牛结核病防治技术课件

牛结核病防治技术 甘肃省动物疫病预防控制中心胥元鹏 牛结核病主要是由牛型结核分枝杆菌引起的一种人兽共患的慢性传染病 世界动物卫生组织 OIE 将其列为B类动物疫病 我国将其列为二类动物疫病 1危害 经济损失巨大例如患病奶牛的寿命要比健康牛短得多 产奶量显著减少 常常不能怀孕 如果该病未能控制 其病死率可达10 20 在执行本病的防治措施是要花费很大的人力和物力 结核病牛也往往是人感染结核病的重要传染源 结核病的分布 结核病曾经广泛流行于世界各地 尤以奶牛业发达国家为严重 尽管各国政府都十分重视对结核病的防治 一些国家亦在该病的控制方面取得了很大的成就 有效地控制甚至消灭了此病 但更多的国家依然呈现地区流行或散发流行 2诊断 流行病学症状病理变化病原检测免疫学试验 传染原 牛型结核杆菌人型结核杆菌禽型结核杆菌牛型结核杆菌亦能感染人 猪及其他家畜 本病依据流行病学 临床症状 病理变化可做出初步诊断 确诊需进一步做病原分离鉴定或免疫学诊断 2 1流行特点本病奶牛最易感 其次为水牛 黄牛 牦牛 人也可感染 结核病病牛是本病的主要传染源 牛型结核分枝杆菌随鼻汁 痰液 粪便和乳汁等排出体外 健康牛可通过被污染的空气 饲料 饮水等经呼吸道 消化道等途径感染 2诊断 2 2临床症状 潜伏期一般为10 45天 有的可长达数月或数年 通常呈慢性经过 临床以肺结核 乳房结核和肠结核最为常见 咳嗽病牛常发的为肺结核 易疲劳 常有短而干的咳嗽 尤其当起立 运动 吸入冷空气或尘埃时随后咳嗽加重 频繁且表现痛苦 呼吸次数增多或发生气喘 消瘦病畜日渐消瘦 贫血 有的牛肩前 股前 腹股沟 颌下 咽及颈淋巴结等体表淋巴结肿大 当纵膈淋巴结受侵害肿大 压迫食道 则有慢性胀气症状 病势恶化 可能发生全身性结核 即粟粒性结核 胸膜 腹膜发生结核病灶时呈现所谓的 珍珠病 胸部听诊可听到摩擦音 乳房感染多数病牛乳房常被感染侵害 可见乳房上淋巴结肿大无热无痛 泌乳量减少 乳汁初期无变化 病重时呈水样稀薄 顽固性下痢肠道结核多见于犊牛 可表现为消化不良 食欲不振 顽固性下痢 迅速消瘦 性机能紊乱生殖器官结核可出现性机能紊乱 发情频繁且表现性欲亢进 慕雄狂与不孕 孕畜流产 公畜副睾及睾丸肿大 阴茎前部可发生结节 糜烂等 神经症状中枢神经系统主要是脑及脑膜发生结核病变 常引起神经症状 如癫痫样发作 运动障碍等 肺结核 以长期顽固性干咳为特征 且以清晨最为明显 患畜容易疲劳 逐渐消瘦 病情严重者可见呼吸困难 乳房结核 一般先是乳房淋巴结肿大 继而后方乳腺区发生局限性或弥漫性硬结 硬结无热无痛 表面凹凸不平 泌乳量下降 乳汁变稀 严重时乳腺萎缩 泌乳停止 肠结核 消瘦 持续下痢与便秘交替出现 粪便常带血或脓汁 乳房感染 2诊断 2 3病理变化 在肺脏 乳房和胃肠粘膜等处形成特异性白色或黄白色结节 结节大小不一 切面干酪样坏死或钙化 有时坏死组织溶解和软化 排出后形成空洞 胸膜和肺膜可发生密集的结核结节 形如珍珠状 禽型结核分枝杆菌感染可能无临床症状 但亦可能出现昏睡和消瘦 在应激条件下 可能发生突然死亡 这往往与严重的肝脏病变有关 象这样的病变在死后解剖时容易观察到 禽型结核分枝杆菌能引起人的一种渐进性的难以治疗的疾病 因此所有操作均须在有充分生物防护装置的条件下进行 人型结核分枝杆菌感染除灵长类动物会出现咳嗽等症状外 其他动物一般无明显临床症状 