大学生创新项目申请书3.doc

遵义医学院大学生创新性实验计划项目申 请 书项目名称 栀子西红花苷、栀子苷提取物与杜仲叶绿原酸提取物降血脂作用机制及配比研究 申 请 人 张娇俊 年级专业 2008级生物工程 导师姓名 李文娜 联系电话 07567623384 E-mail: 填表日期 制表：遵义医学院实验教学管理中心2011年6月2日简 表项目名称栀子西红花苷、栀子苷提取物与杜仲叶绿原酸提取物降血脂作用机制及配比研究起止时间2011年 7月至 2012年5月申请经费3300元申请人及申请团队学 号姓 名年级所在学院、专业联系电话E-mail 200820120张娇俊2008珠海校区生物工程1363127734583902229220071353李博2008珠海校区生物工导师姓 名李文娜学院珠海校区职务/职称教研室副主任/副教授E-电 话07567623384一、项目简介（300-500字左右）本课题研究栀子西红花苷、栀子苷乙醇提取物及杜仲叶绿原酸提取物体外对肝脂酶活性的影响以探讨两药的抗动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）作用机制。研究发现，栀子西红花苷提取物和杜仲叶绿原酸提取物均具有调血脂抗AS的作用，但它们的具体机制尚不明确，其中有部分机制重叠（如体外抑制胰脂肪酶活性）。而杜仲叶中绿原酸和栀子苷的含量均非常丰富，与栀子的主要药理成分相互重叠，因此本课题组设想两药合用是否具有协同降脂作用？肝脂酶能与细胞膜上的硫酸乙酰肝素多糖结合，在脂蛋白与肝细胞膜间起桥梁作用，有利于肝细胞摄取血中脂质。肝脂酶活性降低可引起血脂水平异常，不但与脂肪肝形成有关，也影响到AS的发生发展。所以本研究以肝脂酶为调血脂作用靶点，初步考察栀子西红花苷、栀子苷乙醇提取物及杜仲叶绿原酸提取物体外对肝脂酶活性的影响，并通过成分的筛选进行相关的配比研究。本课题研究结果将有利于更深入了解栀子西红花苷、栀子苷乙醇提取物及杜仲叶绿原酸提取物的调血脂与抗AS作用机制，为栀子及杜仲叶的开发与利用提供理论依据，为新型调血脂药与抗AS药的发现提供新的思路，并为临床治疗AS等心血管疾病提供新的方法手段。二、申请理由（包括自身具备的知识条件、自己的特长、兴趣等）经过这几年的学习，对相关专业（药物化学、药理学、生理学、生物化学等）的基础知识有了一定的了解；通过对实验课的学习，掌握了相关实验的基本操作。并且本人对科研具有浓厚的兴趣，加上本人动手能力较强，与本课题组同学能够相互融洽的沟通协作，所以申报了这次学校2011年度大学生创新性实验计划项目。三、立项背景（研究现状、趋势、研究意义等，参考文献和其他有关背景材料）栀子为茜草科植物栀子的干燥成熟果实，而其药理活性的物质基础主要是西红花苷和栀子苷等。西红花苷是一种水溶性的类胡萝卜素，据文献报道，它能显著降低AS鹌鹑的甘油三酯和胆固醇。栀子苷是栀子中一种主要的环烯醚萜苷类，有研究发现其具有防治动脉硬化的功能。杜仲作为一种重要的中药，在中、日、韩三国已被广泛使用。近年来有研究表明，杜仲叶含有与杜仲皮相似的医药成分和营养物质-。另外，有研究发现杜仲具有抗AS的潜力。目前的研究表明，杜仲的某些药理活性与抗AS有关，如杜仲叶提取物对喂食高脂肪饲料的仓鼠具有降血脂作用7，杜仲叶水提取物对C57BL/KsJ-db/db小鼠具有降血糖和降血脂的作用8等。现发现杜仲叶中绿原酸的含量相当丰富，并且绿原酸很可能具有保护心血管疾病的药理活性。有研究发现，绿原酸对高脂饲料喂养金仓鼠的血脂和血糖代谢以及肝过氧化物酶体增生物激活受体（PPAR）的表达具有调节作用9。PPAR亚科有三种蛋白：PPAR ，PPAR /，PPAR 。其中PPAR 是一种细胞核受体，主要能调节游离脂肪酸（FFA）的键合、运输、氧化与合成10。其激活后，能增加FFA氧化酶的活性，提升肝脏与肌肉中脂类能量的利用11从而起到调节血脂的作用。另外有研究还发现，绿原酸能激活肝脏甘油三酯（TG）的代谢12来调节血脂。此外，绿原酸对高脂饮食诱导的肥胖小鼠显示出抗肥胖活性，并改善其脂质的代谢13。还有研究表明，绿原酸可以改变（fa/fa）Zucker 大鼠血浆和肝脏中胆固醇、TG和某些矿物质的浓度14。