宁夏枸杞新品种“宁杞1号”干果中总糖及多糖类物质的系统分析.pdf

0 药物生物技术 P h a r ma e e u t i c a l B i o t e c h n o l o g y l 9 9 4 l 2 4 0 4 3 宁夏枸杞新品种 宁杞 1 号 干果中总糖 及 多 糖 类 物 质 的 系 统 分 析 舅 高向东 姚文兵 李 隽 吴梧桐 姚文海 张小渡 李润淮 摘要率 文 对宁 夏 农林 科学 院枸 杞 研 究所 栽培 的 宁夏 枸 杞 新 品种 宁 杞 J号 枸杞 干 果 中 各 种糖 类 物质 包括 还 原精 中性 多糖 酸提 多 糖 和碱 提 多糖 及 糖醛 酸 的 含 量进 行 丁系统 的 分析 研 究 许与 原 品种 大 啼 叶 柯 杞 于果 的糖 类 成份 岔量进 行 了比较 实 验结 果 表 明 宁杞 J号 及 太 麻 叶 枸杞 f果所 含 糖类 物 鲠总 量 分 别 为 5 9 6 5 l 5 5 2 2 还 原 糖 吉 量 为 J 0 2 6 和 j 2 0 J 中性 多 糖含 量 为 2 0 8 和 l 8 0 7 酸 挺取 多 船 含 量 分 剐 为 0 5 6 和 0 3 8 碱 据 取 多糖 含 量 分 别 为 0 和 0 2 糖醛 酸 含精 分 别 为 2 3 6 d l 2 2 9 I 宁 杞 l 号 枸杞 于果 的多糖 古 量 比原 大 m L 的果 实 具 有 滋补肝 肾 益精 明 目 清热 凉血 降压之 功 枸杞 中含有 十分 丰富的 糖类 物 质 其 中 多糖 是 枸杞 子 中 的重要 活 性 成份 具 有 提高 免疫 功 能 抗 肿 瘤 升 白细 胞 等药理 净 性 枸杞 子 品种 较 多 其糖类 物 质的 含量 也有所 差异 宁杞 1 号 为 宁夏农 林 科学院 枸杞 研究所 采用 单 株优选 方法 从最 好的地方 品种 大麻叶 中选育 出的优质 高产 枸杞 品种 其 主要 特 点 是 果 大 色红 肉 厚 等 本文 对 宁杞 号 枸 杞干果 中总糖 及多 糖 类 物质 的含量 进行 了 系统 的分 析 研 究 并 与 原 大麻 叶 品种进 行 了 比较 国 内外文献 未 见这方 面报道 实验材 料与 方法 I 仪 器 与 试 剂 7 2 分光光度计 上海 第三 分析仪器 厂 蒽酮AR 上海 化学试 剂 一厂 葡 萄糖 A R 上 海 化 学 试 剂 采 购 站 葡 萄 糖 醛 酸 收精 日期1 9 9 4 0 5 2 1 还 娘 糖 糖 醛 酸 f 遗 AR 上 海化 学试 剂 一 厂 咔唑AR 上 海 化 学 试 剂三 厂 其 他均 为市售 分析 纯或 生化 试 剂 宁 杞 l 号 及 大 麻 叶 枸杞干果 为宁夏 农林科学 院枸 杞研究所 芦花台 园林试验 厂产 品 经 中国药 科大学 生药学教 研室李 萍 刘慧 婿 两位 老师 的 鉴 定 属于 宁 夏 枸杞 L v c i c u m b a r b a r u m J 这 一种 I 2实 验 方 法 1 2 1 宁 杞 1号 及 大 麻 叶 拘 杞 干 果 中 糖类特质 的 系统 分 离 2 I 还 原糖 类物 质 的提 取取 枸 杞干 果 以 3 5倍 蒸 馏水 冲 洗去 表面 杂质 然 后 粉 碎 置 索氏提取 器 中 加 入丙酮一 乙醚 1 1 混 合液 回流提 取 2 h左右 直 到 提取 液近 无色 取 出残渣 欧干 用 8 O 的 乙醇 提取 2 3 h 水浴温度 5 0 C 间隙搅 拌 提 取 完毕 过 滤得提 取 液 残 渣再 用 同样 浓度 的 醇提 取 2次 合并提取 液 此 为 含有 还 原糖类 物 质 的 提 取 液 2 2多糖 类特质 的提 取 分 离 中性 多 维普资讯 高 向东等 宁夏 枸 