大体解剖观察 牛型结核分枝杆菌感染病变可发生在所有内脏器管最常见的是肺 胸膜 肠系膜淋巴结 感染早期 可在肺门部位及肺门淋巴结见到干酪样坏死或钙化的病灶 感染中后期 可在胸膜 胸腔见到 珍珠状 增生 形成所谓的 珍珠胸 在肠系膜可见到串珠状淋巴结肿大 禽型结核分枝杆菌感染主要表现为肺 肝 脾的粟粒状结核病变 肝脾显著肿大 表面及组织内可见到大小似小米 颜色为灰黄色的化脓斑点 人型结核分枝杆菌感染可见干酪样坏死或钙化的病灶 病变可发生在所有内脏器官 浆膜表面 特别是胸膜 骨及关节 最常发生在肺 支气管 纵隔及咽喉淋巴结 乳腺 肝 脾及肠 早期的病变包括在咽喉 支气管纵隔 以及偶尔可见的肠系膜等淋巴结的干酪样及钙化肉芽肿 其大小从针尖大到榛实大 偶尔有蒂 粟粒状结核病变的大小似小米 在肺 肝 脾以及其它器官可大量发现 其颜色为灰黄色 病理学诊断 在巨噬细胞内繁殖结核杆菌侵入机体后 易被巨噬细胞吞噬 但在某些情况下不被杀死 而且能在巨噬细胞内繁殖并沿淋巴管蔓延 原发性结节局部病变主要是由该菌的直接作用形成特异性原发性病灶 原发性结节 当动物机体抵抗力强 则原发性病灶囊化 形成瘢痕或钙化而痊愈 当动物抵抗力弱时 病菌可从淋巴 血管和天然管道三条途径散布全身 引起其他组织器官的结核病灶或全身性结核 粟粒性结核病 组织病理变化 病理学特点在器官组织发生以增生性或渗出性炎 或两者混合存在 增生性结核结节动物机体抵抗力强时 机体对结核菌的反应以细胞增生为主 形成增生性结核结节 由类上皮细胞 和巨噬细胞集结在结核菌周围 构成特异性肉芽肿 外围是一层密集的淋巴细胞和成纤维细胞 形成非特异性肉芽组织 器官原有轮廓被破坏 渗出性结核当机体抵抗力降低时 机体的反应则以渗出性炎为主 即在组织中有纤维蛋白和淋巴细胞的弥漫性沉积 后发生干酪样坏死 化脓或钙化 这种变化主要见于肺和淋巴结 渗出性结核的干酪样坏死保存了一般组织的结构 而在增生性病灶中 需要指出的是由上皮样及巨细胞组成的结节是不够作确诊结核病用的 因为该病变不是结论性的 尚需揭示出病原的存在 结核菌素反应与病变 牛结核菌素阳性反应 但剖检时找不到病变 当牛结核病在牛群中严重流行时 遇到这种情况不多 但对于牛结核病清净的牛群 这种情况就比较常见了 无病变的牛结核菌素阳性反应是不是完全属于非特异性反这种情况很难作出明确诊断 因为有些牛虽然感染牛型结核分枝杆菌 但病变很少或不明显 解剖时不易发现 2诊断 2 4实验室诊断2 4 1病原分离鉴定采集病牛的病灶 痰 尿 粪便 乳及其它分泌物样品 作抹片或集菌处理 见附件 后抹片 用抗酸染色法染色镜检 并进行病原分离培养和动物接种等试验 病料淋巴结痰乳精液子宫分泌物尿和粪便 样品运送样品应封装在无菌的容器内冷藏运送 对那些提纯结核菌素皮内变态反应试验阳性 但尸检时无病理学病变的动物 可从下颌 咽后 支气管 肺 特别是肺门及肺门淋巴结 纵隔及一些肠系膜的淋巴结采集样品送检 病原 牛结核分枝杆菌属于分枝杆菌属哺乳动物结核杆菌种牛型结核杆菌亚种 结核分枝杆菌也可感染牛极少数情况下 禽结核分枝杆菌也可感染牛 病原检测 染色镜检培养特性动物试验生化试验分子生物学诊断 染色镜检 涂片先在玻片上涂布一层薄甘油蛋白 甘油蛋白的配制 鸡蛋白20mL 甘油20mL 水杨酸钠0 4g 混匀 如检验标本为乳汁等含脂肪较多的材料 在涂片制成后 