《色谱定性定量方法》PPT课件.pptVIP

色谱分析法 色谱定性定量方法 一 色谱定性方法 色谱定性分析通常采用三种方法 1色谱方法定性 根据保留值与己知物对照定性或利用检测器响应差别进行定性 用其他仪器或化学方法定性 与各种结构分析仪器联用定性 根据保留值定性1与已知物对照定性 利用保留时间或保留距离定性 双色谱系统定性双色谱系统定性是改变色谱条件以改变分离选择性 使不同物质显示不同保留值 降低柱温也能提高分离选择性 因而降低柱温也可能提高色谱定性的准确性 将试样和标准物的混合物分别在两根极性相差较大的色谱柱上进行色谱分离观察标准物和未知物色谱峰在这两根柱子上是否始终重合 如两色谱峰始终重合 可判断为同一组份 否则不是同一组份 可以避免不同组份由于保留值的偶然一致性 可能发生的定性错误 2 利用保留值经验规律定性实验证明 在各种色谱方法和色谱系统中 同系物或结构相似的化合物保留值与分子结构单元重复值呈线性关系 例如 在恒温或等度淋洗色谱中 同系物保留值的对数与分子中碳原子数成正比 通常称为碳数规律 根据同系物几个组分的保留值能求出同系物其他组分的保留值 由同系物保留值对碳数作图 也能求出同系物各组分保留值 用于定性鉴定 如图是气相色谱的lgtR n图 同一色谱条件下 不同的同系物其曲线斜率不同 保留时间对数与碳数关系图 沸点规律 气相色谱中 同系物或结构相同的同族化合物的沸点与保留值呈线性关系 根据沸点规律 按同族化合物沸点求出其保留值 或根据保留值求出沸点对样品中组分定性 比保留体积对数与沸点关系图11n 烷烃2醚类3醛类4n 伯醇 3 利用文献保留数据定性对于色谱定性分析 若实验室没有需要的标样 可以采用文献提供的色谱保留数据定性 保留指数具有标准物易得到 测定精度高等优点 是气相色谱领域应用最多的定性数据 保留指数具有如下特点 保留指数有效数字是三位 测定精度高 重复性好 误差在1 以内 受柱温影响较小 通常温度改变10C 保留指数变化约0 05 测定值与文献值易于重复 便于利用文献值定性 在较小温度范围 保留指数与温度成线性关系 利用这个规律用内插法求出不同温度下的保留指数 利用检测器选择性响应定性气相或高效液相色谱已有多种选择性检测器 它们只对某些类型的化合物有响应 将两种不同选择性检测器联用或选择性检测器与通用型检测器联用 根据色谱峰响应信号的差别 能提供化合物类型或结构信息 是色谱定性的辅助方法之一 用其他仪器和化学方法定性 分离样品定性鉴定技术 1将试样经过一些特殊试剂处理 发生物理变化或化学反应后 其色谱峰将会提前 移后或完全消失2比较处理前后色谱图的差异 以及在柱后用化学试剂鉴定流出物 就可初步定性鉴别试样中含有哪些官能团 色谱 质谱联用技术仪器联用技术是当代分析仪器发展的重要方向 而以色谱联用技术最为活跃 各种结构分析仪器提供物质的定性鉴定信息 但这些仪器方法大多数只能用于纯化合物或简单混合的的直接鉴定 若将结构分析仪器作为色谱鉴定器 与色谱联用 特色谱的高分离能力和结构分析仪器的成分鉴定能力相结合 使各种色谱联用技术成为最有效的复杂混合物的分离 鉴定手段 例如气相色谱 质谱 气相色谱 傅里叶变换红外光谱 液相色谱 质谱 液相色谱傅里叶变换红外光谱 液相色谱 核磁共振波谱 二 色谱定量方法 1 定量依据和校正因子 在一定的操作条件下 被测组份的质量mi与检测器产生的响应信号 色谱图上表现为峰面积 Ai成正比 