杞 新 品 种 宁杞 i号 干 栗 中总捂 及 多糖 类物 质 曲 系统 分 析 糖的 提 取 分 离 将 用 8 0 乙 醇提 取 过 的残 渣 加 入 5倍 蒸馏 水 于 8 5 9 0C水 浴 间隙 搅 拌 提 取 4 h 离 心 3 0 0 0 r mi n J 5 ra i n 分 离 上清 液 残 渣再分 别用 3倍 蒸馏 水 和 2倍 蒸馏 水 提取 二 次 合并提 取 液 即 为 中性 多 糖 提 取 液 酸提多糖及碱提多糖的提取 分离 将提 取过 中性 多糖 的残 渣 再 分 别 用 1 矗 H A C 3 倍体积 提取 二 次 水浴 温度 8 0c 间歇 搅 拌 2 h 合并提 取液再 用 0 1 N Na OH中和 此为 酸提 取 多糖 然 后用 3倍 体 积 0 1 N Na OH 提取 二 次 每次 2 h 水浴 温度 8 0 C 提 取 液 用 0 1 N HC I 中和 即 为碱提 取 多糖 1 2 2糖 类物 质 的 测 定 1 2 2 1 总糖含量 测定参 照 Y e mm E W 等的方法 啪 并 略加 改进 以硫 酸蒽 酮法 测定 各提 取 液中总糖 含量 标准 曲线 的制 备 精 密 称 取 l 0 5 C干燥 至恒重的葡萄糖 i 0 m g 置 1 0 0 m l 容量瓶中 由蒸馏 水定容至刻 度 取 6支 带塞试 管 分别 加 入上述 葡 萄 糖 溶 液 0 0 2 0 0 6 0 8 l 0 m1 置 泳浴 中冷 却 然后分 别加 入 4 ml 蒽 酮试剂 于沸水裕 中煮沸 1 O rai n 取 出后冰水 冷却 室温 放置 1 0 rai n后 以 0号 管 为空 白 于 6 2 0 n m 比色 测定 OD值 以葡 萄糖 的浓度 p g m J 为横坐 标 光 密度 值 为纵坐 标 制备标 准 曲线 样 品溶 液 的 处理 及测 定 还 原糖提 取 液 先 减压 浓缩 除 去 乙醇 再精 密 量 取残 留液 m1 用 蒸 馏 水 定 容 至 l 0 0 1 1 1 作 为测 定液 备 用 精 密量取 中性 酸提取 及碱提 取 多糖提取 液 各 l 0 m 加 入脱色树脂 脱色 过滤 滤液 以 S e v a g e法 氯 仿 正 丁 醇 一 4 1混 合液 用 量为滤液体积的 l 4 除蛋白二次 上清液置 透 析袋 中以流 动的 蒸馏 水 透析 2 4 h 然 后将 溶液置容量瓶中分别定容至 0 0 m l 中性多 糖 2 5 mI 酸提取 多糖 和碱提 取 多糖 备 用 分 别 量取 各测定 液 i ml 按 标 准 曲线制 备 方 法进 行 测 定 根据 OD 吸 收值 从 标 准 曲 线 上 查 出对应 的糖 含 量 按 下 式计算 样 品 中 的糖 含量 样品 中糖 含量 一 AXc t w i o o 其 中 A为样 品溶 液稀 释后 的体 积 c为标准 曲线上查 出的糖 含量 w 为样 品溶 液的原 体积 l 2 2 2 各 提 取 液 中糖 醛 酸 含 量 测 定 参照 B i t t e r T 等的 硫酸咔唑法 测定 各提取液 中糖醛酸 的 含量 标 准 曲线 的制 备 精 密称 取 标准 葡萄 糖 醛酸 1 0 mg 用饱 和硼 酸定容 至 1 0 0 m l 分别 量取 该溶 液 0 0 2 i 0 4 0 6 0 8 0 ml 置 带 塞试 管 中 加 入 O 0 2 5 r n o l L四硼 酸 铺 硫 酸液 5 ml 沸水浴 中加热 j 5 rai n 取出后 冰浴 冷 却 然 后 加 0 1 2 5 I o 咔 唑 乙醇 液 0 3 m1 显 色 测 定 OD 吸收 值 以 标 准 葡 萄 糖 醛 酸 的 量 为 横 坐 标 OD值 为纵 坐 标 制 备 