇 亚硝酸钠溶液 1 20 硝酸铝溶液 1 10 4 NaOH水溶液 蒸馏水等仪器 试管若干支 滴管若干个 移液管若干支 公用 药匙 100ml 50ml 10ml容量瓶各一个 紫外分光光度计等 实验步骤 芦丁和槲皮素的化学检识 1 对不同强度碱液的溶解度试验 芦丁 槲皮素 实验步骤 2 浓硫酸和浓盐酸反应 3 Molish反应 实验步骤 4 盐酸 镁粉试验 实验步骤 5 FeCl3反应 实验步骤 6 AlCl3反应芦丁的紫外吸收光谱测定芦丁提取物含量的测定 实验步骤 芦丁的紫外吸收光谱测定 测定方法 精密称取芦丁l0mg于l00mL量瓶中 加甲醇溶解并稀释到刻度 摇匀 从中吸取5mL于50mL量瓶中 用甲醇稀释至刻度 摇匀备用 10 g mL A 甲醇光谱 取样品溶液置石英杯中 200 400nm内进行扫描 重复一次 观察紫外光谱 B 甲醇钠光谱 取样品液置石英杯中 加入甲醇钠溶液3滴后 立即测定 放5分钟后再测一次 C AlCl3光谱 在置有样品液的石英杯中加入AlCl3溶液6滴 停1分钟后进行测定 然后加入3滴盐酸 HCl 水 1 1 再进行测定 实验步骤 D 醋酸钠光谱 取样品溶液3mL 加入过量的无水醋酸钠固体 摇匀 杯底剩有少量的醋酸钠 2分钟内测定 5 10分钟后再测一次 E 醋酸钠硼酸光谱 方法2 实验步骤 芦丁提取物的含量测定 1 标准曲线的绘制 2 测定 精密称取精制芦丁20mg 置l00mL量瓶中 加60 乙醇适量 置水浴上微热使溶解 放冷 60 乙醇稀释至刻度 摇匀 精密量取25mL 置50mL量瓶中 用蒸馏水稀释至刻度 摇匀 即得0 1mg mL的样品液 精密吸取样品液3 0mL置10mL量瓶中 加30 乙醇使成5mL 精密加亚硝酸钠溶液 1 20 0 3mL 摇匀 放置6分钟 再加硝酸铝溶液 1 10 0 3mL 摇匀 放置