经过导师课题组前期研究，将栀子乙醇提取物经大孔树脂101初步分离得到西红花苷（HPLC测定，含量2030%）和栀子苷（HPLC测定，含量50%左右），另外还发现杜仲叶绿原酸提取物（HPLC测定，绿原酸含量40%）具有降血脂的活性，并且作用效果强于或等同于临床现有的调血脂与减肥药物辛伐他汀和奥利司他。因此，本课题设想以肝脂酶为调血脂的又一作用靶点，初步考察栀子西红花苷、栀子苷乙醇提取物及杜仲叶绿原酸提取物体外对肝脂酶活性的影响及其抗AS作用。并通过成分的筛选进行相关的配比研究，以期望得到能增强肝脂酶活性的组分，为深度开发栀子与杜仲叶作为降血脂与抗AS药物提供进一步的理论依据。虽然目前对栀子与杜仲叶的相关研究还不是很多，但随着其越来越多的药用有效成份及其药理活性的发现，它们的研究即将成为生物医学研究的一个热点。此项研究能够进一步探索杜仲叶对心血管系统的保护作用。并为我们将课本上的知识进行吸收与加工，以及将科学技术向现实生产力转化提供了实践的机会。参考文献1陈阳, 赵璨, 张浩, 蔡乐. 不同浓度乙醇提取栀子有效成分效果的研究. 遵义医学院学报. 2009. 32(5): 439-441,444.2钱之玉. 西红花苷调血脂作用机制研究. 中国执业药师. 2009. (2): 10-16,22.3丁嵩涛, 刘洪涛, 李文明, 李秀英, 于超. 栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用. 中国药理学通报. 2009. 25(6): 725-729.4Luo J, Tian C, Xu J, et al. Studies on the antioxidant activity and phenolic compounds of enzyme-assisted water extracts from Du-zhong (Eucommia ulmoides Oliv.) leaves. J Enzyme Inhib Med Chem, 2009,24(6):1280-7.5杜红岩, 李钦, 杜兰英等. 杜仲雄花茶营养成分的测定分析. 中南林业科技大学学报. 2007. 27(6): 88-91.6赖娟华, 徐丽瑛, 饶华, 李玉云. 杜仲叶化学成分和药理作用研究概况. 实用中西医结合临床. 2004. 4(2): 67-68,78.7Choi MS, Jung UJ, Kim HJ, et al. Du-zhong (Eucommia ulmoides Oliver) leaf extract mediates hypolipidemic action in hamsters fed a high-fat diet. Am J Chin Med, 2008,36(1):81-93.8Park SA, Choi MS, Kim MJ, et al. Hypoglycemic and hypolipidemic action of Du-zhong (Eucommia ulmoides Oliver) leaves water extract in C57BL/KsJ-db/db mice. J Ethnopharmacol, 2006,107(3):412-7.9Li SY, Chang CQ, Ma FY, et al. Modulating effects of chlorogenic acid on lipids and glucose metabolism and expression of hepatic peroxisome proliferator-activated receptor-alpha in golden hamsters fed on high fat diet. Biomed Environ Sci, 2009,22(2):122-9.10Aoyama T, Peters JM, Iritani N, et al. Altered constitutive expression of fatty acid-metabolizing enzymes in mice lacking the peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha). J Biol Chem, 