标 准 曲 线 样品溶 液 的 处理 及测 定 样 品溶液 的处 理 同硫酸 蒽 酮法 测定 前 需 用 固体 硼酸 直 接进 行饱 和 再 取 l ml 测 定液按 标准 曲线 的 制备方 法进行 测定 2 实验结果 2 宁杞 号 及 大麻 叶 拘 杞 中 各提 取 液的 总糖 含量 测定结 果 见表 1 1 a b 1 r C o n t e n L o f Re d u c i n g Su g a r a n d Po l y s a h a r id e i n Ni n g gi l a n d Da M a Yi e L y c i u m B a r b a r u m L 维普资讯 药物生物技术 卷 结 果 表 明 宁杞 1 号 中多糖 含量 比 大 麻 叶 增 加 2 6 9 而 还 原 糖 含量 减 少 l 4 6 2 2 宁杞 1号 及 大 麻 叶 枸 杞 于果 中糖 醛 酸 含量测 定结果 见表 2 Ta b 2 Th e C o nt e n t o f Ur on ic Ac i d in Ni n B gi l a n d Da Ma f ie ciu m 3 ar b a r u m L 3 讨 论 3 1 枸杞 中总 的糖类物 质应 当 由还原糖 多 糖和糖 醛酸 类三部分组 成 按 照我 们测定方 法的结果 宁 杞 I号 和 大 麻 叶 枸杞子 干 果 中 所 含 糖 类 物 质 总 量 分 别 为 5 9 6 5 和 5 5 2 2 宁 杞 l号 中 多搪 含 量 比 大 麻 叶 枸 杞 高2 6 9 而 还 原 糖 含 量 则 低 I i 6 由于 多糖类 是枸杞 子 中重要 的 生物 活性 成 份 因此 可认 为 宁杞 1 号 枸杞 品种 比 大 麻 叶 枸 杞 品种 具 有更 高的 药 用价值 这将 在 其 他实验中证 实 3 2 宁杞 1号 和 大 麻 叶 枸 杞 干果 中糖 醛酸 的含量 分别为 2 3 6 4 和 2 2 9 1 并均 含有 少量 酸 提取 多糖 由此进 一 步证 实 枸杞 子 中含有酸提 取杂 多糖 文献 报道 吉林枸 杞子 中所 含的 糖醛 酸 类 为半乳 搪醛 酸 而是 否同时 含有 葡 萄 糖 醛 酸 未 见报 道 宁 杞 1 号 和 大麻 叶 枸杞 中所 含 的糖 醛 酸类是 葡 萄糖 醛 酸 半 乳 糖醛 酸 还是 二 者均 有 还 有 待于进 一步 研究 3 3采用 硫 酸蒽 酮 法和 硫酸咔唑 法测 定 多糖 的 含量 必 须去 除 色素 蛋 白质类 和还 原 糖类 物 质的干扰 本文 采用脱色 树脂 代 替 活性 炭 对溶 液脱 色 脱 色树 脂 具 有 吸附 色 索 能力 较 强 而对 多糖类 物质 无 吸 附 作用 的特 点 使 测定结果 更为准 确 S e v a g e法 是经 典 的 除 蛋 白质 方法 根 据 我 们 的 测 定 结 果 宁 杞 1号 枸杞子 干果 中蛋 白质类物 质的含 量 为 0 4 5 5 左 右 因此 采 用 二次 S e v a g e法 即 可基本 除去蛋 白质 透析 的 目的在于 一方 面 除 去与 溶 液互 溶的 一部 分 氯仿 和 正 丁醇 另一 方面 除 云残 留的 还原 糖 类 以使 测 定结 果 更 为准确 参 考 文 献 浆雪 如 戴 寿 芝 王箍 娣枸 杞对 鲍疫功 能 影 响 的 探 讨 巾华微生物学 与免经学杂志 1 9 8 4 6 3 9 5 2周 金 黄 邢 善 叫 瞅 长 i l 补 益 中药 有效 成 份 的 免 痤 药 理 研 竞技 应 I j中药药 理 与嗬 床 1 9 8 9 5 2 5 8 3 Ye mm E W a n d W i l l i s A Th e t i ma