将ELISA的线性范围提高2-3个数量级,灵敏度提高10-100倍.docx

Meso Scale Discovery ( MSD ) 将ELISA线性范围提高2-3个数量级，灵敏度提高10-100倍Percepta在针对550位北美和欧洲的顶级生物医药研究人员的报告中显示，基于电化学发光技术的MSD ( Meso Scale Discovery ) 是最受欢迎的5大免疫分析品牌之一。MSD电化学发光技术 与传统酶联免疫分析ELISA优势对比如下: 1. 更高灵敏度与更宽的线性范围：传统酶联免疫分析ELISA主要基于酶标仪，酶标仪的灵敏度往往在10-1pg/ml。 MSD电化学发光技术主要基于超敏多因子电化学发光分析仪MESO Sector 600或Quickplex SQ 120。MSD灵敏度可达0.05pg/ml，有效线性范围达6 log。 传统ELISA常规线性范围在10pg/ml-1000pg/ml，采用Ultra-sensitivity试剂盒则为0.5-10pg/ml。 对于一个生物学实验，往往要兼顾正常对照组与疾病组的样本，样本中的待测蛋白浓度分布一般从零点几个pg到几千pg不等，所以一个ELISA试剂盒的线性范围不能同时兼顾高低丰度蛋白的检测，需要非常多的预实验进行稀释度摸索，费时费力。 而MSD提供了从亚皮克级到几万皮克浓度的宽线性范围，有效将所有样本落在最佳线性范围内，得到准确测定（见下图比对，红色条状为疾病样本，黄色条状为正常参照组）。 同时MSD的灵敏度可达0.05pg/ml，对于目前有些疾病样本中待测蛋白浓度下调的研究项目来说，更能够有效的发现疾病组与正常对照组的差异，实现新的科学发现。1. 节省样本用量，可实现多重检测。 传统ELISA所需样本量一般为50-100ul，如果同时关注10个细胞因子的表达调控则可能需要多达500-1000ul的样本，对于很多ELISA实验来说样本量就成了关键问题。 MSD通过点阵技术，在96孔石墨电极板里可实现10个指标每孔的检测。也可在24孔板里定制实现100指标/孔的筛选检测。满足了不同的实验需求。在样本用量上，无论单指标或多指标都只需25ul的样本，即可完成检测。为珍稀样本的研究提供了更多的数据。 目前MSD可以在100ul的极其珍贵的脑脊液样本中，复孔定量测定40种Biomarker，这是以往技术都所不能实现的。 1. 均一性、重复性高： MSD 板内CV6-8%,板间10%,批间15%。同时MSD试剂盒有效期长达30个月，为长时间研究项目，提供了使用同一批号试剂的可能性。2. 样本兼容度高，基质效应小： MSD平台由于其独特的电化学发光原理，可将许多非特异信号予以排除，所以受样本性质的影响就更小（如粘稠样本，悬浊颗粒样本等），因此对于各类生物学样本的兼容度更高。 目前MSD平台上测定样本总类主要包括：血清，血浆，培养上清，细胞/组织裂解液，脑脊液，尿液，关节滑液，唾液，痰液，粪便提取液，眼睛房水，各类灌洗液等基本所有的生物学样本。对于最简单的血浆样本来说，MSD也可兼容不同抗凝剂的血浆样本。大大降低了实验所需样本收集上的难度。 此外基质效应会影响到实验准确性与灵敏度，MSD是目前唯一一个被国外科学家广泛认可的基本无基质效应的免疫分析平台。请参见: Immunol Res;DOI 10.1007/s12026-014-8491-6; T.Maecker 3. 实验流程简便、快速、多元化 MSD提供了比ELISA更为便捷快速的实验流程，将加样等手动操作时间缩短至45分钟以内，并为培养上清等高丰度样本快速检测，提供了只需2.5小时的一步法流程，解放了劳动力，提高了科研效率。同时在MSD平台上由于特有的电化学发光技术，可有效控制背景信号，可以实现免洗的实验流程。请见下图MSD流程以及实验时间比较： 一步法流程： 超敏实验流程 ： 实验流程时间比对： 4. 信号稳定且不受显色顺序影响 ELISA在显色时，需要避光来保证信号稳定。同时，由于底物与终止液加入有先后时间差异，会不可避免的产生因显色时间不一致导致的数据差异。 MSD由于基于电化学发光技术，信号分子SULFO-TAG需在电激发的情况下才能产生信号，因此整个实验流程无需避光，不受实验操作人员技术水平差异的影响。此外，在实验完成加入所有液体后，并不会被激发出任何信号。只有送入仪器，通过电极电激发后方才产生信号，每孔激发与信号采集时长统一，避免了像ELISA底物与终止液加入顺序先后所导致的数据差异，数据稳定度极高。 请见下图电化学发光平台示意图： SULFO-TAG分子式反应示意图 电化学发光反应5. 开放性平台，高载量的石墨电极，多样化实验方案，更节省的包被用量。 MSD平台所用的石墨电极板，为高分子聚合材料，表面与内部具有3D结构，能够提高有效载量至传统的ELISA板的10-100倍。因此在板底可以固定蛋白、小肽、多糖、核酸、病毒颗粒、细胞膜、活细胞等，实现不同的实验检测方案。 板底3D结构示意图 多元化实验方案同时，由于载量不同以及表面亲疏水修饰的不同，MSD板在包被方案上可以使用传统方法的Solution Coat，也可以采用Dot Coat的方法，将2-5ul蛋白点在板底中央进行包被。蛋白用量只需要Solution Coat的1/10-1/5，且包被时间仅仅需要一个小时，省时省力。8技术成熟可靠。欧美研究人员在10年前已经开始使用“Meso Scale Discovery” 替代/升级ELISA了。9. 