放线菌的培养与形态观察实验报告(山东大学).doc

山东大学实验报告 2012年 12 月 23日姓名 不解释 系年级 生命科学院生科班 学号2010001XXXXX 科目 微生物学实验 题目 放线菌的培养及形态观察 组别 星期八 第n组 放线菌的培养与形态观察一实验目的1掌握配制合成高氏一号培养基的一般方法。2掌握放线菌形态的基本观察方法。3了解并掌握放线菌的形态。二实验原理 1高氏I号培养基 高氏 I 号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如Fe元素。 2放线菌 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝 ( 简称“基丝” ) ，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝 ( 简称“气丝” ) ，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。 3插片法观察放线菌 将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。三实验器材 1菌种： 青色链霉菌 ( S glaucus ) ，弗氏链霉菌 ( S. fradiae ) 。 2培养基：高氏 I号培养基（配方见后附） 3仪器或其他用具：平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲，镊子，显微镜,双层瓶，马铃薯，酒精灯。四实验步骤1配置高氏I号培养基200ml。2倒平板 取融化并冷至大约 50 的高氏 I 号琼脂约 20ml 倒平板，凝固待用3接种 用接种环无菌操作分别由青色链霉菌（或弗氏链霉菌）菌种斜面培养物挑取适量菌在琼脂平板上划线。4插片 以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约45插入琼脂内，每个琼脂片插两到到三片。 5培养 将扦片平板倒置，于28培养3-5天。 6镜检 用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检（用油镜观察）。孢子丝基内菌丝（透明）五实验结果记录青色链霉菌孢子丝放大图青色链霉菌10100（油镜）气生菌丝（暗） 基内菌丝（透明）气生菌丝（暗）孢子丝（颗粒状）弗氏链霉菌10100（油镜）弗氏链霉菌局部放大图表一 实验结果记录表项目基内菌丝形态气生菌丝形态孢子丝形态青色链霉菌较长，疏松，多分枝毛状紧密螺旋形弗氏链霉菌略短，较密，多分枝厚絮状直条状六注意事项1.倒平板要厚一些，接种时划线要密。2.插片时要有一定角度并与划线垂直。3.观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，更换高倍镜观察。 4.如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。 七思考题1镜检时如何区分放线菌基内菌丝、气生菌丝及孢子丝？ 答：在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝形态各异，末端有孢子脱落。附：高氏I号培养基配方项目量可溶性淀粉20gKNO31gNaCl0.5gK2HPO40.5gMgSO40.5gFeSO40.01g琼脂20g水1000mlPH7.2-7.4配制时，先用