用二甲苯或乙醚脱脂1 2分钟后倾去 再滴加95 酒精以除去二甲苯 待酒精挥发后即可染色 然后吸取标本滴加其上 涂布均匀 萋 尼氏抗酸染色 涂片后 经火焰固定加石炭酸复红染色液用100mL95 酒精加3g碱性复红配制成碱性复红饱和酒精溶液 取碱性复红饱和酒精溶液10mL 与5 苯酚溶液90mL混合后用滤纸滤过将玻片在火焰上加热至出现蒸汽 不能产生气泡 如此热染5分钟 如染色液干涸 须加适量补充 水洗后滴加3 盐酸酒精脱色30 60秒 至无色素脱下为止 浓盐酸3mL 95 酒精97mL 混匀 水洗后 以骆氏美兰染色液复染1分钟 甲液 美兰0 3g 95 酒精30mL 乙液 0 01 氢氧化钾溶液100mL 混合即成水洗 吸干 镜检 抗酸菌应不被盐酸酒精脱色而染成红色 其他细菌与动物细胞可被盐酸酒精脱色而均被染成兰色 菌体形态 牛结核分枝杆菌呈细长平直或微弯曲的杆菌 长1 5 5微米 宽0 2 0 5微米 在陈旧培养基上或干酪性淋巴结内的菌体 偶而可见长达10微米或更长 培养 将经过处理的被检样品标本接种到培养基上 同时作2 4份 培养一天后 以熔化的石蜡封口 继续培养 牛型结核分枝杆菌生长缓慢 初次分离培养时 需36 37 培养5 8周方可出现菌落 在固体培养基上不产生任何颜色 菌落湿润 略显粗糙并发脆 加1 的丙酮酸钠能促进生长 若是非典型分枝杆菌 则生长较快 大部分 但不是全部 产生白色或具有橙色或黄色色素 常形成黄色或橙色菌落 某些种类的色素只有在亮处才显出 牛型 禽型和人型结核分枝杆菌鉴定 牛型 禽型和人型结核分枝杆菌鉴定 2 4 2免疫学试验牛型结核分枝杆菌PPD 提纯蛋白衍生物 皮内变态反应试验 即牛提纯结核菌素皮内变态反应试验 见GB T18646 2诊断 2 5结果判定凡分离出牛型结核分枝杆菌或牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性的牛 均判为结核病牛 3疫情报告 3 1任何单位和个人发现患有本病或者疑似本病的动物 都应当及时向当地动物防疫监督机构报告 3 2动物防疫监督机构接到疫情报告后 立即按 动物疫情报告管理办法 及有关规定及时上报 4疫情处理 4 1发现疑似结核病病畜后 畜主应立即将其隔离 并限制其移动 当地动物防疫监督机构要及时派员到现场进行流行病学调查 临床症状检查 病理解剖 病料采集 实验室诊断等工作 根据诊断结果采取相应措施 4 2确诊牛结核病患畜后 必须按下列要求处理 4 2 1扑杀病牛和阳性牛 4疫情处理 4 2 2划定疫点 疫区 受威胁区疫点指病畜所在的栋舍 户或其它有关屠宰场 点 经营单位 疫区指病畜所在的饲养场 自然村的范围区域 在疫区划分时注意考虑当地的饲养环境和天然屏障 如河流 山脉等 受威胁区指与疫区相毗邻的饲养场 自然村的范围区域 4疫情处理 4 2 3隔离 封锁零星散发时 可采用圈养和固定草场放牧方式 对病畜的同群畜实施隔离 隔离所用草场 应远离交通要道 居民点或人畜密集的地区 场地周围最好有自然屏障或人工栅栏 当一个自然村 饲养场结核病阳性率在3 以上或病牛10头以上时 应对疫区实施封锁 禁止病牛和疑似病牛 易感动物及其产品调出 对易感动物实行圈养或指定地点饲养 役用动物限制在疫区内使役 4疫情处理 4 2 4无害化处理病死和扑杀的病畜 要按照GB16548 1996 畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程 进行无害化处理 4 2 5紧急监测用牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验对疫区和受威胁区的全部牛进行紧急监测 4疫情处理 4 2 6消毒对病畜和阳性畜污染的场所 用具 物品进行严格消毒 饲养场的金属设施 设备可采取火焰 熏蒸等方式消毒 养畜场的圈舍 场地 车辆等 可选用2 烧碱等有效消毒药消毒 饲养场的饲料 垫料可采取深埋发酵处理或焚烧处理 粪便采取堆积密封发酵方式 以及其它相应的有效消毒方式 4疫情处理 4 2 7封锁的解除封锁的疫区内最后一头病畜及阳性畜被扑杀 经无害化处理后 对疫区内监测45天以上 没有发现新病例 对所污染场所 设施设备和受污染的其它物品进行彻底消毒 经当地动物防疫监督机构检验合格后 由原发布封锁令的机关解除封锁 5预防与控制 采取以 监测 检疫 扑杀和消毒 相结合的综合性防治措施 5 1监测监测对象 牛监测比例为 种牛 奶牛100 规模场肉牛10 其它牛5 疑似病牛100 如在牛结核病净化群中 包括犊牛群 检出阳性牛时 应及时扑杀阳性牛 其它牛按假定健康群处理 成年牛净化群每年春秋两季用牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验各进行一次监测 初生犊牛 应于20日龄时进行第一次监测 所有的种牛 奶牛每年必须进行两次监测 并按规定使用和填写监测结果报告 及时上报 5预防与控制 5 2种牛 奶牛调运的检疫异地引进的种牛 奶牛 必须来自于非疫区 调出前 在装运前30天内 须经当地动物防疫监督机构实施检疫 检疫合格 并出具有效检疫证明后 方可起运 调入的种牛 奶牛 必须隔离观察45天以上 且经牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验检查阴性者 方可混群饲养 5预防与控制 5 3工作人员牛场工作人员 每年要定期进行健康检查 发现有患结核病的应及时调离岗位 隔离治疗 工作人员的工作服 用具要保持清洁 不得带出牛场 5 4饲养环境牛饲养场生产区应与生活区隔离 奶牛场内不应饲养猫 狗 猪 鸡 鸭等动物 并应禁止其它动物出入 消灭鼠 蝇等传播媒介 5预防与控制 5 5防疫监督动物防疫监督机构要对辖区内奶牛场 种牛场登记造册 并建立档案 布病结核病监测合格是奶牛场 种牛场 动物防疫合格证 发放或年度审验的必备条件 鲜奶收购点 站 必须凭 动物防疫合格证 对奶牛场 户 收购鲜奶 5预防与控制 5 6净化措施被确诊为结核病牛的牛群 场 为牛结核病污染群 场 应全部实施牛结核病净化 5 6 1牛结核病净化群 场 的建立5 6 1 1污染牛群的处理 应用牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验对该牛群进行反复监测 每次间隔3个月 发现阳性牛及时扑杀 并按照4规定处理 5 6 1 2假定健康牛群的处理 经扑杀病牛及阳性牛后的牛群为假定健康牛群 用牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验进行反复监测 每次监测间隔90天 发现阳性牛及时扑杀 5预防与控制 犊牛应于20日龄时进行第一次监测