高中生物 第一章第2、3节微生物的纯培养 微生物数量的测定课件 北师大版选修1.ppt

第2 3节微生物的纯培养 微生物数量的测定 学习导航1 能进行微生物的分离和培养 2 会测定某种微生物的数量 一 微生物的分离与纯化1 实验原理微生物的分离与纯化是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在 培养基上 样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个 将单个菌落接种到斜面培养基上 经培养后 即可得到一个微生物的 固体 菌落 纯种 2 微生物的分离步骤包括 或 三个步骤 3 菌种纯化与保藏分别从培养后长出的单个菌落上挑取少许细胞 接种到斜面培养基上 置培养箱或温室中37 培养24h 斜面上菌种长好后 保存备用 样品稀释 划线 涂布及培养 4 4 分离和纯化微生物是微生物技术的重要操作方法一般根据微生物对 ph 氧气等要求的不同 供给它们适宜的生活条件 或加入某种 造成只利于要分离的微生物生长 不利于其他微生物生长的环境 从而淘汰不需要的微生物 分离得到需要的微生物纯种 营养物质 抑制剂 1 微生物的分离可以不经过样品的稀释 2 无论是平板划线分离法还是涂布分离法均要在酒精火焰旁操作 3 从单个菌落上挑取少许细胞接种到斜面培养基上培养属于微生物的分离技术 判一判 二 微生物数量的测定1 测定土壤中的微生物的数量 1 实验原理利用 将待测定的微生物样品按比例作一系列稀释后 吸取 某几个稀释度的菌液接种到平板上 培养一段时间后即可形成菌落 根据 即可换算出样品的含菌数 平板菌落计数法 一定量 稀释倍数 取样接种量 和菌落数 2 实验步骤 90 空白对照 平置 倒置 30 300 要使平板菌落计数法准确 需要掌握哪几个关键步骤 提示 严格执行无菌操作 准确稀释 定量接种 想一想 2 平板菌落计数法 1 计数原则 一般选择菌落数在 细菌或放线菌 霉菌 的平板进行计数 2 优点 能测出样品中活菌数 因此又称活菌计数法 3 缺点 操作手续烦琐 时间较长 测定值常受各种因素的影响 30 300 10 100 1 划线分离法中几次灼烧接种环的目的 2 涂布分离法操作比较复杂 且各个细节均需保证无菌操作 应特别注意 1 酒精灯与培养皿的距离要适宜 2 吸管头不要接触其他任何物体 3 吸管要在酒精灯火焰周围使用 4 无菌玻璃涂棒末端浸在盛有70 酒精的烧杯中 取出时 要让多余的酒精在烧杯中滴尽 然后将沾有少量酒精的无菌玻璃涂棒在酒精灯火焰上引燃 注意防火 2012 贵州凯里一中检测 关于平板划线分离法操作正确的是 a 使用已灭菌的接种环 培养皿 在操作过程中不需要再灭菌b 打开含菌种的试管 需通过火焰灭菌 取出菌种后 需马上塞上棉塞c 将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内 划三至五条平行线即可d 最后将平板倒置 放在培养箱中 解析 在平板划线时 已灭过菌的接种环在每次划线后 必须用灼烧灭菌法灭菌 以防杂菌污染 a错 盛有菌种的试管在打开或重新塞棉塞前 都需通过火焰灼烧灭菌 b错 在平板内划三至五条平行线后应盖上皿盖 并灼烧接种环 待其冷却后 从第一区域划线的末端开始往第二区域划线并按此操作继续往三 四 五区域划线 c错 平板凝固后 须将平板倒放 以防皿盖上的水珠落入培养基 造成污染 d对 答案 d 名师点拨 平板冷凝后 皿盖上会凝结水珠 凝固后的培养基表面的湿度也比较高 将平板倒置 既可以使培养基表面的水分更好地挥发 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基 造成污染 有关平板划线分离法操作的叙述不正确的是 a 第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物b 每次划线前 灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后 接种环上残留的菌种 变式训练 c 在每一区域内划线时 接种环上的菌种直接来源于菌液d 划线结束后 灼烧接种环 能及时杀死接种环上的菌种 避免细菌污染环境和感染操作者解析 选c 本题考查了有关微生物纯化的实验操作 考查了实验与探究能力 在用平板划线法分离大肠杆菌的实验中 接种环取菌种前灼烧的目的是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种 划线结束后仍需灼烧接种环 