动物饲料常规成分的测定方法.doc

一、自我介绍：办公室2#309，8241257，宅8241523。二、上课安排：63学时，内容安排：1、实验室基本操作技术、饲料分析样本的采集与制备、初水分的测定；4学时2、饲料中干物质的测定；4学时3、饲料中粗蛋白质的测定；12学时4、饲料中粗脂肪的测定；4学时5、饲料中粗纤维的测定；4学时6、饲料中粗灰分的测定；4学时7、饲料中钙的测定（高锰酸钾法）；4学时8、饲料中磷的测定；4学时9、饲料中食盐的测定；4学时10、饲料中氟的测定；4学时11、饲料中总能的测定；12学时12、油脂中酸价的测定；3学时三、教学目的与要求1.实验前认真预习，领会实验原理，了解实验步骤和注意事项，做到心中有数；2.实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，并及时记录；3.要认真写好实验报告。实验报告一般包括题目、日期、实验目的、简单原理、原始记录、结果（附计算公式）和讨论。四、课外学习要求预习下一个实验。五、课程要求1课前必须认真预习。理解实验原理，了解实验步骤，探寻影响实验结果的关键环节，做好必要的预习笔记。未预习者不得进行实验。2所有实验数据，尤其是各种原始数据，必须随时记录在专用的、预先编好页码的实验记录本上。不得记录在其他任何地方，不得涂改原始实验数据。3认真阅读“实验室安全制度”和“化学实验课学生守则”，遵守实验室的各项规章制度。树立环境保护意识，尽量降低化学物质（特别是有毒有害试剂以及洗液、洗衣粉等）的消耗。4保持实验室内安静、实验台面清洁整齐。爱护仪器和公共设施，树立良好的公共道德。5每次实验不得迟到。迟到超过15分钟取消此次实验资格。因病、因事缺席，必须请假。6希望学生在每次实验报告后附上自己在学习本实验的感受，特别欢迎提出宝贵的意见和建议。六、成绩的确定实验考核方式为平时成绩和期末考试两部分，成绩计算方式为平时成绩占50%，期末考试占50%。平时实验成绩由以下三部分组成： 1.实验报告占30%，根据分析结果的准确度对每位学生实验成绩划分等级（根据教师预做数据进行综合评价）。2.平时预习、实验态度、实验台整洁、实验操作、报告书写及值日卫生的状况等占40%。 3.对已知物的定量分析（含操作、结果、报告等）占30%。绪论第一节 饲料分析实验室基本操作技术一、实验室规则1、实验室须保持清洁整齐：仪器药品的放置应有次序；试剂药品不得洒在桌面或地面上；玻璃仪器用过后应随时洗净、烘干；实验废弃物应及时弃去。2、使用的玻璃仪器必须清洁，实验过程中产生的废液倒入水槽中，放水冲走；强酸强碱废液须先用水稀释，然后倒入废液缸内，以免腐蚀水管；固体物如滤纸、残渣须倒入垃圾桶或袋，不得投入水槽。3、凡发生烟雾、或有毒有害气体的操作，都须在通风橱中进行。4、使用易燃药品如乙醚、酒精等，应远离明火，以防着火引起火灾，使用电炉、恒温箱、高温炉等时，人不得远离，以防意外。5、精密仪器如分光光度计、氧弹测热计等应特别爱护，使用前必须熟读使用方法，必须在教师的指导下严格按操作规程使用。遇有问题，及时请教教师，不得任意拆卸。6、取用试剂或标准溶液，用后必须立即将原瓶塞盖严，放回原处，自瓶中取出的试剂如未用尽，切勿倒回瓶内，一面掺混。量取有毒有害试剂时，切勿用口吸，可用移液管或量筒，或借助洗耳球。7、配制的试剂，必须贴上标签，注明试剂名称、浓度、时间等信息。8、注意节约水、电、试剂、药品等，不得浪费滤纸及其它消耗品，养成节约的好习惯。9、实验室内不许吸烟，不许打闹嬉戏，不许干与实验无关的事情。二、基本操作1、仪器的洗涤洗涤方法：用水刷洗：可溶性物质或附着在器壁上的灰尘等；用去污粉或洗涤剂洗：油污等；用铬酸洗液洗：等体积的浓硫酸和饱和的重铬酸钾溶液配制而成，对有机物和油污等具有很强的去污能力，尤其是口小管细的仪器；再用蒸馏水，遵循“少量多次”的原则。判断仪器洗涤“干净”的标准：将仪器倒置，其中的水可以完全流尽，而没有水珠附着在器壁上。2、仪器的干燥加热烘干；晾干或吹干3、仪器标号铅笔标号：有磨砂的表面；蜡笔标号：干的玻璃器皿；记号笔：不能用于加热的器皿；氯化铁+墨水灼烧：瓷坩埚。4、过滤过滤前的准备：选择合适的滤纸；加水后应有液柱；漏斗末端触及烧杯内壁。过滤：将玻璃棒垂直放在漏斗边缘，使其末端挨近滤纸上部但不接触；充满漏斗的2/3时暂停，以使杯口的最后一滴沿玻璃棒流入滤纸，不会流到烧杯外边；洗涤烧杯数次，洗液亦倒入漏斗过滤。5、常用仪器的使用吸量管：刻度吸管：准确性差，但可移任意体积；移液管：准确性高，只能移取一定体积的溶液。“快”、“吹”用干燥的吸量管移取洗涤晾干容量瓶：准确配制溶液，不是盛器。准确称样溶解于烧杯中转移到容量瓶漂洗烧杯定容摇匀；液体准确移取定容摇匀。滴定管：滴定时准确测量标准溶液体积的量器。