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本科生课程论文本科生课程论文 CCl4致小白鼠肝损伤对 ALT AST 活性的影响 英文题目 学生姓名 所在专业 所在班级 课程名称动物营养代谢病及中毒病 任课教师赵生才 副教授 交稿时间2013 年 5 月 目 录 目目 录录 请按毕业论文 设计 管理暂行办法及毕业论文 设计 撰写规范的要求进行论文 设计 的撰写 由于采用了 WORD 的目录功能 请同学查阅 WORD 的标题和目录使用 方法 以便正确生成目录 模板中的分页符也不得随意删除 以免造成页眉和页码的 错误 摘 要 I 100 120 字 I ABSTRACT II 1 前言 1 2 实验材料 2 2 1实验动物 2 2 2主要试剂 药品 2 3 实验方法 2 3 1实验动物分组及 CCl4肝损伤处理 2 3 2 血浆制备 3 3 3ALT 活力测定 金氏法 3 3 4AST 的活力测定 金氏法 3 4实验结果 3 53 63 鸣 谢 4 参考文献 5 摘 要 I 摘 要 100 120 字 通过对不同剂量的四氯化碳作用于小鼠 昆明小白鼠 时造成的肝脏损伤程度的 测定实验 掌握四氯化碳对小鼠的急性毒性试验的设计和实验方法 以及学习和掌握 谷氨酸氨基转移酶 ALT 天门冬氨酸氨基转氨酶 AST 测定的方法 采用腹腔注射 给予小鼠 5 0 7 5 10 0 12 5 15 0 mL kg CCl4 花生油溶液 对照组 10 0 mL kg 花生油溶液 染毒 12 18 小时后采集眼球血进行测定小鼠肝脏损伤程度以及血液中 ALT AST 酶的活性与含量 结果表明 宋体 小四号 1 25 倍行距 Learn the design and methods of the acute toxicity test of mice which caused by the carbon tetrachloride and the assay method of alanine aminotransferase ALT acute liver injury mice ALT AST ABSTRACT II ABSTRACT 此处为英文摘要 字体 Time New Roman 小四号 1 25 倍行距 KEYWORDS 广东海洋大学 2010 级本科生课程论文 1 论文题目 3 号 黑体 专业 学号 姓名 宋体小四号 中间以逗号分隔 任课教师 教师姓名 宋体小四号 1 前言 多年以来 肝脏疾病作为一种常见并高发的严重威胁人类健康的疾病 受到越来 越多的关注与研究 各种肝脏疾病的发病机制的研究与治疗药物的筛选等问题在很大 程度上是依赖于与人类肝脏疾病病理机制相似或有可参照性的实验动物模型的建立 研究和应用而完成的 四氯化碳 Carbon tetrachloride CCl4 是肝脏毒理学中研究较多的亲肝性毒物 对肝 脏具有较强的损伤作用 可导致肝细胞的变性 坏死 脂肪变性 纤维化和癌变 1 四氯化碳导致的肝肾损伤主要表现在其代谢中产生的自由基 其机制为四氯化碳经肝 微粒体 CytP450 活化后产生三氯甲基自由基 引起细胞膜和细胞器膜的不饱和脂肪酸 过氧化 从而改变膜的流动性和通透性 使膜的 Ca2 ATP 酶失活 胞质内 Ca2 浓度 升高 破坏细胞骨架 激活磷脂酶 并使氨基酸功能基团受损 核酸转化和突变 从 而引起细胞死亡 四氯化碳作为一种肝脏亲和性较高的毒物 在日常可接触的工业生产等产业活动 中用途十分广泛 四氯化碳小鼠急性肝损伤模型常用于保肝药物或药用植物提取物的 评价等方面的研究 2 对四氯化碳急性肝损伤敏感指标的研究可为建立急性肝损伤动 物模型 评价保健食品的保肝功能提供科学依据 谷氨酸氨基转移酶 Alanine aminotransferase ALT 又名谷丙转氨酶 Glutamicpyruvic transaminase GPT 是体内重要的转氨酶 在体内各组织中广泛 存在 以肝脏活性最高 是细胞内酶 正常鼠类血清中含量甚微 谷氨酸氨基转移酶 ALT 在 37 及 PH7 4 条件下 作用于丙氨酸及 a 酮戊二酸组成的底物 生成丙酮酸 及谷氨酸 天冬氨酸转氨酶 Aspartate aminotransferase