高三生物 第2讲 微生物的培养与应用复习课件 新人教版.pptVIP

1 第2讲微生物的培养与应用 2 1 培养基类型 考点一 微生物的实验室培养 高频考点突破 3 4 特别提醒 加入培养基中的凝固剂 如琼脂 一般不能被微生物利用 只起到凝固作用 选择培养基一般只生长具有特定目的的微生物 鉴别培养基可以存在其他微生物 而且能鉴别特定的微生物 5 2 配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项 1 步骤 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板 2 注意事项 倒平板的温度一般在50 左右适宜 温度过高会烫手 过低培养基又会凝固 平板需倒置 这样既可使培养基表面的水分更好地挥发 又可防止皿盖上的水珠落入培养基 造成污染 6 3 纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项 1 原理 在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞 使其长成单个的菌落 这个菌落就是一个纯化的细菌菌落 2 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 平板划线法 平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中 在线的开始部分 微生物往往连在一起生长 随着线的延伸 菌数逐渐减少 最后可能形成纯种的单个菌落 如下图 7 几种划线方法示意图注意 第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌 灼烧接种环之后 要冷却后才能伸入菌液 以免温度太高杀死菌种 划线时最后一区域不要与第一区域相连 划线用力大小要适当 防止用力过大将培养基划破 稀释涂布平板法 8 系列稀释操作 图1 a 将分别盛有9ml水的6支试管灭菌 并按101 106的顺序编号 b 用移液管吸取1ml培养的菌液 注入101倍稀释的试管中 用手指轻压移液管上的橡皮头 吹吸3次 使菌液与水充分混匀 c 从101倍稀释的试管中吸取1ml稀释液 注入102倍稀释的试管中 重复b步混匀操作 以此类推 直到完成最后1支试管的稀释 9 注意移液管需要经过灭菌 操作时 试管口和移液管应在离火焰1 2cm处 10 涂布平板操作如图2所示 11 注意稀释涂布平板操作复杂 各个细节均应保证 无菌 具体如下 酒精灯与培养皿的距离要合适 吸管头不要接触任何其他物体 吸管要在酒精灯火焰周围使用 12 对位训练 1 有关培养基配制原则的表述正确的是a 任何培养基都必须含有碳源 氮源 矿质元素 水b 碳源和氮源必须具有一定比例 碳元素的含量最多 其次为氮元素c 微生物的生长除受营养因素影响外 还受到ph 氧 渗透压的影响d 营养物质的浓度越高越好答案c 13 2 2012 合肥二模 用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时 可以用相同的培养基 都需要使用接种针进行接种 都需要在火焰旁进行接种 都可以用来计数活菌a b c d 14 解析平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基 故 正确 平板划线法采用接种针进行操作 而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作 故 错误 纯化时 要进行无菌操作 需要在火焰旁接种 避免空气中的微生物混入培养基 故 正确 平板划线法一般用于分离而不是计数 故 错误 答案c 15 1 筛选原理配制选择培养基 把尿素作为培养基中的惟一氮源 原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长 其他微生物则不能在此培养基上生长 考点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 16 2 统计菌落数目 1 理论依据 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 通过统计平板上的菌落数 就能推测出样品中大约含有多少活菌 为了保证结果准确 一般选择菌落数在30 300的平板进行计数 2 计算方法 每克样品中的菌株数 c v m其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 v代表涂布平板时所用稀释液的体积 ml m代表稀释倍数 17 对位训练 3 下列关于微生物分离和培养的有关叙述 错误的是a 微生物培养前 需对培养基进行消毒b 测定土壤样品中的细菌数目 常用菌落计数法c 分离土壤中不同的微生物 要采用不同的稀释度d 分离能分解尿素的细菌 要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析微生物培养前 需对培养基进行灭菌处理 答案a 18 4 2012 北京海淀期中 通过实验测定土壤中的细菌数量 下列与此操作有关的叙述中 不正确的是a 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基 经高温 高压灭菌后倒平板b 取104 105 106倍的土壤稀释液0 1ml 分别涂布于各组平板上c 将培养皿倒置 37 恒温培养24 48小时d 选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数 19 解析检测土壤中细菌总数 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基 经高温 高压灭菌后倒平板 取104 105 106倍的土壤稀释液和无菌水各0 1ml 分别涂布于各组平板上 将实验组和对照组平板倒置 37 恒温培养24 48小时 在确定对照组无菌后 选择菌落数在30 300的平板进行计数 答案d 20 1 筛选原理即 可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 考点三 分解纤维素的微生物的分离 21 2 实验流程土壤取样 富含纤维素的环境 选择培养 