聚乙烯亚胺溶液配制说明书.pdf

上海起发实验试剂有限公司 线性线性聚乙烯亚胺聚乙烯亚胺溶液配制说明书溶液配制说明书 polysciences 23966 1mg ml 转染试剂的配制 转染试剂线性 PEI 溶液的配制 聚乙烯亚胺 Polyethylenimine PEI 是聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分 子 每相隔二个碳个原子 即每 第三个原子都是质子化的氨基氮原子 使得聚合物网络在任何 pH 下 都能充当有效的 质子海绵 proton sponge 体 PEI 可用作转染试剂 它可以缩聚 DNA 分子形成颗 粒并转染真核细胞 有实验证明 分子量为 25000 的线性 PEI 即 Polysciences 23966 转染效率最高 下面将主要介绍 polysciences 线性 PEI 23966 的产品特性及其溶液的配制过程 1 产品特性产品特性 产品名称 线性聚乙烯亚胺 PEI CAS 号9002 98 6 26913 06 4分子式 CH2CH2NH n分子量25000 熔点73 75 C外观白色或黄色固体 结构式 溶解性 溶于热水 低 pH 值的冷水 甲醇和乙 醇 不溶于 苯 乙醚和丙酮 储存室温 2 溶液配制溶液配制 此指导说明书是经 polysciences 公司研究 测试及其客户反馈的后编写的 下面推荐一种简单适用 而高效的方法 讲述如何配制浓度为 1mg mL 的转染试剂的配制 材料 材料 1g 23966 1L 纯水 Milli Q 纯水 注射用水 WFI 或类似的生物级水 12 M 盐酸 10 M 氢氧化钠 一次性 0 1 0 2 m PES 真空无菌过滤器 无菌高聚乙烯或聚丙烯试剂瓶 器材 器材 1 L 玻璃烧杯 1 L 玻璃量筒 核准 pH 计 2 支 1 mL 塑料移液管 托盘 聚四氟乙烯 PTFE 搅 拌棒 真空泵 配制过程 配制过程 1g 23966 900mL 水溶解 搅拌 加热 60 80 C 加 HCl 调 pH 到 2 0 左右 盖上烧 杯 搅拌 3h 直至粉末完全溶解 冷却至室温 加 NaOH 调 pH 到 6 9 7 1 移液到量筒 加 水补足至 1L 真空过滤消毒 分装 20 C 保存 备注 备注 加热或加酸都有助于 PEI 溶解 当然酸可能不用加那么多 详细用量可试加一点搅拌看看 足够溶解就行 不一定需要加到 pH 那么低 试剂储存 试剂储存 冷冻部分溶液可在 20 C 保存长达一年 部分解冻的溶液可在 4 C 保存 2 周 不可反复冻融 粉末储存 粉末储存 未开封的粉末有效期两年 可在室温下保存直至使用 参考文献 参考文献 1 聚乙烯亚胺 PEI 线性 1 mg mL Cold Spring Harbor Protocols 2008 pdb rec11323 pdb rec11323 2008 doi 10 1101 pdb rec11323 上海起发实验试剂有限公司 Catalog 23966 Polyethylenimine Linear MW 25000 PEI 25K Transfection Reagent Preparation and Storage Recommendations These guidelines are our recommendations based off research testing and customer feedback There are alternative methods available but we suggest following these recommendations for easy adoption and consistently high performance These methods are adapted from Cold Spring Harbor Protocols 1 an excellent secondary resource for transient transfection literature Reagent Preparation 1 mg mL Materials 1 1g PEI 25K Polysciences Catalog 23966 2 1L Milli Q water water for injection WFI or comparable biological grade water 3 12 M Hydrochloric Acid HCl 4 10 M Sodium Hydrochloride NaOH 5 Disposable 0 1 0 2 m PES vacuum sterile filter 6 Sterile HDPE or polypropylene storage vials for reagent aliquots Equipment 1 1L glass beaker 2 1L glass graduated cylinder 3 Calibrated pH meter 4 2 x disposable 1mL plastic pipettes 5 Stir plate 6 PTFE coated stir bar 7 Vacuum pump Method 1 Dispense 1g of PEI 25K into beaker and suspend in 900 mL of water 2 Add stir bar and set stirring to produce a small vortex 3 Add hydrochloric acid dropwise until pH is 2 0 4 Cover top of beaker and stir for up to 3 hours until powder fully dissolves 5 Add sodium hydroxide dropwise until pH is 6 9 7 1 6 Transfer solution to graduated cylinder and add water until the total volume is 1L 7 Sterile filter through vacuum membrane 8 Aliquot as desired and store at 20 C Reagent Storage Frozen aliquots can be stored at 20 C for up to one year Aliquots can be thawed and kept at 4 C for up to two weeks but should never be re frozen Powder Storage Unopened powder has a shelf life of two years from date of receipt It can be kept at room temperature until use References 1 Polyethylenimine PEI linear 1 mg mL Cold Spring Harbor Protocols 2008 pdb rec11323 pdb rec11323 2008 doi 10 1101 pdb rec11323 Support We re here to help Our techn