按精密度：常量（0.1mL）、半微量（0.05mL）、微量（0.01mL）；按所盛溶液性质：酸式（活塞）、碱式（橡皮管）；按颜色：无色、棕色。涂油检验是否漏水洗涤漂洗倒满标准溶液赶气泡+滴定读数（深色溶液则从液面上沿读数）。6、常用试剂规格基准试剂：可直接配置标准溶液，不需标定；优级纯试剂：绿色标签，精密的分析工作；分析纯试剂：红色标签，多数分析科研；化学纯试剂：蓝色标签，厂矿的日常分析；试验试剂：试验中自配的试剂；普通蒸馏水、重蒸水7、化学药品的取用固体：干净的药匙；取完后立即盖上盖子；尽量不要取多；用硫酸纸，不用滤纸等，但有腐蚀性、强氧化性或易潮湿试剂不能称在纸上。液体：从滴瓶中取用时，滴管不能触及所使用的容器器壁；取细口瓶中的液体时，瓶塞反放在桌面上，有标签的一面握在手心，逐渐倾斜瓶子，倒出试剂。最后将瓶口剩余一滴试剂碰到试剂瓶中；定量取用可借助量筒或移液管，取多的试剂不准倒回原瓶，可倒入指定容器内供他人使用。第二节 饲料分析法简介饲料分析是评定饲料营养价值的一种基本方法。它可以分为概略养分分析法与纯养分分析法两种。饲料概略养分分析法是1860年德国家畜营养学家汉尼伯哥（Henneberg）和司徒门（Stohman），在总结了前人饲料分析方法的基础上汇编而成的，此法测定饲料中六大概略养分即水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、粗灰分和无氮浸出物的含量。我国国家标准中所列的六大成分的测定方法也是应用上述分析方法。但是，这套方法对某些成分的测定不够精确，因此，国内外许多学者都试图对某些测定方法进行一些改革。Van Soest（1966）建议对粗纤维的测定，改用测定中性洗纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）和酸性洗涤木质素（ADL）作为测定饲料中纤维性物质的指标，至于其他项目的分析，尚未更好的方法。随着畜禽营养科学的发展，特别是集约化生产的发展和先进分析仪器的应用，饲料分析则从过去的一般成分分析逐渐趋向于更精细的纯养分分析。纯养分分析项目包括各种矿物元素、氨基酸和维生素等。纯养分分析更进一步揭示了饲料养分的实质，对于配合全价日粮，研究和治疗畜禽营养性疾病是必不可少的。但是，纯养分分析要求设备条件比较高，因此，在当前科研和生产中，饲料一般成分分析法和纯养分分析法应相互配合，各尽所能，对评定我国饲料营养价值充分发挥各自的作用。 水分（干物质） 粗蛋白 概略养分分析 粗灰分 粗脂肪 粗纤维饲料分析 无氮浸出物 氨基酸 纯养分分析 微量元素 维生素第三节 饲料分析的误差饲料分析过程中，由于分析时使用的仪器、采用的方法、试剂条件以及分析者的操作能力等多方面因素的影响，使测定结果与真实值之间产生一定的差距，这种差距称为误差。虽然真实值客观存在，但在实际工作中却是不可知的，因为即使是一个操作熟练、经验丰富的分析者，采用最精密的仪器，对同一样品进行多次重复测定，也不一定能获得完全一致的分析结果，因此，分析结果有误差是必然的，也是不可避免的。我们的目的是要尽量减小分析过程中的误差，使误差在规定的允许范围内。要减小误差，必须先弄清误差来源。一、误差来源任何分析结果都是经过一系列操作步骤获得的，因此，分析结果的误差必然是整个操作过程中每一步产生误差的总和，其来源有以下几个方面：1 方法误差由分析方法本身造成的误差。对某一项目的测定可以采用多种分析方法，采用不同的分析方法产生的误差不同。例如对微量元素铬的测定可以采用原子吸收法，也可以采用比色法，同一操作者用这两种方法对同一样品进行测定产生的误差不同。2 仪器误差由于仪器的精密度低或仪器未进行校正产生的误差。例如容量瓶在使用时未进行校正，常量滴定管的精密度低于微量滴定管等。3 试剂误差由于试剂纯度不够产生的误差，例如蒸馏水的纯度不够，试剂的纯度不够等。4 操作误差指在正常的操作情况下，由于操作人员的主观因素造成的误差，例如观察颜色的敏锐程度不够以及操作不严格等。上述四种误差都是由于固定的、经常的原因造成的，它是可测的，因此又称为系统误差。5 随机误差由于不确定因素造成的，具有随机性变化的误差，称随机误差。随机误差是不能人为控制的，它在某一测定中可能出现，也可能不出现，它的出现是偶然的，所以又称为偶然误差。例如仪器临时出现故障、样品称量不准确等。 方法误差 重复试验 系统误差 仪器误差 空白试验 误差 试剂误差 误差的减免方法 校正仪器 操作误差 回收试验 偶然误差二、误差的减免方法为了减少分析过程的误差，常采用以下方法：1 重复测定对同一样品同一成分的测定进行几个重复，这种方法可以减小随机误差。2 空白试验在不加样品的情况下，铵分析步骤和测定条件所进行的试验，叫空白试验，所测得的值叫空白值。将空白值从测定值中除去，就可消除仪器误差和试剂误差。如测定粗蛋白时用蔗糖代替试样做空白试验。