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3种肝炎药物对小鼠免疫功能的影响更新日期：2010-03-30 点击： 韩少兰陈家春蔡大勇赵刚 提要用阿昔洛韦(无环鸟苷)、乙肝解毒胶囊和乙肝扶正胶囊对小鼠免疫功能的影响进行了观察。结果表明以上3种药物分别能降低小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数，对小鼠脾淋巴细胞转化有明显促进作用，但对小鼠血清溶菌酶浓度无影响，对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率无影响。 关键词3种肝炎药物；阿昔洛韦；乙肝解毒胶囊；乙肝扶正胶囊；小鼠免疫功能；影响 阿昔洛韦(无环鸟苷)是常用的抗病毒性合成药物。临床上主要用于抗疱疹病毒和乙肝病毒的治疗。乙肝解毒胶囊和乙肝扶正胶囊为近年研制出的治疗乙型肝炎的中药制剂。前者清热解毒，疏肝利胆，用于乙型肝炎辨证属于肝胆湿热内蕴者；后者补肝肾，益气活血，用于乙型肝炎辨证属于肝肾两虚证候者。由于乙肝致病与人体免疫功能密切相关，但以上药物对免疫功能的影响还未见报道。因此，本文系统研究了以上3种药物对小鼠免疫功能的影响，并在组间进行了比较。现将研究结果报道如下。 1实验材料和给药方法 1.1动物：昆明种小鼠，雌雄兼用，鼠龄68周，体重202 g。由湖北医科大学动物房提供。 1.2药物：阿昔洛韦，(90)卫药准字X97号注射用阿昔洛韦，批号为930309，湖北省医药工业研究所科益药厂生产，规格250 mg/支，每支溶于22.8 ml N.S中，备用。乙肝解毒胶囊，WSaB000189川卫药准字(89)5061号，批号为921128，四川万县地区中药厂生产，规格0.25 g/粒，每1粒溶于7.5 ml N.S中，备用。乙肝扶正胶囊，WSaB000189川卫药准字(89)5060号，批号为920926，四川万县地区中药厂生产，规格0.25 mg/粒，每1粒溶于7.5 ml N.S.中，备用。 1.3分组及用药：将小鼠随机分成4组，每组8只。雌雄兼用，自由饮食。正常对照组：N.SO.15 ml/10 g q.d14 d；阿昔洛韦组：0.15 ml/10 g(即164.5 mg/kg)q.d14 d；乙肝解毒胶囊组：0.15 ml/10 g(即500.00 mg/kg)q.d14 d；乙肝扶正胶囊组：0.15 ml/10 g(即500.00 mg/kg)q.d14 d。 2方法与结果 2.1对小鼠血清溶菌酶的影响(血清溶酶浊度法) 2.1.1新鲜菌液的制备：将Micrococus Lysodeikticus接种在普通琼脂上，37 下培养30 h，用1/15MPBS(pH6.4)洗下，配制成混悬菌液。用721型分光光度计在波长640 nm处测定并调节其浓度到透光度为36%，即得。 2.1.2溶菌酶标准溶液的制备：精密称取溶菌酶标准品9.2 mg，用1/15 mol/LPBS(pH 6.4)9.2 ml配成1.000 mg/ml原液，放冰箱保存，临时稀释成200、100、50、25 g/ml。 2.1.3测定：第15 d放血处死小鼠，测血清溶菌酶含量。 2.1.3.1血清经4倍稀释后取0.2 ml放于小试管内，37 水浴箱内预热5 min，再向管内加入预热的菌液1.8 ml，混匀，立即记时，至2 min时加入5 N KOH停止反应，迅速将菌液倒入比色杯内，在640 nm波长下测其透光率(T 1%)。 2.1.3.2血清经4倍稀释后取0.2 ml放于小试管内，先加5 N氢氧化钾1滴，混匀，在37 预热5 min，再加入预热的菌液1.8 ml摇匀，37 水浴箱内2 min后同条件下测透光率T 0%。 2.1.3.3T %T 1%T 0%为透光度差值，即溶菌酶所致透光率的变化，从标准曲线上可查得血清中溶菌酶含量。 2.1.4标准曲线的制备：以0.2 ml各浓度溶菌酶标准液代替被检查血清，操作步骤与血清同。以透光率差值的对数为纵坐标，溶菌酶浓度的对数值为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。 2.1.5统计处理：各动物血清检测的透光率差值的对数值，查对标准曲线得到溶菌酶浓度的对数值，计算溶菌酶的浓度。按组间t检验，统计比较血清溶菌酶的组间差异。结果见表1、表2。 表1溶菌酶标准液的透光率(用于标准曲线) 管号 T1% T2% T% logT% logX X(g/ml) 01 61.1 19.7 41.9 1.622 2.301 200 02 45.2 23.3 21.9 1.340 2.000 100 03 32.4 21.2 11.9 1.049 1.699 50 04 28.9 22.7 6.2 0.792 1.389 25 表2对小鼠血清溶菌酶的影响(s) 组别 dose n s P值 正常对照组 NS15 ml/kg 8 9.5153.221 阿昔洛韦组 164.5 mg/kg 8 10.6562.158 乙肝扶正胶囊组 500.0 mg/kg 8 12.1057.039 乙肝解毒胶囊组 500.0 mg/kg 8 11.8695.706 t检查：与组比较*P0.05 2.2对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响 2.2.1腹腔巨噬细胞制片：于给药的第11 d，腹腔注射4%牛肉汤培养基0.15 ml/10 mg；于给药的第15 d，腹腔注射2%(V/V)鸡红细胞生理盐水溶液0.5 ml/10 g，30 min后脱椎处死小鼠，卧位固定于鼠板上。正中剪开腹壁皮肤，腹腔注入生理盐水2 ml/只，转动鼠板1 min。吸出腹腔洗液1 ml，平均分滴于2块载玻片上，放入垫有湿纱布的盒盘内，移置37 孵箱内孵育30 min。然后置片于4%(V/V)Giemsa-磷酸缓冲染色液中染色3 min，用蒸馏水漂洗，晾干，封片备检。 2.2.2光镜计数：在4010倍光镜下，每片计数100个以上吞噬细胞(每只动物2片，共200以上吞噬细胞)。同时计数3个指标，即吞噬鸡红细胞的巨噬细胞(PM)，未吞噬鸡红细胞的巨噬细胞(NPM)和被计数了的巨噬细胞中吞噬的鸡红细胞总数(CRBC)。计算吞噬百分率(每100个巨噬细胞中吞有鸡红细胞的平均数)，其计算公式如下： 2.2.3统计处理：以吞噬百分率和吞噬指数为计算数值，按组间t检验，分析各组动物巨噬细胞吞噬能力的差别。结果见表3、表4。 表3对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率的影响(s) 组别 dose n s P值 正常对照组 NS15 ml/kg 8 45.611312.7524 阿昔洛韦组 164.5 mg/kg 8 50.6238