Wortmannin抑制剂.doc

Wortmannin是一种常用的phosphatidylinositol 3-kinase(PI3K)抑制剂。Wortmannin可以通透细胞，和PI3K的110kD催化亚基相结合，特异性抑制PI3K，抑制PI3K/Akt信号途径，包括常见的抑制Akt磷酸化等。同时 Wortmannin也可以抑制myosin light chain kinase等。Wortmannin无明显的抗细菌作用，但具有很强的抑制真菌活性。Wortmannin对于纯化的PI3K的IC50 2-4nM。 Wortmannin分子量为428.43，分子式为C23H24O8Wortmannin is a very potent, specific and direct inhibitor of PI3 kinase, originally derived from fungus (1,2). The inhibition is irreversible and noncompetitive. Wortmannin does not inhibit PI4 kinase, protein kinase C or protein tyrosine kinase (3).LY294002 is a cell-permeable compound that acts as a potent and selective inhibitor of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K). It is active with purified preparations, cytosolic fractions and suitable for use with intact cells. LY294002 blocks the catalytic activity of PI3-Kinase with an IC50 of 1.4 M and without affection of other kinases including PKC, PKA, MAPK, S6 kinase, EGFR, Src, or PI4-Kinase. For intact cells like neutrophils, a concentration of 50 M completely abolishes the PI3K activity. It also inhibits the activities of myosin light chain kinase (MLCK), PI4-Kinase and phospholipase C (PLC) but at concentrations about 100 fold higher than those required for PI3K inhibition.建议用LY，主要原因有两个，一，Wortmannin相对来说要贵好多；二，更重要的，Wortmannin半衰期很短，如果没记错的话大概只有810小时，所以如果处理时间久的话，药物浓度下降很快。有篇文献研究了Wortmannin的半衰期，有兴趣可以去查查看，应该是2005年的文献。wortmannin 和LY294002 都是PI3K的常用抑制剂。我个人认为选择的依据应该是基于文献，由于抑制剂是药物，因此它多少会有一些细胞特异性的。针对自己所研究的细胞，选择文献应用最多的那一种，此时作用浓度和时间的选择比较有依据；如果条件允许，最好都选用，这样更严密。目前，关于两者的区别，引起关注最多的是LY294002会引起细胞内钙离子浓度的变化，而wortmannin通常不会，因此，它与wortmannin相比，会对细胞其他活性造成不同的影响。如果你的研究与细胞内钙离子浓度密切相关，那么应用LY294002时就要更加谨慎。价格方面：目前进口最小包装wortmannin的价格大约为1mg-900元左右，LY294002为1.5mg-450元左右，都足够用的！只是wortmannin溶解后只能保存3个月，所以一定要规划好时间。作为洋葱素quercetin的吗啉类衍生物1， LY 294002是可逆，高效的PI3K激酶选择性抑制剂，竞争性结合酶的ATP结合位点。LY 294002对PI4K, DAGK, PKC, PKA, MAPK, S6K, EGFR和c-src酪氨酸激酶无抑制作用2。LY 294002能够抑制脉络膜黑色素瘤OCM-1细胞的体外增殖，IC50为10 M，这个值较高于曾经报道过的体外PI3K抑制强度（IC50=1.4M）3。以人结肠癌细胞为研究对象的体内外实验，LY 294002都表现出抑制增殖和诱导凋亡的功能4。近期研究发现LY 294002还可以用作酪蛋白激酶II的抑制剂5基本特性：CAS号：154447-36-6， 分子式：C19H17NO3， 分子量：307.34，外观：米白至奶油色固体。溶解与保存：粉末直接保存于-20oC，有效期2年。DMSO或乙醇溶解配制储存液。建议分装后-20oC避光保存，避免反复冻存，至少可存放6个月。使用浓度：LY 294002的具体使用浓度请参考相关文献，并根据自身实验条件（如实验目的，细胞种类，培养特性等）进行摸索和优化。应用实例（仅作参考）：1） 为检测LY 294002在体外对细胞增殖和Akt磷酸化的抑制作用，使用含20M LY 294002和10%FBS的培养基培养肠癌细胞48h，LoVo和Colo205细胞中细胞增殖明显减少（80%），甚至在DLD-1和HCT15细胞中，30%细胞在48h后死亡，但是在细胞中，LY 294002都表现出对Akt（Ser473）磷酸化的抑制。体内实验中，为检测LY 294002对腹腔内肿瘤扩散作用，给LoVo（或DLD-1）移植瘤-SCID小鼠静脉注射LY 294002 （2.0ng/ml/kg），显著抑制LoVo和DLD-1细胞中s.c.肿瘤的生长（分别是72%，55%）4。2） 为检测PI3K在r-hRANTES诱导的趋化作用，给小鼠（8-12周的雌性BALB/c小鼠）注射r-hRANTES后，口服30-300mg/kg的LY 294002，LY 294002以剂量依赖的形式降低r-hRANTES诱导的嗜中性粒细胞补充。另外，为检测LY 294002对r-hRANTES诱导的AKT磷酸化的抑制作用，给注射r-hRANTES的小鼠口服100mg/kg LY 294002，发现r-hRANTES诱导的AKT磷酸化显著降低6。注意事项：本产品为化学试剂对人体可能有害，请做好安全防护工作，避免直接接触皮肤。本产品仅用于科研用途，禁止用于人身上。Murine embryonic stem (mES) cells can proliferate independently of the presence of growth factors in the medium. It is yet unknown what intrinsic activity triggers cell cycle events in mES cells. Here we investigated the contribution of the PI3-kinase cascade to autonomous proliferation of mES cell using PI3-kinase inhibitors wortmannin and LY294002. Wortmannin displays a weaker inhibitory effect on phosphorylation of PI3-kinase pathway target PKB as compared with LY294002, and does not downregulate mES cells proliferation, while LY294002 causes a strong decrease in the share of cells in S-phase and accumulation of cells in G1 phase. Both inhibitors cause significant decrease in cyclin D1 amount. The treatment with LY294002, rather than with wortmannin results in a decrease of cyclin E amount and cyclin E-assossiated kinase activity. In mES cells, inactivation of PI3-kinase-dependent pathway and G1 arrest are not accompanied by induction of p27kip 1 transcription and accumulation of this inhibitor of cyclin-cdk complexes at the protein level, implying that these events accomplished by some p27kip 1-independent mechanism. B