用选择培养基培养 以增加纤维素分解菌的数量 梯度稀释 涂布平板 将样品涂布于鉴别培养基上 挑选产生透明圈的菌落 22 3 刚果红染色的两种方法的比较 23 特别提醒 为确定得到的是纤维素分解菌 还需进行发酵产纤维素酶的实验 纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种 纤维素酶的测定方法 一般是对纤维素酶的分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定 流程中的 选择培养 是否需要 应根据样品中目的菌株数量的多少来确定 24 对位训练 5 分离土壤中纤维素分解菌用到的方法是 稀释倒平板法 涂布平板法 单细胞挑取法 选择培养分离a b c d 25 解析稀释倒平板法是先进行梯度稀释 然后分别取不同稀释度的菌悬液少许 与已溶化并冷却至50 左右的琼脂培养基混合 摇匀后 倒入已灭菌的培养皿中 制成可能含菌的琼脂平板 培养一定时间后即可出现菌落 涂布平板法是先将溶化的培养基倒入无菌培养皿中 制成无菌平板 冷却凝固后 将一定量的某一稀释度的菌悬液涂布在整个平板表面 经培养后形成单个菌落 答案b 26 6 分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是a 经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上b 富集培养这一步可省略 但培养纤维素分解菌少c 经稀释培养后 用刚果红染色d 对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上 27 解析经选择培养后 再经稀释 才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 富集培养可省略 经稀释培养后 用刚果红染色 设置对照能证明经富集培养的确得到了欲分离的微生物 答案a 28 典例 2011 课标 有些细菌可分解原油 从而消除由原油泄漏造成的土壤污染 某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株 回答问题 1 在筛选过程中 应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上 从功能上讲 该培养基属于 培养基 答题技能培养 方法体验 微生物的培养和分离 29 2 纯化菌种时 为了得到单菌落 常采用的接种方法有两种 即 和 3 为了筛选出高效菌株 可比较单菌落周围分解圈的大小 分解圈大说明该菌株的降解能力 4 通常情况下 在微生物培养过程中 实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌 和 无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行 以避免周围环境中微生物的污染 30 解析 1 从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株 使用的培养基应是以原油为唯一碳源的选择培养基 通过控制碳源这种营养成分 来促进能高效降解原油的菌株的生长 抑制其他微生物的生长 2 菌种纯化培养时 常采用平板划线法和稀释涂布平板法接种 3 当固体培养基上长出单菌落后 可通过比较菌落周围分解圈的大小 来判断菌株降解原油能力的大小 一般来说 分解圈越大说明该菌株的降解能力越强 反之则越弱 31 4 实验室培养微生物的过程中 常用灼烧灭菌法对接种环 接种针 试管口 瓶口等进行灭菌 用高压蒸汽灭菌法对培养基 试管等进行灭菌 用干热灭菌法对玻璃器皿 吸管 培养皿 和金属用具等进行灭菌 实验操作应在酒精灯火焰旁进行 因为酒精灯火焰旁可形成一个无菌环境 可防止微生物的污染 答案 1 原油选择 2 平板划线法稀释涂布平板法 3 强 4 干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰 32 典例1 2012 皖南八校联考 微生物培养过程中 要十分重视无菌操作 现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作 防止杂菌污染 请分析下列操作 错误的是 易误警示 一 将消毒和灭菌混为一谈 33 煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 接种操作要在酒精灯火焰附近进行 无菌繁殖脱毒苗时 植物的外植体要进行消毒 家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 培养基要进行高压蒸汽灭菌 加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌a b c d 34 解析 无菌操作包括消毒和灭菌 需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等 需进行灭菌的有器皿 培养基 添加剂 指示剂或染色剂 等 煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢 属于消毒 为防止空气中杂菌污染 接种时要在酒精灯火焰附近进行 家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌 故不能灭菌 培养基常进行高压蒸汽灭菌 故 操作错误 答案 d 35 纠错笔记 消毒与灭菌的比较 36 典例2 现有两种固体培养基 已知其配制时所加的成分如下表 二 对题目中给出的信息 材料不会推断分析 37 用这两种培养基分别分离土壤中的两种微生物 你认为它们适于分离a 甲培养基适于分离自养型自生固氮菌 乙培养基适于分离异养型自生固氮菌b 甲培养基适于分离酵母菌 乙培养基适于分离真菌c 甲培养基适于分离异养型自生固氮菌 乙培养基适于分离自养型自生固氮菌d 甲培养基适于分离异养型共生细菌 乙培养基适于分离异养型共生固氮菌 38 解析 根据所提供的甲 乙两种培养基的成分分析 两者之间的主要差别是 甲培养基有葡萄糖和淀粉作为有机碳源和能源 也有少量的无机碳源 caco3 乙培养基无有机碳源和能源 两者之间的共同点是 都不含氮源 说明这两种培养基分别适于培养异养型