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实验八、紫外吸收法检测DNA的浓度与纯度生技1101 112301103 顾晨一、实验目的学会利用紫外分光光度计测定样品的吸光度，从而测出DNA的浓度与纯度。二、实验原理DNA的吸收峰在260nm蛋白质的吸收峰在280nm纯净的DNA A260/A280的比值约为1.8大于1.8表明样品中RNA污染严重 小于1.6说明有蛋白质或苯酚污染； 纯净的RNA A260/A280的比值约为2.0，在样品中若含有蛋白质，会使A260/A280的比值下降三、实验材料紫外分光光度计、比色皿、移液枪 实验七中获得的质粒DNA 四、实验步骤选取合适的按键待测定样品为dsDNA（如PCR产物），按下键“7/dsDNA”待测定样品为ssDNA（如反转录合成的第一链cDNA产物），按下键“8/ssDNA”待测定样品为RNA，按下键“9/RNA”待测定样品为Oligo（如PCR引物），按下键“6/Oligo”。将空白对照置入样品孔。注意：空白对照是空白液，并非所有情况都是水。例如，用Tris溶液溶解DNA样品，则要用Tris液做空白对照。按下 “Blank”键。仪器记录空白对照，设置为0.000A。将样品置入样品孔，按下“Sample”键，仪器显示样品的吸光度和浓度值，以及其他相关参考比值。五、实验结果与分析1. A260/ A280=1.897样品中RNA污染严重，可用酶去除RNA.2. A260/ A230=2.600A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。3. Concentration 113.50 DNA浓度：3444.8ug/ml六、思考题利用紫外-可见分光光度计测得的结果比实际浓度偏高还是偏低？为什么？ 核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收
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