3 校正仪器在仪器使用前先进行校正，这种方法可以减少仪器误差，4 回收试验即测定标准样品的回收率。若回收率符合一定要求，则说明系统误差合格，分析方法是可行的。测粗蛋白时用硫酸铵做回收率试验，回收率大于活等于98%即认为合格。三、误差的表示方法和允许量 绝对误差（一）误差的表示方法 准确度 相对误差误差的表示方法有两种： 误差的表示方法 绝对偏差1 准确度：是指测定结果与真实值的符合程度。用误差表示： 精确度相对偏差绝对误差 = 测量结果-真值 绝对误差相对误差 = 100% 真 值2精密度：在实际工作中，真值往往是不知道的，因而准确度无法求得。因此，对分析结果的评定，常用精密度表示同一测量中多次平行测定之间的符合程度，精密度高，表示各结果之间的重现性好，即各结果的离散程度小，一组分析结果精密度高，并不一定准确度高，因为系统误差的存在可能并不一定影响每次测定值之间的符合程度，即不影响精密度，但却影响准确度。但准确度高，必然精密度高。精密度用偏差表示。通常把测定值与平均值之差称为绝对偏差或偏差。绝对偏差（偏差）= 测定值 - 平均值 测定值-平均值相对偏差 = 100% 平 均 值例：某饲料含水量所得三次测定值为12.4%，12.2%，12.3%，求各测定值的相对偏差。 12.4%+12.2%+12.3%解：平均值= =12.3% 3 12.4%-12.3% 相对偏差= 100%=0.81% 12.3%那么，如何判断测定结果是否符合要求呢？这就涉及到误差的允许范围。（二）误差的允许量根据实际应用上的要求及可能达到的精密度，对饲料各项成分分析结果的分析误差允许范围规定见表1。饲料样品某成分重复测定的相对偏差或相对相差在以上允许范围内，则求出重复值的算术平均数作为饲料样品该成分的含量。11表1 饲料各项成分分析结果的分析误差允许范围成分含量允许测定的相对偏差10%1%吸附水510%3%5%5%10%0.50%粗灰分510%1%5%5%25%1%粗蛋白质1025%2%10%3%10%1%粗脂肪510%3%15%5%1%10%10%1%粗纤维510%5%5%10%5%3%钙15%5%1%10%0.5%5%磷0.10.5%10%0.1%1%10%20%食盐510%2%5%3%第四节 饲料样品的采集与制备要使分析结果做到准确、可靠，除了在分析过程中做到认真、精确外，还要对分析所用的样品进行正确的采集和制备，使所采集的样品具有足够的代表性。怎样才能使这少量的样品（250g），代表几吨、几十吨、甚至上百吨分析对象呢？这就是下面我们要学习的内容。样品是待检饲料原料或产品的一部分。从待测饲料原料或产品中按规定扦取一定数量、具有代表性样品的过程，称为采样。将样品经过干燥、磨碎和混合处理，以便进行理化分析的过程称为样品的制备。饲料样品的采集和制备是饲料分析中两个极为重要的步骤，必须加以重视。一、样品的采集（一）采样的目的样品的采集是饲料分析的第一步，采样的根本目的是通过对样品的理化指标的分析，客观反映受检饲料原料或产品的品质。样品的分析结果有不同的用途。对饲料工业而言，采样左右着许多方面的决策，并且这种影响面很广泛，具体主要表现在以下8个方面。1 为饲料配方选择原料；2选择原料供应商；3接收或拒绝某种饲料原料；4判断产品的质量是否符合规格要求和保证值，以决定产品出厂与否或仲裁买卖双方的争议；5判断饲料加工程度和生产工艺控制质量；6分析保管贮存条件对原料和产品质量的影响程度；7保留每一批饲料原料或产品的样品，以备急需时用；8分析测定方法的准确性和实验室或人员之间操作误差的比较：由权威实验室仔细分析化验的样品可作为标准样品。将标准样品均匀分成若干平行样品，分别送往不同实验室或人员进行分析，比较不同实验室或人员测定结果的差异，用于校正或确定某一测定方法或某种仪器的准确性，规范实验分析操作规程，提高分析人员的操作水平。由此可见，采样对饲料工业的影响是非常广的。正如Gehrt（1976）所述“采样比分析更为重要。（二）采样的要求1 样品必须具有代表性受检饲料容量和质量往往都很大，而分析时所用的样品仅为其中的很小一部分，所以样品采集的正确与否决定分析样品的代表性，直接影响分析结果的准确性。因此，在采样时，应根据分析要求，遵循正确的采样技术，并详细注明饲料样品的情况，使采集的样品具有足够的代表性，使采样引起的误差减至最低限度，使所得分析结果能为生产实际所参考和应用。否则，如果样品不具有代表性，即使一系列分析工作非常精密、准确，无论分析了多少个样品的数据，其意义都不大，有时甚至会得出错误结论。事实上，实验室提交的分析数据不可能优于所采集的样品。2 必须采用正确的采样方法正确的采样应该从不同代表性的区域取几个样点，然后把这些样品充分混合成为整个饲料的代表样品，然后再从中分出一小部分作为分析样品用。采样过程中，做到随机、客观，避免人为和主观因素的影响。