比例系数称为峰面积绝对校正因子fi 即mi fiAi这就是色谱定量分析的依据 绝对校正因子主要由仪器的灵敏度所决定 并与分析的操作条件有密切关系同一种检测器对不同物质具有不同的响应值 即使两种物质的含量相等 在检测器上得到的信号Ai也往往是不相同的 而且它不易准确测定 因此无法直接用于定量分析 为使峰面积能正确反映出物质的量 必须采用相对校正因子 把混合物中的不同组份的峰面积校正成相当于某一标准物质的峰面积 用于计算各组份的含量 1 定量依据和校正因子 相对校正因子fis是指某组份i的绝对校正因子与标准物质s的绝对校正因子之比值 通常简称为校正因子 即 标准物质 苯 用于热导检测器 TCD 苯 正庚烷 用于氢火焰离子化检测器 FID 正庚烷 质量校正因子 摩尔校正因子和体积校正因子由于被测组份i所使用的计量单位不同 校正因子又可分为质量校正因子fm 摩尔校正因子fn和体积校正因子fV 1 定量依据和校正因子 某组份i与其等量的标准物s的响应值之比值称为相对响应值 用Sis表示 它与相对校正因子互为倒数 即 1 定量依据和校正因子 Sis或fis只与被测组份 标准物质以及检测器的类型有关 不受操作条件 柱温 载气流速和固定液的性质等因素的影响 因而使用方便 相对校正因子的测定方法 准确称量被测组份和标准组份 色谱纯试剂 纯度应大于99 混合均匀后 在色谱操作条件下进行分析 从色谱图上分别测量出相应的峰面积 从而计算出质量校正因子 常用化合物的校正因子也可以查阅 色谱手册 及有关参考文献 1 定量依据和校正因子 2 峰面积的测量 准确测量法 用计算机测量通常高级色谱仪配有计算机 能自动计算峰面积 用自动积分仪测量它能自动测出曲线所包围的面积 测量精度达0 2 2 上述两种方法分析速度快 线性范围广 对小峰或不规则的峰也能得出较准确的测定结果 2 峰面积的测量 近似测量法 对称峰可用峰高乘半高峰宽法 在相对计算时可省略系数 狭窄峰还可将半高峰宽视为常数以峰高计算 不对称峰可用峰高乘平均峰宽法 平均峰宽是指在峰高0 15和0 85处分别测量的峰宽的平均值 3 常用定量方法 归一法 若试样中各组份都能流出色谱柱并在所用的检测器上都能产生信号显示出色谱峰 则可测量所有组份色谱峰的峰面积 由下列公式计算各组份的含量 Ai为任一组份的峰面积 fi为任一组份的质量校正因子 归一法的优点是无需标样 结果准确 操作简便 操作条件 如进样量 流速等 变化对测定结果影响较小 宜于分析多组份试样中各组份的含量 ms和mi分别为内标物和被测组份的质量As和Ai分别为内标物和被测组份的峰面积fis为组份i相对于内标物s的相对校正因子 内标法用一定量的纯物质作内标物 加入到准确称量的试样中 根据被测试样和内标物的质量比及相应的色谱峰面积之比 计算被测组分的含量 选择内标物有四个要求 a 内标物应是该试样中不存在的纯物质 b 它必须完全溶于试样中 并与试样中各组份的色谱峰能完全分离 c 加入内标物的量应接近于被测组份 d 色谱峰的位置应与被测组份的色谱峰的位置相近 或在几个被测组份色谱峰中间 内标法的优点 A 不需标准样品B 测定的结果较为准确由于通过测量内标物及被测组份的峰面积的相对值来进行计算 因而在一定程度上消除了操作条件等的变化所引起的误差内标法的缺点 A 操作程序较为麻烦 每次分析时内标物和试样都要准确称量B 有时寻找合适的内标物也有困难可用内标校正曲线法进行定量测定 外标法外标法