是为了避免细菌污染环境和感染操作者 从第二次划线开始 每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端 1 平板菌落计数法 1 原理 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 通过统计平板上的菌落数 就能推测出样品中大约含有多少活菌 为了保证结果准确 一般选择菌落数在30 300的平板进行计数 2 注意事项 设置重复组 同一稀释度下 至少涂布3个平板作为重复组 才能增强实验的说服力与准确性 分析结果时 需考虑重复组的结果是否相差较大 结果相差较大 意味着操作有误 需要重新实验 设置对照 目的是排除实验中非测试因素对实验结果的影响 提高实验的可信度 3 计算公式 每克样品中的菌株数 c v mc 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 v 代表涂布平板时所用的稀释液的体积 m 代表稀释倍数 2 显微镜直接计数法 1 原理 利用特定细菌计数板或血球计数板 在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 2 缺点 不能区分细菌的死活 3 方法 用计数板计数 计数板是一块特制的载玻片 上面有一个特定的面积为1mm2和高为0 1mm的计数室 在1mm2的面积里又被划分成25个 或16个 中格 每个中格进一步划分成16个 或25个 小格 但计数室都是由400个小格组成的 如下图所示 4 计算公式 每毫升原液所含细菌数 每小格平均细菌数 400 10000 稀释倍数 自然界中的微生物往往是混杂生长的 人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯 然后进行数量的测定 下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验 请回答有关问题 步骤 制备稀释倍数为102 103 104 105 106的系列稀释液 用涂布平板分离法接种样品 适宜温度下培养 结果分析 1 测定的大肠杆菌数 在对应稀释倍数为106的培养基中 得到以下几种统计结果 正确可信的是 a 一个平板 统计的菌落数是23b 两个平板 统计的菌落数是22和26 取平均值24c 三个平板 统计的菌落数分别是21 5和52 取平均值26 d 四个平板 统计的菌落数分别是21 30 24和25 取平均值25 2 一同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23 4 那么每毫升样品中的菌株数是 涂布平板时所用稀释液的体积为0 2ml 3 用这种方法测定密度 实际活菌数量要比测得的数量 因为 4 某同学在测定大肠杆菌的密度时发现 在培养基上还有其他杂菌的菌落 能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了 为什么 解析 1 计数微生物时可选取多个菌落数相差不大的平板计数求其平均值 2 23 4 0 2 106 1 17 108 个 3 因为菌落可能由两个或多个细菌连在一起生长而成 所以实际活菌数量要比测得的数量多 答案 1 d 2 1 17 108 3 多当两个或多个细胞连在一起时 平板上观察到的是一个菌落 4 不能 因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程 探规寻律 由于有的菌落不只由一个细菌生长而成 即可能由两个或多个细菌长成 所以计算出的样品的菌株数会与实际样品的菌株数有所偏差 即计算出的样品的菌株数往往比活菌的实际数目低 用涂布分离法来统计样品中活菌的数目 在某稀释浓度下某同学做了若干个平板统计每个平板的菌落数 最接近样品中菌体数真实值的是 a 菌落数量最多的平板b 菌落数量最少的平板c 菌落数量适中的平板d 取若干个平板菌落数量的平均值 变式训练 解析 选d 用涂布平板分离法对样品中活菌数目进行统计 只是一种估测 根据此方法的实验过程可知 在某一稀释度下涂布的平板菌体数具有一定的偶然性 并不是绝对均匀 所以取若干个平板菌落数量的平均值比较接近样品中菌体数的真实值 对平板划线分离法和涂布分离法这两种常用的微生物分离方法混淆不清用划线分离法或涂布分离法纯化大肠杆菌时 可以用相同的培养基 都需要使用接种针进行接种 都需要在火焰旁进行接种 都可以用来计数活菌 a b c d 解析 平板划线分离法 涂布平板分离