1998,273(10):5678-84.11Muoio DM, Way JM, Tanner CJ, et al. Peroxisome proliferator-activated receptor-alpha regulates fatty acid utilization in primary human skeletal muscle cells. Diabetes, 2002,51(4):901-9.12Shimoda H, Seki E, Aitani M. Inhibitory effect of green coffee bean extract on fat accumulation and body weight gain in mice. BMC Complement Altern Med, 2006,6:9.13Cho AS, Jeon SM, Kim MJ, et al. Chlorogenic acid exhibits anti-obesity property and improves lipid metabolism in high-fat diet-induced-obese mice. Food Chem Toxicol, 2010,48(3):937-43.14de Sotillo DV R, Hadley M. Chlorogenic acid modifies plasma and liver concentrations of: cholesterol, triacylglycerol, and minerals in (fa/fa) Zucker rats. J Nutr Biochem, 2002,13(12):717-726.四、项目方案1.研究目标：通过一种简易、快捷的调肝脂酶活性中药有效成分筛选法，初步考察栀子西红花苷、栀子苷乙醇提取物及杜仲叶绿原酸超声提取物体外对肝脂酶活性的影响，并进行相关的配比研究，从而探讨其主要作用机制及抗AS作用，并为新型调血脂药与抗AS药的发现提供新的思路，为临床治疗AS等心血管疾病提供新的方法。2.研究思路：文献报道栀子西红花苷提取物与杜仲叶绿原酸提取物，具有调血脂的作用，但其作用机制尚不明确，有待进一步研究。因此，本课题以肝脂酶为调血脂的作用靶点，考察栀子西红花苷、栀子苷乙醇提取物及杜仲叶绿原酸超声提取物在体外对肝脂酶活性的影响及其抗AS作用。并通过成分的筛选进行相关的配比研究。初步确定药物调血脂及抗AS的作用机制及其调控环节。3.技术路线杜仲叶绿原酸提取物；绿原酸标准品栀子西红花苷、栀子苷乙醇提取物；西红花苷标准品；栀子苷标准品大鼠肝脏匀浆制备大鼠肝匀浆肝脂酶活性测定条件的选定对大鼠肝匀浆肝脂酶活性的影响栀子西红花苷、栀子苷乙醇提取物与杜仲叶绿原酸提取物配比研究统计分析数据，撰写论文五、特色与创新本实验的特色与创新主要有：在前人研究的基础上以价格低廉的栀子与杜仲叶分别代替价格较之昂贵许多的中药西红花与杜仲皮为原料来提取具有生物活性的药用有效成分。通过考察栀子西红花苷、栀子苷提取物及杜仲叶绿原酸提取物对肝脂酶活性的影响，初步探索调节血脂的多靶点效应机制及杜仲叶提取物的抗AS作用机制。六、进度安排（选题、自主设计实验、实验研究、数据处理、研制开发、撰写总结报告、成果推广或论文发表等）2011年6月-2011年8月选题及实验设计2011年9月-2012年2月实验研究2012年3月-2012年5月数据处理及撰写总结报告,并撰写论文发表七、中期及结题预期目标（即中期检查和结题验收时考核的依据）统计数据撰写综述2篇；参与生物工程系本科毕业生答辩，提交答辩论文2篇。 八、经费使用计划 （注：预算支出科目按下列顺序填写：1. 科研业务费 2. 实验材料费 3. 仪器设备费 4. 其他，开支范围参见国家自然科学基金资助项目财务管理办法第二章。）经费支出项目名称具体支出内容金 额（千元）使用时间科研业务费测试生化指标，提取杜仲叶绿原酸、栀子西红花苷、栀子苷所需水电煤气，论文打印，查阅复印文献费用0.22011年 7月至 2012年5月实验材料费SD大鼠，总脂酶试剂盒，大鼠肝脂酶ELISA测定试剂盒，氯丙嗪，SDS，DTT，Tris，绿原酸、栀子苷、西红花苷标准品等化学试剂药品3.02011年 7月至 2012年5月其他（