部分检测指标如下：多因子检测组合检测指标Human Biomarker 40-Plex Kit (1 Plate) V-PLEXbFGF, CRP, Eotaxin, Eotaxin-3, Flt-1, GM-CSF, ICAM-1, IFN-, IL-1, IL-1, IL-10, IL-12 p70, IL-12/IL-23p40, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1, MIP-1, PlGF, SAA, TARC, Tie-2, TNF-, TNF-, VCAM-1, VEGF, VEGF-C, VEGF-DNeuroinflammation Panel 1 (hu) Kit (1 Plate) V-PLEXbFGF, CRP, Eotaxin, Eotaxin-3, Flt-1, ICAM-1, IFN-, IL-1, IL-1, IL-10, IL-12/IL-23p40, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1, MIP-1, PlGF, SAA, TARC, Tie-2, TNF-, TNF-, VCAM-1, VEGF, VEGF-C, VEGF-DHuman Cytokine 30-Plex Kit (1 Plate) V-PLEXEotaxin, Eotaxin-3, GM-CSF, IFN-, IL-1, IL-1, IL-10, IL-12 p70, IL-12/IL-23p40, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1, MIP-1, TARC, TNF-, TNF-, VEGFNHP Cytokine 24-Plex Kit (1 Plate) V-PLEXEotaxin-3, GM-CSF, IFN-, IL-1, IL-10, IL-12/IL-23p40, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1, MIP-1, TARC, TNF-, VEGFProinflammatory Panel 1 (rat) Kit (1 Plate) V-PLEXIFN-, IL-1, IL-10, IL-13, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, KC/GRO, TNF-Chemokine Panel 1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEXEotaxin, Eotaxin-3, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1, MIP-1, TARCProinflammatory Panel1 (mouse) Kit (1 Plate) V-PLEXIFN-, IL-1, IL-10, IL-12 p70, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, KC/GRO, TNF-Proinflammatory Panel1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEXIFN-, IL-1, IL-10, IL-12 p70, IL-13, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, TNF-Cytokine Panel 1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEXGM-CSF, IL-1, IL-12/IL-23p40, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-5, IL-7, TNF-, VEGFHuman Proinflammatory Panel I (4-Plex) (1 Plate) V-PLEXIFN-, IL-1, IL-6, TNF-Human Proinflammatory Panel II (4-Plex) (1 Plate) V-PLEXIL-1, IL-6, IL-8, TNF-Chemokine Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEXEotaxin-3, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1, MIP-1, TARCChemokine Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEX PlusEotaxin-3, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1, MIP-1, TARCProinflammatory Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEXIFN-, IL-1, IL-10, IL-2, IL-6, IL-8Cytokine Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEXGM-CSF, IL-12/IL-23p40, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-5, IL-7, TNF-, VEGFAngiogenesis Panel 1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEXbFGF, Flt-1, PlGF, Tie-2,