3 样品必须有一定的数量不同的饲料原料和产品要求采集的样品数量不同，主要取决于以下几个因素。（1）饲料原料和产品的水分含量：水分含量高，则采集的样品应多，以便干燥后的样品数量能够满足各项分析测定要求；反之，水分含量少，则采集的样品可相应减少。（2）饲料原料和产品的颗粒大小和均匀度：原料颗粒大，均匀度差，则采集的样品应多。（3）平行样品的数量：同一样品平行样品的数量越多，则采集的样品数量就越多。4 采样人员应有高度责任心和熟练的采样技能采样人员应明白自己是饲料厂管理及产品质量的“眼睛“，应具有高度的责任心，在采样时，认真按操作规程进行，不弄虚作假和谋取私利，及时发现和报告一切异常情况。采样人员应通过专门培训，具备相应技能，经考核合格后方能上岗。5 重视和加强管理主管部门、权威检测机构和饲料企业必须高度重视采样和分析的重要性，加强管理。管理人员必须熟悉各种原料、加工工艺和产品；对采样方法、采样操作规程和所用工具提供相应规定；对采样人员提供培训和指导。（三）采样工具采样工具种类很多，但必须符合要求：（1）能够采集饲料中的任何粒度的颗粒，无选择性；（2）对饲料样品无污染，如不增加样品中微量金属元素的含量或引入外来生物或霉菌毒素。目前使用的采样工具主要有以下几种。1 探针采样器也叫探管或探枪，是最常用的干物料采样工具。其规格有多种，有带槽的单管或双管，具有锐利的尖端。2 锥形袋式取样器该种取样器是用不锈钢制作的，特点是具有一个尖头、锥形体和一个开启的进料口。3 液体采样器（1）空心探针：实际上是一个镀镍或不锈钢的金属管，直径为25mm，长度为750mm，管壁有长度为715mm，宽度为18mm的孔，孔边缘圆滑，管下端为圆锥形，与内壁成15角，管上端装有把柄。常用做桶和小型容器的采样。（2）炸弹式或区层式采样器：为密闭的圆柱体，可用做散装罐的液体采样，能从贮存罐的任何指定区域采样。当到达贮罐低部时，一个阀提起，或如果在中间的深度取样时，它可由一根连在该阀的柱塞上的绳子手动提起。4 自动采样器自动采样器可安装在饲料厂的输送管道、分级筛或打包机等处，能够定时、定量采集样品。自动采样器适合于大型饲料企业，其种类很多，根据物料类型和特性、输送设备等进行选择。5 其它采样器剪刀（或切草机）、刀、铲、短柄或长柄勺等也是常用的采样工具。（四）采样的步骤和基本方法1 采样的步骤（1）采样前记录：采样前，必须记录与原料或产品相关的资料，如生产厂家、生产日期、批号、种类、总量、包装堆积形式、运输情况、贮存条件和时间、有关单据和证明、包装是否完整、有无变形、破损、霉变等。（2）原始样品采集：也叫初级样品，是从生产现场如田间、牧地、仓库、青贮窖、实验场等的一批受检的饲料或原料中最初采取的样品。原始样品应尽量从大批（或大数量）饲料或大面积牧地上，按照不同的部位即深度和广度来分别采取一部分，然后混合而成。原始样品一般不得少于2Kg。（3）次级样品：也叫平均样品，是将原始样品混合均匀或简单的剪碎混匀，从中取出的样品。平均样品一般不少于1Kg。（4）分析样品：也叫实验样品。次级样品经过粉碎、混匀等制备处理后，从中取出的一部分即为分析样品。用作样品分析用。分析样品的数量根据分析指标和测定方法要求而定。2 采样的基本方法在一般情况下，用来分析的样品总是少量的，而分析的结果却是对大批的被检物品给以客观的评定。因此，采样的正确程度对分析结果有着直接影响。所以，必须遵循正确的采样原则，使采集的样品能代表全部分析对象。一般来说，采样的基本方法有以下两种。（1）几何法：指把整个一堆物品看成一种具有规则的几何体，如立方体、圆柱体、圆锥体等。取样时先将该立体分成若干体积相等的部分（或在想象中将其分开），这些部分必须在全体中分布得均匀，而不只是在表面或在一面。从这些部分中取出体积相等的样本，称之为支样，将这些支样混合即得样品。几何法常用于采集原始样品和大批量的原料。（2）四分法：将饲料置于一张方形纸或塑料布上（大小视样本的多少而定），提起纸的一角，使饲料流向对角，随即提起对角使饲料流回，如此反复使饲料混合均匀，然后将饲料平铺，用药铲、刀子或其他适当器具，从中画一“十”字或一角线相连接，将样本分成四等份，除去对角线的两份，将剩余的两份如前述混合均匀后，再分成四等份，重复上述过程，直至剩余样本数量与测定所需要的用量相接近时为止。大量饲料也可在洁净的地板上堆成锥形，然后，用铲将堆移至另一处，移动时将每一铲饲料倒于前一铲饲料之上，这样使饲料由堆顶向下流动到周围，如此反复移动三次以上即可混合均匀。最后，将饲料堆成圆锥形，将顶部略略压平使成圆台状，再从上部中间按前面“十字形法”进行取样。 适于原始样品的采集； 适于原始样品制成分析样品； 多点分层取样； 混匀；几何法 采样点不少于5个； 四分法 从中画一“”或“+”； 总量：干样2Kg， 除去对角线两份；鲜样5Kg。 