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基因工程简介 一基因工程的基本内容 主要内容 1 基因工程的概念2 基因操作的工具3 基因操作的基本步骤 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 拼接 导入 表达 实质 基因重组 一 基因工程的概念 基因工程步骤中需要哪些工具 二 基因操作的工具 步骤一的工具 步骤二的工具 步骤三的工具 基因的剪刀 限制性内切酶 基因的针线 DNA连接酶 基因的运载工具 运载体 基因的剪刀 限制性内切酶 二 基因操作的工具 限制酶 DNA的一段序列 EcoRI识别序列 ECORI切割位点 作为运载体必须具备哪些条件 二 基因操作的工具 1 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 2 具多个限制酶切点 以便与外源基因连接 3 具有某些标记基因 便于进行筛选 如抗菌素的抗性基因 产物具有颜色反应的基因等 基因的运载工具 运载体 大肠杆菌的质粒 二 基因操作的工具 基因的运载工具 运载体 基因的针线 DNA连接酶 二 基因操作的工具 DNA连接酶连接形成 磷酸二酯键 用相同的限制性内切酶切割 目的基因 四个基本步骤 1 提取目的基因2 目的基因与运载体结合3 将目的基因导入受体细胞4 目的基因的检测和表达 三 基因操作的基本步骤 目的基因的提取方法 三 基因操作的基本步骤 直接分离基因人工合成基因 反转录法根据已知的氨基酸序列合成DNA 鸟枪法 直接分离基因 鸟枪法 将供体细胞中的DNA用限制酶切割为许多片段 再用运载体将这些片段都运载到不同的受体细胞中去 让这些DNA片段在受体细胞中扩增 从中找出含有目的基因细胞 并将含有目的基因的DNA片段分离出来 该法最大的缺点是带有很大的盲目性 工作量大 一般不适用于真核细胞的基因 人工合成基因法 DNA合成仪 直接合成法 根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序 再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序 用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因 反转录法 以信使RNA为模板 在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA 基因 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口 将目的基因插入切口处 让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后 在连拉酶的作用下连接形成重组DNA分子 目的基因与运载体结合 三 基因操作的基本步骤 常用的受体细胞 步骤三 目的基因导入受体细胞 有大肠杆菌 枯草杆菌 土壤农杆菌 酵母菌和动植物细胞等 主要借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径 导入方式 1 将细菌用CaCl2处理 以增大细菌细胞壁的通透性 2 使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞 3 目的基因在受体细胞内 随其繁殖而复制 由于细菌繁殖的速度非常快 在很短的时间内就能获得大量的目的基因 步骤三 目的基
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