兽药检验薄层色谱法讲义(2010版兽药典二部).doc

薄层色谱法（二部）一、 目的该操作规程用于规范兽用中药材及其制剂薄层色谱的基本操作。二、适用范围该操作规程适用于兽用中药材及其制剂的薄层色谱操作。也适用于兽用化学药品、抗生素的薄层色谱鉴别、检查。三、检验1定义薄层色谱法，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、铝箔片或聚酯薄膜上使成一均匀的薄层，将供试品和相应的对照物点于薄层板的一端，以适宜的溶剂置展开容器内展开，使供试品所含的相应成分分离，采用适宜的显色剂或显色方法显色，将供试品色谱与对照物色谱相比较，或采用薄层扫描仪扫描，以进行鉴别、检查或含量测定的方法。2 仪器与材料（1） 薄层板目前使用的薄层板有市售薄层板和自制薄层板两种。一般市售薄层板分离效果较自制薄层板好。如需特殊薄层板时，可采用自制薄层板。（2） 点样器 a. 手动点样 采用微升毛细管、微量注射器或配合与之相应的手动点样仪等。b. 自动点样 采用半自动点样仪或全自动点样仪，按预设程序自动点样。(3) 展开容器 又称展开缸，为大小适宜的密闭展开容器。有双槽展开缸及平底展开缸等。此外，也有自动展开仪，可将薄层板按预定程序单次或多次展开，提高薄层展开的重现性。(4) 薄层板加热设备 可使用烘箱或专用的薄层加热台。(5) 干燥器 供存放薄层板用。(6) 显色设备 包括喷雾显色、浸渍显色以及蒸气熏蒸显色的设备。a. 喷雾显色 多用玻璃喷雾瓶或其它专用的喷雾设备，喷雾形成的雾滴应细小且均匀。b. 浸渍显色 多在盛有显色剂的展开缸或其它专用的浸渍设备内进行。c. 蒸气熏蒸显色 可在密闭的展开缸、干燥器等设备中进行。(7) 检视和记录设备 由暗箱及摄像设备组成。a. 暗箱 配备可见光、254nm和365nm紫外光光源b. 摄像设备 包括光学照相机、摄像头或数码相机等。(8) 薄层扫描仪薄层扫描仪是薄层色谱定性定量分析的专用仪器。主要有光源、单色器、薄层板台、检测器和工作站等组成。有关内容详见薄层色谱扫描法操作规程。四、 检验步骤和注意事项1.薄层板的制备和处理除另有规定外，自制薄层板应采用大小为20cm20cm、20cm10cm、10cm10cm等规格的光滑、平整、薄厚均匀的玻璃板进行涂布。涂布时，将l份固定相加3份水（或其他加有黏合剂的水溶液适量）在研钵中用研杵沿同一方向充分研磨，调成均匀糊状物（有条件的可使用匀浆器使之进一步混匀），去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（薄层厚度一般为0.20.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上室温下晾干，活化备用。薄层板表面应均匀、平整、无麻点、无气泡、无破损及污染。如薄层板放置过久被杂质污染，可用三氯甲烷、甲醇或二者的混和溶剂展开预洗。市售薄层板和自制薄层板使用前一般应于110活化30分钟，即置干燥剂的干燥箱中备用。2. 点样薄层点样应在洁净干燥的环境中进行。除另有规定外，点样一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为24mm（高效薄层板为12mm）。点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为1.02.0cm（高效薄层板可不小于5mm），距两边不少于10mm。可采用在薄层板的两边各刮去约5mm的固定相等方法，以减小边缘效应。3 展开剂的配制 展开剂宜新鲜配制，配制展开剂时，各溶剂应分别量取，不应用一支量筒递加。如需分层则按规定要求放置分层后，分取需要的一相（上层或下层）备用。应注意放置分层时的温度和时间，因不同温度放置分层后，展开剂的实际配比会发生改变；放置时间长短也可能影响展开剂的实际配比。 4 展开 选择大小适宜的展开容器，将点好样品的薄层板放入加有展开剂的展开容器中，薄层板浸入展开剂的深度以距原点0.51cm为宜，密闭，展开。除另有规定外，一般上行展开1015cm，高效薄层板上行展开58cm，当溶剂前沿到达规定的展距时，取出薄层板，晾干，以备检测。展开前如需溶剂蒸气预平衡，可在展开室中加入适量的展开剂，密闭，放置1530分钟，待溶剂蒸气平衡后，迅速放入载有供试品的薄层板，立即密闭，展开；必要时在展开室内壁贴与展开缸内径同样大小的滤纸，一端浸入展开剂中，则易于蒸气平衡。如规定薄层板也需要预饱和者，则在开始时，即将点好样品的薄层板放入展开缸中没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此槽中，展开。必要时可进行二次展开或双向展开；采用二次展开时，第一次展开的展距一般为7cm。 5 显色 按规定的显色方法操作。喷洒显色剂后如需加热显色应注意控制加热温度和时间，尤其含羧甲基纤维素钠的薄层板温度过高或加热时间过长易焦化；如用硫酸等试剂则可使板面炭化而影响显色效果。有的成分加显色剂后加热温度和加热时间不同，显色效果可能有差别。有的品种用蒸气熏后（如碘蒸气）显色者，可在密闭容器中放置适当时间至斑点显色清晰。6 检视 按规定方法进行检视(在日光下和紫外光下)，将供试品色谱与标准品、对照品或对照药材色谱进行比较。五、记录 1 实验日期。 2 供试品及标准品、对照品或对照药材的名称、来源及批号。3 供试品溶液及标准品溶液、对照品溶液或对照药材溶液的制备方法和浓度。4 薄层板类型，生产厂家及批号，必要时记录自制薄层板的制备方法。5 点样量。6 展开剂。 7 展开时的室温及相对湿度。8 必要时记录展开方式、展距 9 显色方法。 10 检视结果。 （1） 可使用光学照相机、摄像头以及数码相机等设备拍摄色谱结果，并将拍摄的结果打印后附于检