重复上述过程使剩余风干样不少于2Kg。四分法常用于小批量样品和均匀样品的采样或从原始样品中获取次级样品和分析样品。也可采用分样器或四分装置代替上述手工操作。如常用的锥形分配器和具有分类系统的复合槽分配器。对粉末状、均匀度高的样品，可直接通过四分法采集分析样品，一般在500g左右。对颗粒大、均匀度不好的饲料如子实饲料，通过四分法可从原始样品中采集次级样品。次级样品至少在1Kg左右。对于不均匀的物品如各种粗饲料、块根、块茎饲料、动物屠体等，则需要将几何法和四分法结合起来反复使用，使用的次数随物品体积的大小和不均匀性质的情况而定。（五）不同饲料样品的采集不同饲料样品的采集因饲料原料或产品的性质、状态、颗粒大小或包装方式不同而异。1粉状和颗粒饲料（1）散装：散装的原料应在机械运输过程中的不同场所（如滑运道、传送带等处）取样。如果在机械运输过程中未能取样，则可用探针取样，但应避免因饲料原料不匀而造成的错误取样。取样时，用探针从距边缘0.5m的不同部位分别取样，然后混合即得原始样品。取样点的分布和数目取决于装载的数量，见下图。也可在卸车时用长柄勺、自动选样器或机器选样器等，间隔相等时间，截断落下的料流取样，然后混合得原始样品。（2）袋装：用抽样锥随意从不同袋中分别取样，然后混合得原始样品。每批采样的袋数取决于总袋数、颗粒大小和均匀度，有不同的方案，取袋数量至少为总袋数的10%，也可以按（总袋数/2）的平方根计算出。中小颗粒饲料如玉米、大麦等取样的袋数不少于总袋数的5%。粉状饲料取样的袋数不少于总袋数的3%。总袋数在100袋以下，取样不少于10袋，每增加100袋需增加1袋。取样时，用口袋探针从口袋的上下两个部位采样，或将袋平放，用采样器沿每只袋的对角线取样。采样器插入时应使槽朝下，然后转180度，再取出。大袋的颗粒饲料在采样时，可采取倒袋和拆袋相结合的方法取样，倒袋和拆袋的比例为1：4。倒袋时，先将取样袋放在洁净的样布或地面上，拆去袋口缝线，缓慢地放倒，双手紧握袋底两角，提起约50cm高，边拖边倒，至1.5m远全部倒出，用取样铲从相当于袋的中部或底部取样，每袋各点取样数量应一致，然后混匀。拆袋时，将袋口缝线拆开35针，用取样铲从上部取出所需样品，每袋取样数量一致。将倒袋和拆袋采集的样品混合即得原始样品。（3）仓装：一种方法是原始样品在饲料进入仓装车间或成品库的流水线或传送带上、贮塔下、料斗下、称上或工艺设备上取样，具体方法：用长柄勺、自动选样器或机器选样器等，间隔相等时间，截断落下的料流。间隔时间应根据产品移动的速度来确定，同时要考虑到每批选取的原始样品的总量。对于饲料级磷酸盐、动物性饲料粉和鱼粉应不少于2Kg，而其它饲料产品则不低于4Kg。另一种方法是针对贮藏在饲料库中的散状产品的原始样品。方法是按高度分层采样，即采样前将层表面划分为6个等份，在每一部分的四方形对角线的四角和交叉点5个不同地方采样。料层厚度在0.75m以下时，从2层中选取，即从距料层表面1015深处的上层和靠近地面的下层选取；当料层厚度在0.75m以上时，从3层中选取，即从距料层表面1015深处的上层、中层和靠近地面的下层选取，采集时从上而下进行。料堆边缘的点应距边缘50cm处，地层距底部20cm。圆仓可按高度分层，每层分内（中心）、中（半径的一半处）、外（距仓边30cm左右）3圈，圆仓直径在8m以下时，每层按内、中、外分别采1、2、4个点，共7个点；直径在8m以上时，每层按内、中、外分别采1、4、8个点，共13个点。将各点样品混匀即得原始样品。2液体或半固体饲料（1）液体饲料：桶或瓶装的植物油等液体饲料应从不同的包装单位（桶或瓶）中分别取样，然后混合。取样的桶数如下：7桶以下，取样桶数不少于5桶；10桶以下，取样桶数不少于7桶；1050桶，取样桶数不少于10桶；51100桶，取样桶数不少于15桶；101桶以上，按不少于总桶数的5%桶扦取。取样时，将桶内饲料搅拌均匀（或摇匀），然后将空心探针缓慢地自桶口插至桶底，然后堵压上口提出探针，将液体饲料注入样品瓶内混匀。对散装（大池或大桶）的液体饲料按散装液体高度分上、中、下三层分层布点取样。上层距液面约40cm处，中层设在液体中间，下层距池底40cm处，三层采样数量的比例为1：3：1（卧式液池、车槽为1：8：1）。采样时，用液体取样器在不同部位采样，并将各部位采集的样品进行混合，即得原始样品。原始样品的数量取决于总量，总量为500t以下，应不少于1.5Kg；5001000t，不少于2.0Kg；1001t以上，不少于4.0Kg。原始样品混匀后，再采集1Kg次级样品备用。（2）固体油脂：对在常温下呈固体的动物性油脂的采样，可参照固体饲料采样方法，但原始样品应通过加热融化混匀后，才能采集次级样品。（3）黏性液体：黏性浓稠饲料如糖蜜，可在卸料过程中采用抓取法，即定时用勺等器具随机采样。原始样品数量应为总量1t至少采集1L。