碱茅论文：碱茅 胚性愈伤组织 根癌农杆菌 遗传转化 组织褐化.doc

碱茅论文：碱茅再生体系建立及其遗传转化的研究【中文摘要】碱茅(Puccinellia chinampoensis)是一种抗旱、耐盐碱(NaHCO3,Na2CO3)性极强的盐碱地特种植物,它与水稻、小麦一样都属禾本科,但在长期的进化及对盐碱适应过程中,形成了与其它禾本科植物相比极为特殊的抗逆机制,而且具有极强的抗盐碱能力。通过植物组织培养技术建立碱茅再生体系,进一步筛选出高效转基因体系,为以后碱茅的遗传转化研究实验做了准备。本研究以碱茅为试验材料,全面而系统地探讨了影响碱茅种子愈伤诱导的一些主要因素,并通过农杆菌EHA105介导下对GUS基因遗传转化。试验的研究结果为：在碱茅种子愈伤组织的诱导过程中,不同灭菌剂及灭菌时间对种子灭菌效果和诱导情况差异明显,使用70%酒精3min+10%次氯酸钠30min的灭菌处理效果较好。在MS培养基上添加不同浓度的2,4-D对碱茅种子诱导产生愈伤组织的效率不同,最适2,4-D浓度为4 mg/L。选择以改造培养基I(N6大量元素、MS微量元素、两倍MS铁盐、五倍MS有机物,其中肌醇的用量不变)作为碱茅种子愈伤组织诱导的基本培养基。不同光照培养条件对碱茅种子诱导产生愈伤组织的效率不同,在短光照(12/12h)、培养温度为.【英文摘要】Puccinellia chinampoensis is a special gramineous plant like rice and wheat, which can survive well in the saline and alkali environment with severe drought and salt stress. The difference from rice or wheat is Puccinellia chinampoensis has evolved a series of resistance mechanism via years of adaptation in the saline and alkali soil. In this study, transformation system of Puccinellia chinampoensis has been constructed and optimized, following with optimized regeneration system, through plant tissue cultur.【关键词】碱茅 胚性愈伤组织 根癌农杆菌 遗传转化 组织褐化【英文关键词】Puccinellia chinampoensis embryo callus Agrobacter-ium tumefaciens genetic transformation tissue browning【目录】碱茅再生体系建立及其遗传转化的研究摘要4-5Abstract5-61 绪论9-181.1 碱茅的研究进展9-121.1.1 碱茅的生物学特性101.1.2 碱茅结构解剖研究进展101.1.3 碱茅生理生态研究进展10-111.1.4 碱茅分子生物学研究进展11-121.2 植物组织培养研究进展12-141.2.1 外植体选择的研究进展131.2.2 各种激素在植物组织培养中的应用13-141.3 植物遗传转化受体系统的研究概况14-161.3.1 外植体直接分化的遗传转化151.3.2 以植物单细胞为受体的遗传转化151.3.3 以植物愈伤组织为受体的遗传转化15-161.3.4 植物原生质体的遗传转化161.4 植物遗传转化方法的研究进展16-171.4.1 农杆菌介导法161.4.2 基因枪法161.4.3 电激法16-171.4.4 PEG转化法171.4.5 花粉管通道法171.5 本研究的目的及意义17-182 碱茅再生体系的建立18-352.1 材料与方法18-222.1.1 材料18-202.1.2 方法20-222.2 结果与分析22-342.2.1 不同灭菌剂对种子灭菌的效果22-232.2.2 两种光照条件下对种子诱导愈伤组织的影响23-242.2.3 诱导种子的愈伤组织试验的结果与分析24-262.2.4 愈伤组织在继代增殖中的调控26-272.2.5 愈伤组织芽分化的结果与分析27-342.3 本章小结34-353 碱茅的遗传转化35-433.1 材料与方法35-393.1.1 材料353.1.2 方法35-393.2 结果与分析39-413.2.1 碱茅种胚愈伤组织筛选过程中Kana筛选浓度的确定