高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》课件8 浙科版选修1.ppt

微生物 微生物 microorganism 结构简单 形体微小的单细胞 多细胞或没有细胞结构的低等生物 例 酵母 霉菌 细菌 放线菌 病毒和小型原生动物等等微生物的利用 抗生素 酒 腐乳 污水治理 历史小资料 19世纪中期 关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击 在生产过程中 出现了葡萄酒变酸 变味的怪事 经过一番研究 法国科学家巴斯德发现 导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌 保持培养物纯净 保证无杂菌污染很重要 大肠杆菌的培养与分离 一 大肠杆菌 e coli 兼性厌氧的肠道内的共生菌群合成维生素b和维生素k 供机体利用 产生大肠杆菌素 抑制肠道致病菌和腐生菌滋生 革兰氏阴性菌 作为一种工程菌 在基因工程技术中被广泛采用 例 大规模生产治疗糖尿病的药物 胰岛素 培养基 culturemedia 按照微生物对营养物质的不同需求 配制出的供其生长繁殖的营养基质 提供微生物生长的条件 合适的温度 25 37 合适的ph 细菌6 5 7 5中性偏碱真菌5 0 6 0中性偏酸营养成分 含有碳源 氮源 生长因子 水和无机盐 lb培养基的配方 固体培养基的配制 每50ml液体培养基添加1g琼脂 培养基种类 培养基 培养液 是由人工方法配制而成的 专供微生物生长繁殖使用的混合营养液 1 按物理状态分 固体培养基和液体培养基 半固体培养基 2 按功能分 选择培养基和鉴别培养基 3 按成分分 天然培养基和合成培养基 1 培养基的类型 固体培养基 菌落 液体培养基 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 半固体培养基 无动力有动力 弥散 2 培养基的用途 液体培养基 增菌 工业生产固体培养基 纯化 分离 鉴定 活菌计数 保藏菌种半固体培养基 动力检测 无菌技术 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵 无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开 1 消毒 利用化学或物理方法 杀死大部份致病微生物的过程 消毒与灭菌 2 灭菌 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术 以化学剂或物理方法消灭所有微生物 包括所有细菌的繁殖体 芽孢 霉菌及病毒 而达到完全无菌的过程 消毒的方法 1 100 煮沸5 6min2 巴氏消毒法70 75 下煮30min或80 下煮15min3 用75 酒精 新洁尔灭等进行皮肤消毒4 氯气消毒水源5 紫外线消毒 灭菌的方法 1 灼烧灭菌2 干热灭菌160 170 下加热1 2h 3 高压蒸汽灭菌100kpa 121 下维持15 30min 灭菌锅 检查水位设定高压温度及时间 121 20min放入待灭菌物品加热 并打开放气阀排冷空气关闭放气阀继续升温升压待温度降低至80 以下开盖 取出物品烘干 无菌技术操作要点 1 实验操作空间 操作者的衣着和手 2 微生物培养的器皿用具和培养基等 3 为避免周围环境中的微生物的污染 实验操作应在进行 4 实验操作时 应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触 清洁和消毒 灭菌 酒精灯火焰附近 微生物实验室培养的基本操作程序 培养基配制器具和培养基灭菌倒平板微生物接种 斜面 液体 恒温箱中培养分离纯化 液体 平板划线 培养 菌种的保存 斜面 准备阶段 培养阶段 称量 蛋白胨 酵母提取物 nacl 液体lb培养基的配方 固体lb培养基每100ml液体lb培养基中加入2g琼脂 摇匀 灭菌 灭菌 培养皿壁上不能沾有培养皿 否则容易污染 1 培养基灭菌后 需要冷却到50 左右时 才能用来倒平板 你用什么办法来估计培养基的温度 问题讨论 答 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时 就可以进行倒平板了 2 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰 答 通过灼烧灭菌 防止瓶口的微生物污染培养基 微生物在自然界中呈混杂状态存在 要获得所需菌种 必须从中进行分离 在保藏菌种时不慎污染时也需予以分离 怎样纯化分离我们需要的大肠杆菌呢 怎样确保大规模培养繁殖起来的细菌是一个纯种群体呢 思考 将待分离样品进行一定的稀释 并使微生物的细胞尽量以分散状态存在 然后使其长成一个个纯种单菌落 如何分离和纯化 大肠肝菌的分离 微生物的分离技术 稀释 涂布分离法 平板划线分离法 稀释法 平板划线分离法 问题讨论 1 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环 在划线操作结束时 仍然需要灼烧接种环吗 为什么 答 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后 接种环上残留的菌种 使下一次划线时 接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端 从而通过划线次数的增加 使每次划线时菌种的数目逐渐减少 以便得到菌落 划线结束后灼烧接种环 能及时杀死接种环上残留的菌种 避免细菌污染环境和感染操作者 2 在灼烧接种环之后 为什么要等其冷却后再进行划线 答 以免接种环温度太高 杀死菌种 3 在作第二次以及其后的划线操作时 为什么总是从上一次划线的末端开始划线 答 划线后 线条末端细菌的数目比线条起始处要少 每次从上一次划线的末端开始 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 4 进行恒温培养时 为什么要将平板倒置 答 恒温培养时 培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发 如果正放培养皿 则水分形成的水滴会落入培养基表面且扩散开 若培养基中一行成菌落 则菌落中的菌会随水扩