原始样品充分混匀后，即可采集次级样品。3块饼类块饼类饲料的采样依块饼的大小而异。大块状饲料从不同的堆积部位选取不少于5大块，然后在每块中切取对角的小三角形，将全部小三角形块锤碎混合后得原始样品，然后按“四分法”取分析样品200g左右。小块的油粕，要选取具有代表性的饼片数至少一吨取10片（2550片），粉碎混合后得原始样品，然后按“四分法”取分析样品200g左右。4副食及酿造加工副产品此类饲料包括酒糟、醋糟、粉渣和豆渣等。取样方法是：在贮藏池、木桶或贮堆中分上、中、下3层取样。视池、桶、堆的大小每层取510个点，每点取100g放入瓷桶内混合后得原始样品，然后从中随机取分析样品约1500g，用200g测定其初水分，其余放入大瓷盘中，在6065恒温干燥箱中干燥供制风干样品用。对豆渣和粉渣等含水较多的样品，在采样过程中应注意避免汁液损失。5根茎及瓜果类这类饲料的特点是含水量大，由不均匀的大体积单位组成。采样时，通过采集多个单独样品来消除每个个体间的差异。样品个数的多少，根据样品的种类和成熟的均匀与否，以及所需测定的营养成分而定，见表2。表2 根茎及瓜果类的取样数量种类个数种类个数一般根茎类饲料1020胡萝卜20马铃薯50南瓜10采样时，从田间或贮藏窖内随机分点采取原始样品15Kg，按大、中、小三类分堆称重求出比例，按比例取5Kg次级样品。先用水洗干净，洗涤时注意不得损伤外皮。洗净后用清洁纱布拭去表面的水分。如果个体太大，应采取对角采样法，从块根的顶部至根部纵切具有代表性的对角四分之一、八分之一直至适量的分析样品，迅速切碎后混合均匀，取300g左右测定初水分，其余样品平铺于洁净的瓷盘内或用线串联置于阴凉通风处风干23天，然后在6065恒温干燥箱中干燥供制风干样品用。6新鲜青绿饲料及水生饲料新鲜青绿饲料包括天然牧草、蔬菜类、作物的茎叶和藤蔓等。一般取样是在天然牧地或田间，在大面积的牧地上应根据牧地类型划区分点采样。每区选取5个以上的采样点，每点一平方米范围。在此范围内离地面34cm处割取牧草，除去不可食草，将各点原始样品剪碎，混合均匀得原始样品。然后，按四分法取分析样品5001000g，取300500g用于测定初水分，一部分立即用于测定胡萝卜素等，其余在6065恒温干燥箱中干燥供制风干样品用。栽培的青绿饲料应视田块的大小，按上述方法等距离分点，每点采1至数株，切碎混合后取分析样品。该方法也适用于水生饲料，但注意采样后应凉干样品外表游离水分，然后切碎混合取分析样品。7青贮饲料青贮饲料的样品一般在井窖类或沟窖类内采样。取样前应除去覆盖的泥土、秸秆及发霉变质的青饲料。原始样品质量为5001000g，长形青贮壕的采样点视青贮壕长度大小分为若干段，每段设采样点分层取样。井窖类青贮料采样，应从距壁3050厘米处引一圆，然后由圆心及互相垂直的两直径与园相交的各点进行采取（见下图）。采取时应将表面50厘米的青贮饲料除去。利用刀切取边长20厘米的立方饲料块。图一 井型窖采样部位示意图 图二 沟窖采样部位示意图沟式窖采样的部位，应从青贮沟一端，除去最外层的草层，同样由表层50厘米处采样。采样的部位为距贮沟两臂及沟底与草面各3050厘米处作一方形，并将对边中点连续成田字形（见下图）采样时要求与井型窖相同，切忌摘取，打乱原青贮饲料的组成与结构。8粗饲料这类饲料包括秸秆及干草类。取样方法为在存放秸秆或干草的堆垛中选取5个以上不同部位的点采样（采用几何法），每点采200g左右，采样时应注意由于干草的叶子极易脱落，影响其营养成分的含量，故应尽量避免叶子脱落，采取完整或具有代表性的样品，保持原料中茎叶的比例。然后将采取的原始样品放在纸或塑料布上，剪成12cm长度，充分混合后取分析样品约300g，粉碎过筛。少量难粉碎的秸秆渣应尽量锤碎弄细，并混入全部分析样品中，充分混合均匀后装入样品瓶中，切记不能丢弃。二、样品的制备样品的制备指将原始样品或次级样品经过一定的处理成为分析样品的过程。样品制备方法包括烘干、粉碎和混匀，制备成的样品可分为半干样品和风干样品。（一）风干样品的制备风干饲料指自然含水量不高的饲料，一般含水量在15%以下，例如晒干的玉米、小麦等作物子实、糠麸、青干草、鱼粉、贝壳粉、配合饲料等。风干样品的制备包括3个过程。1原始样品的采集按照几何法和四分法采集。2次级样品的采集对不均匀的原始样品如干草、秸秆等，可经过一定处理如剪碎或锤碎等混匀，按四分法采取次级样品。对均匀的样品如玉米、粉料等，可直接按四分法采取次级样品。3分析样品的制备（1）制备设备：常用样品制备的粉碎设备有植物样本粉碎机、旋风磨、咖啡磨和滚筒式样品粉碎机。其中最常用的有植物样本粉碎机、旋风磨。植物样本粉碎机易清洗，不会过热及使水分发生明显变化，能使样品经研磨后完全通过适当筛孔的筛。旋风磨粉碎效率高，但在粉碎过程中水分有损失，需注意校正。注意磨的筛网的孔径大小不一定与检验用的大小相同。