t ion o f c ar l oh y d r a t i n p l a nt e x t 吣b y a n山 r B i o c he m J I 9 5 4 57 50 8 d Bi e r T De t 训i n at f o n o f k lr o ni Ac i d Ah a l Bio c h e m 1 9 6 2 d 33 0 豫世 沈 宁 秋 江 李广 盍 等吉 林枸 杞 翩药 废 造 总 多 糖 的提取 境 化与 组分 鉴定青林 医葑 工 业 1 9 9 0 4 1 维普资讯 高 向东等 宁夏 枸 杞新 品 种 宁 杞 l号 干 果 中总 糖及 多 糖类 物质 的 系统 分 析 A n a l y s i s o f To t a l Sa c c h a r i d e a nd Po l y s a c c ha r i d e i n Th e Ne w Sp e c i e s of Ni n xi a Ly c i um Ba r b a r um L Ni n g g i 一 1 Gao Xi a ng d on g Ya o W e n b i n g Li J un W u W ut o n g Ya o W e n h a i Cha ng Xi a o b o Li Run h u a i D e l t m e u t o f B i o c h e m r y C h b a P f w r w e u t k z d U u i 2 r r s i l y N a n j b t g 21 0 0 0 9 The t o t al s a c c ha r J de a n d p o l y s a c c ha r i d e i n t h e n e w s p e c i e s o f Ni nx i a Ly c i u m b a r b ar u m L Ni ng g l l a n d i t s o r i g i na l s pe c l c s Da M a Y i e we r e an a l y z i e d a nd c o m p a r e d i n t hi s p a p e r The r e s ul t s h o we d t h a t t h e c o n e nt s of t o tal s a c c h ar i d e r e d uc i ng s u g a r n e u t r al p o l y s a c c ha r i d e p ol y s a c c h ar i d e e xt r a c t e d b y 1 HAC a n d b y 0 1 N Na OH u r o n i c a c i d i n Ni n g gi 1 a n d Da Ma Yi e we r e 5 9 6 5 a n d 55 2 2 1 0 26 an d 1 2 01 24 0 8 a n d 1 8 97 0 56 a n d 0 38 0 4 4 a nd 0 42 2 3 6 4 和 2 2 91 r e s pec t i v e l y Th e c o t e n t s o f p o l y s a c c h a r i d e a n d u r o n l c a c i d i n Ni n g g i 一 1 we r e 2 6 9 a n d 3 2 h i g h e rt h a n t h o s ei n Da Ma Yi e b u t r e d u c i n g s u g a r wa s 1 3 6 l o we rt h a nt h a t