AST 又称为谷草转氨酶 Glutamic oxaloacetic transaminase GOT 是一种具有磷酸吡哆醛依赖性 由细 胞核基因编码的线粒体酶 AST GOT 能使 a 酮戊二酸和天门冬氨酸移换氨基和酮基 生成谷氨酸和草酰乙酸 草酰乙酸在反应过程中可自行脱羧成丙酮酸 丙酮酸与 2 4 二硝基苯肼反应生成 2 4 二硝基苯腙 在碱性溶液中显红棕色 正常情况下 谷草转 氨酶存在于组织细胞中 其中心肌细胞中含量最高 其次为肝脏 血清中含量极少 3 谷草转氨酶主要存在于肝细胞线粒体内 当肝脏发生严重坏死或破坏时 才能引起谷 广东海洋大学 2010 级本科生课程论文 2 草转氨酶在血清中浓度会偏高 4 由于四氯化碳注入小鼠体内造成不同程度和速度的肝脏损伤 从而将会导致小鼠 血液中的谷氨酸氨基转移酶 ALT 天门冬氨酸氨基转氨酶 AST 浓度上升 采血进 行血液中浓度和酶活性的测定 2 实验材料 2 1实验动物 昆明小白鼠 30 只 雌雄不限 体重 20 2 克 由广东海洋大学农学院动物实验室 繁养 饲以我校动物实验室提供的饲料 实验期间自由摄食 饮水 2 2主要试剂 药品 5 CCl4 花生油溶液 谷氨酸氨基转移酶 ALT 谷丙转氨酶 GPT 诊断试剂盒 天门冬氨酸氨基转氨酶 AST 谷草转氨酶 GOT 诊断试剂盒 肝素 丙氨酸氨基转移酶基质液 100ml 1 瓶 谷草转氨酶基质液 100ml 1 瓶 2 4 二硝基苯肼液 100ml 1 瓶 4mol L NaOH 100ml l 瓶 用时稀释制成 0 4mol L NaOH 溶液 2 mol L 丙酮酸钠标准液 1 支 0 1mol L 磷酸盐缓冲液 1 支 3 实验方法 3 1实验动物分组及 CCl4肝损伤处理 动物分组 30 只小白鼠随机分为 6 组 每组 5 只 雌雄各半 CCl4 肝损伤 6 个实验组 每组依次腹腔注射 10 CCl4 花生油溶液 5 0 7 5 10 0 12 5 15 0ml kg 对照组腹腔注射花生油 10 0ml kg 具体见表 1 表 1 CCl4 肝损伤小白鼠腹腔注射剂量 ml kg 组别药物剂量鼠数 对照花生油 105 1 组四氯化碳 55 2 组四氯化碳 7 55 3 组四氯化碳 105 4 组四氯化碳 12 55 5 组四氯化碳 155 广东海洋大学 2010 级本科生课程论文 3 3 2 血浆制备 小白鼠腹腔注射药物后 12 18 小时 摘眼球采血法采血 装如 1 毫升离心管 管 内预先加入一滴肝素 3000 转 分离心 10 分钟 分离血清 血清在冰箱内 20 冷冻 保存备检 抗凝血离心 染毒后 12h 摘眼球采血 加枸橼酸钠抗凝 3000 转 分钟 离心 10 分钟 分离血浆 3 3 ALT 活力测定 金氏法 混匀 室温放置 5 分钟 505nm 波长 蒸馏水调零 测定各管吸光度 3 4AST 的活力测定 金氏法 室温放置 10 分钟 505nm 波长 蒸馏水调零 测定各管吸光度 4实验结果 5 6 鸣 谢 4 鸣 谢 在本篇课程论文完成之际 我想要向赵生才老师表达衷心的谢意 老师在这一实 验中为我们详细的讲解了实验原理 试验方法等 不厌其烦的指导我们处理数据的方 法 并在实验过程中给予了宝贵的意见和精心的指导 赵老师一丝不苟的作风 严谨 求实的态度 踏踏实实的精神 无以不让我受益匪浅 老师不仅授我以技能 而且教 我做人 至今由深深记得老师的两首劝学诗中 天行健君子自强 逝如斯光阴寸金 赵老师不仅在学术 实验方面给我带来很大的影响 已在生活和思想上引导我反思自 己 谨在此向老师再一次表达深深的谢意 此外 还要感谢我的室友们 以及农学院的所有同学们在实验 学习 生活中给 予我的诸多帮助 支持与关心 在学术上的交流和探讨使我们共同进步 我为拥有这 样的同学们而无比自豪 宋体小四号 1 25 倍行距 5 参考文献 宋体小四号 1 25 倍行距 参考文献用 括起 具体写法参照学校有关毕 业论文 设计 的撰写规范 1 江泉观 基础毒理学 M 北京 化学工业出版社 1991 132 143 2 Jamshidzadeh A Fereidooni F Salehi Z et al Hepatoprotective activity of Gundelia tour