而粉碎粒度的大小直接影响分析结果的准确性。（2）制备过程：次级样品用饲料样品粉碎机粉碎，通过孔径为1.000.25mm孔筛即得分析样品。主要分析指标样品粉碎粒度要求见表3。注意：不易粉碎的粗饲料如秸秆渣等在粉碎机中会剩留极少量难以通过筛孔，这部分决不可抛弃，应尽力弄碎如用剪刀仔细剪碎后一并均匀混入样品中，避免引起分析误差。将剪碎完毕的样品200300g装入磨口广口瓶中，贴好标签放入避光、阴凉、干燥处备用。标签上应注明样品名称、采集地点、采集时间、采样人以及必要的若干说明，以便对照核查。表3 主要分析指标样品粉碎粒度的要求指标分析筛规格/目筛孔直径/mm水、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、钙、磷、盐400.45粗纤维、体外胃蛋白酶消化率181.00氨基酸、微量元素、维生素、脲酶活性、蛋白质溶解度600.25（二）半干样品的制备1 半干样品的制备过程半干样品是由新鲜的青饲料、青贮饲料等制备而成。这些新鲜样品含水量高，占样品质量的70%90%，不易粉碎和保存。除少数指标如胡萝卜素的测定可直接使用新鲜样品外，一般在测定饲料的初水分后制成半干样品，以便保存，供其余指标分析备用。的样品称为新鲜样品。例如：青草、多汁饲料、青贮饲料、鲜肉、鲜乳、粪便等。初水分是指新鲜样品在6065恒温干燥箱中烘812h，除去部分水分，然后回潮使其与周围环境条件的空气湿度保持平衡，在这种条件下所失去的水分称为初水分。去掉初水分之后的样品为半干样品。半干样品的制备包括烘干、回潮和称恒重3个过程。最后，半干样品经粉碎机磨细，通过1.000.25mm孔筛，即得分析样品。将分析样品装入磨口广口瓶中，贴好标签放入避光、阴凉、干燥处备用。标签上应注明样品名称、采集地点、采集时间、采样人以及必要的若干说明，以便对照核查。2初水分的测定步骤（1）原理把样品置于6065恒温干燥箱中烘至恒重，失去的质量即为初水分。（2）步骤 瓷盘称重：在普通天平上称取瓷盘的质量。 称样品重：用已知质量的瓷盘在普通天平上称取新鲜样品200300g。 灭酶：将装有新鲜样品的瓷盘放入120烘箱中烘1015min。目的是使新鲜饲料中存在的各种酶失活，以减少对饲料养分分解造成的损失。 烘干：将有鲜样的瓷盘迅速放入6070烘箱中，烘一定时间，直到样品干燥容易磨碎为止。烘干时间一般为82h，取决于样品含水量和样品数量。含水低、数量少的样品也可能只需56h即可烘干。 回潮和称重：取出瓷盘，放于室内自然条件下冷却24h，然后在普通天平上称重。 再烘干：继续将瓷盘放入6070烘箱中烘2h。 再回潮和称重：取出瓷盘，同样放于室内自然条件下冷却24h，然后在普通天平上称重。如果两次质量之差超过0.5g，则将瓷盘再放入烘箱，重复（6）和（7）步骤，直至两次质量之差不超过0.5g为止。以最低的质量即为半干样品的质量。将半干样品粉碎至一定细度即为分析样品。 计算公式与结果表示： w（初水分）= m新鲜样品 - m半干样品 / m新鲜样品第五节 样本的登记与保管一、样品的登记制备好的样本应置于干燥且洁净的磨口广口瓶中，作为分析样本。瓶外应标明样本名称及采样时间、采样人等，不同的饲料应当额外加以标明秸秆类饲料的收获期，调制与储存方法，青饲料的生长阶段及收获期，青贮料的原料种类及收获期，青贮方式，品质鉴定结果和混合比例，根茎类饲料的收获期，储藏时间与条件等均应加以记录说明。要求样本登记内容如下：1样本名称（一般名称、学名和俗名）和种类（必要时要注明品种、质量等级）。2生长期（成熟程度）、收获期和茬次。3调制和加工方法即贮存条件。4外观形状及混杂度。5采样地点和采集部位。6生产厂家和出厂日期。7重量。8采样人和分析人姓名。饲料样本都由专人采取、登记、粉碎和保管，如需测定氨基酸和矿物质等项目的原料（样本）应用高速粉碎机，粉碎细度为100目。其它样品可用圆环式或自制链片式粉碎机，粒度4060目，样本量一般在1千克以上。二、样品的保管1 保存条件样品应避光保存，并尽可能低温保存，并做好防虫措施。2保存时间样本保存时间的长短应有严格规定，这主要取决于原料更换的快慢及买卖双方谈判情况（如水分含量过高，蛋白质不足是否合乎规定）。此外，对某些饲料在饲喂后能出现问题，故该饲料样本应长期保存，备作考验。但一般情况下原料样本应保留两周，成品样本应保留一个月（与对客户的保险期相同）。有时为了特殊目的饲料样本有需保留12年的。这种样本的保存可用锡铝纸软包装，经抽真空充氮气后密封，在冷库中保存备用。专门从事饲料质量检验监督机构的样品保存期一般为36个月。饲料样品应由专人采集、登记、制备与保管。实验二 饲料中干物质（吸附水）的测定饲料中的水分包括游离水、吸附水和结合水。游离水是指游离在细胞内和细胞间的水；吸附水是指吸附在蛋白质、淀粉及细胞膜上的水；结合水是指结合在蛋白质等大分子物质中的水。