人类X染色质小体的检测.doc

人类X染色质小体的检测摘要 X染色小体是哺乳动物真核细胞中随机或印记失活的X染色体，该变化有x染色体失活中心调节。失活的目的是使X连锁基因在两性间的表达水平达到一个平衡的过程，在遗传学上称为剂量补偿效应。本实验采用有Moor发明的并广泛的运用于现在的临床和研究的颊涂片法（buccal smear method），以女性的口腔上皮细胞为材料，经染色后直接加盖玻片观察。发现其是一个很小的深色的点，经常存在于细胞核的边缘。1引言 X染色质小体又称巴氏小体、性染色质小体等，是由Barr和其研究生Bertram首先发现并提出的。当时广泛的运用于临床诊断中。这个发现开启了一个全新的研究领域。在20世纪60年代Ohno和Lyon分别提出了“Ohno定律”和“Lyon假说”使人们逐渐认识到x染色质小体是一条随机失活的想染色体。这些工作激发了人们对x染色体失活方面的研究兴趣。对其进行了深入的探讨，结果显示器失活与染色体上的XIC（X染色体失活中心）有关。2 实验材料和方法 2.1 实验材料 显微镜，载玻片，盖玻片，消毒牙签，固定液（95酒精冰醋酸=3:1，装在染色缸中），香柏油，镜头纸，卡包品红染液。2.2 实验方法 2.2.1 材料的获取 本实验采用的材料是女性的口腔上皮细胞，将口漱干净，用消毒牙签在口腔一侧用力刮取。弃去第一次的然后在同一个地方刮取，涂在干净的载玻片上，反复多涂几层。然后迅速的将其插入到3-5min。 2.2.2 制片 在晾干的固定好的装片上用卡宝品红染色10min，然后直接加盖玻片，也可用95%的酒精分色1-3min，再用无水酒精分色两次，每次1min再加盖玻片。用油镜观察x染色质小体。3 实验结果 在光学显微镜下，X染色质小体是一个结构紧密，轮廓清晰的染色较深的小体。通常位于细胞核边缘，直径大约1微米。呈三角形、卵形、短棒形、或双球形。一般来说，在动物细胞中，对于每一个物种来说，X染色质小体的位置是恒定的，它可以处于靠近核仁、靠近核膜或者是自由地处于核内区内三种位置。 女性细胞中看到x染色质小体的概率不是很高，而且不是所有的细胞都可以看到x染色质小体，不同的人其观察到的概率是不一样的。 图14 实验讨论X染色质小体的产生是由于剂量补偿效应使染色体随机或印记失活。对于XX-XY个体来说，染色小体是鉴定男女的一个重要的依据，于是该特征也曾经用来鉴定性别，但是对于某些染色体缺失或多处的个体存在误判，1959 年后,才发现它仅仅代表其中一条 X 染色体, 从而也纠正了 20 世纪 50 年代中期认定的 XXY核型的人为女性而 XO 核型为男性的错误。X染色体的失活对基因的表达具有特殊性，它表现为整条染色体的失活，其失活过程首先涉及一种计数和选择机制,指导特定条件下哪(些)条X染色体失活,对成年细胞二倍体而言失活X染色体的数量遵循N一1规则(N,X染色体数),所以，人体内仅仅保留一条X染色体。巴氏小体检查可在一定程度上确定胎儿性别和查出性染色体异常的患者，如外表为女性的特纳氏综合征患者却无巴氏小体，故判断患者的核型是XO；克氏综合征患者外貌为男性，但有一个巴氏小体，可判定患者的核型是XXY；而其他性染色体异常的患者如XXY、XXYY有1个巴氏小体，而XXX、XXXY有2个巴氏小体等。同样的，X染色体上既有失活中心，但也有逃避失活的基因，他们能在失活和不失活的染色体上同时表达。XIST是逃避X失活的基因之一，它的表达产物是诱导x染色体失活，常见的还有ZFX和RPS4X。迄今已发现12种以上的基因逃避X失活。 陈凡国等在遗传学实验中发现，男性的空腔上皮细胞x染色质小体也有一定的出现概率，但是明显少于女性。另外，如今的检测Y染色质的方法与巴氏小体的检测具有异曲同工之妙。可用来检测Y染色体异常。参考文献1杨大祥.遗传学实验（第二版）.科学出版社.2010.92李雅轩.人体细胞巴氏小体的观察.生物学通报.1998.33.123陈云弟,曾溢滔.X染色体失活一种特殊方式的基因调控.生物工程进展.1997.Vol.17,No.3.4徐世永，刘红林.哺乳动物X染色体失活机制.细胞生物学