一、适用范围本方法适用于测定配合饲料和单一饲料中水分的含量，但用做饲料的奶制品、动植物油脂和矿物质除外。二、实验仪器1实验室用样品粉碎机或研玻；2分析筛。孔径0.45mm（40目）；3分析天平。感量0.0001g；4称量瓶。玻璃或铝制，直径40mm以上，高度25mm以下；5电热式恒温烘箱。可控制温度为（1052）；6干燥器。用变色硅胶或氯化钙做干燥剂。三、测定原理样品在（1052）烘箱内，在一个大气压下烘干，直至恒重，丢失的质量为水分，剩余的质量为干物质。在该温度下干燥，不仅饲料中的吸附水被蒸发，同时一部分胶体水分也被蒸发，另外还有少量挥发油挥发。含水分多的新鲜饲料，须先测定初水后制成风干样品，再在（1052）烘箱中，烘至恒重，丢失的质量为吸附水的含量。同样，烘后样品的质量为饲料干物质的含量。四、操作步骤1、将洗净的称量瓶放在（1052）的烘箱内半开盖烘1小时，用坩埚钳取出称量瓶，并移入干燥器中冷却约30分钟，（将盖盖严）称重（准至0.0002克）。重复以上操作，直至两次质量之差小于0.0005g为恒重。2、在已知重量的称量瓶中称取2份平行试样，每份25g（含水量0.1g以上，样厚4mm以下），准至0.0002克，将盛有样品的称量瓶放入（1052）烘箱内，将瓶盖揭开少许。3、样品在烘箱内烘56小时后紧盖瓶盖，移入干燥器中，冷却30分钟，进行第一次称重。4、按照上述方法，继续将称量瓶放入烘箱内，烘1小时后，进行第二次称重，直到前后两次称重的差数在0.002克。五、结果计算 样品（1052）烘干前后重量之差（克）吸附水= 100% 样品质量（克）六、重复性每个试样取两个平行进行测定，以其算术平均值为结果。两个平行样测定值之差不得超过0.2%，否则重做。当水分含量在10以上时，允许相对偏差为1；当水分含量在510时，允许相对偏差为3；当水分含量在5以下时，允许相对偏差为5。七、注意事项1 如果是新鲜样品，则水分含量为初水分加吸附水。2 加热时试样中有挥发性物质可能与试样中水分一起损失，例如青贮饲料中的VFA。3 含脂肪高的样品，烘干时间长反而增重，应以增重前一次称量计算。4 含糖分高的、易分解或易焦化样品，应使用减压干燥法（70，80kPa以下，烘干5h，）测定水分。实验三 饲料中粗蛋白质的测定饲料中的含氮物质包括纯蛋白质和氨化物(氨化物有氨基酸、酰胺、硝酸盐及铵盐)，两者总称为粗蛋白质。测定粗蛋白质的方法很多，有间接法和直接法。间接法是根据每种蛋白质的含氮量是恒定的，通过测定样品中含氮量推算蛋白质含量的方法。常用的有：K氏定氮法、杜马斯法、强碱直接蒸馏法、纳氏试剂比色法和靛粉蓝比色法。直接方法是根据蛋白质的物理和化学性质直接测定蛋白质含量的方法，其中有紫外吸收法、酚试剂法，双缩脲法、染料结合法（DBL法）、茚三酮法、折射率法、放射性同位素法、比浊法等。在这些方法中，K氏定氮法是19世纪建立的经典方法，由于设备比较简单易得，结果可靠，被广泛应用于一般试验室，并称之为标准方法。K氏定氮法是1883年丹麦化学家Kjeldahl（凯道尔）首先提出的，故称之为凯氏法，由于后来又经过Gunning（岗宁）和Arndel（阿罗得）进行补充，故又称之为凯道尔岗宁阿罗得法。经典的K氏定氮法操作费时，因此，人们在经典方法的基础上选择催化剂，加快分析速度，改进仪器装置，研制出蛋白质测定仪，如瑞典Tecator 1035型自动定氮分析仪，国产KDN-01蛋白质测定仪等。一、 适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料等粗蛋白质的测定。二、 测定原理各种饲料中的有机物质在加速剂（硫酸铜、硫酸钾或硫酸钠）的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和氨态氮都转化为氨气，氨气被浓硫酸吸收变为硫酸铵；而非含氮物质，则以二氧化碳、水、二氧化硫的气体状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的氨气，通过蒸馏，氨气随水蒸汽顺着冷凝管流入硼酸吸收液中，并与之结合成硼酸铵，然后以甲基红-溴甲酚绿作混合指示剂，用盐酸标准液滴定，求出氮的含量。再乘以一定的换算系数（一般为6.25），即可得出样本中粗蛋白质含量，上述过程中的化学反应如下：2CH3CHNH2COOH+13H2SO4(NH4)2SO4+12SO2+16H2O+6CO2（NH4）2SO4+2NaOH2NH3+2H2O+Na2SO4H3BO3+NH3NH4H2BO3NH4H2BO3+HClNH4Cl+H3BO3三、仪器设备1实验室用样品粉碎机或研玻；2分析筛。孔径0.45mm（40目）；3分析天平。感量0.0001g；4消煮炉或电炉；5半微量滴定管；6