多不饱和脂肪酸 Δ4-脂肪酸去饱和酶 Δ5-脂肪酸延长酶 球等鞭金藻 三角褐指藻 毕赤酵母.doc

多不饱和脂肪酸论文：两株海洋微藻中4-脂肪酸去饱和酶基因和5-脂肪酸延长酶基因的克隆以及功能验证【中文摘要】球等鞭金藻(Isochrysis sphaerica)和三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)是两种非常重要的海洋微藻,它们是自然界中多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids, PUFAs)的初级生产者,在PUFAs的商业化生产中具有很大的发展潜力。球等鞭金藻中富含二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid, DHA),三角褐指藻中二十碳五烯酸(Eicosatetraenoic acid, EPA)含量很高。随着人们对DHA和EPA等PUFAs与人体健康的积极作用研究的不断深入,这两种海洋微藻越来越引起人们的重视。本文以这两种海洋微藻为研究材料,针对环境因子对球等鞭金藻生长和脂肪酸组成的影响,海洋微藻中与DHA合成相关基因的克隆和功能验证,基因共表达等内容开展了研究,得到了如下一些结果:(1)测定了光照强度为1658mol/(m2s)和1530条件下球等鞭金藻的生长曲线以及脂肪酸组成和含量。结果表明,在设置的光强范围内,光照强度越强,微藻的生长速度越快。光照强度对各种脂肪酸的含量影响有差异,光强过低和过高都不利于藻体内总.【英文摘要】Isochrysis sphaerica and Phaeodactylum tricornutum, rich in DHA (Docosahexaenoic acid, C22:6 n-3) and EPA (Eicosapentaenoic acid, C20:5 n-3) respectively, are two kinds of the most important marine microalgae. They are primary producers of the very long chain polyunsaturated fatty acids (PUFAs), thus can be used as the alternative source for commercial production of PUFAs. As their positive effects on peoples health are becoming more and more evident, these two kinds of marine microalga attract more attent.【关键词】多不饱和脂肪酸 4-脂肪酸去饱和酶 5-脂肪酸延长酶 球等鞭金藻 三角褐指藻 毕赤酵母【英文关键词】Polyunsaturated fatty acids 4-Fatty acid desaturase 4-Fatty acid elongase Isochrysis sphaerica Phaeodactylum tricornutum Pichia pastoris【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848【目录】两株海洋微藻中4-脂肪酸去饱和酶基因和5-脂肪酸延长酶基因的克隆以及功能验证摘要5-6Abstract6-7第一章 文献综述13-281.1 引言131.2 脂肪酸的种类和命名13-141.3 PUFA_S 的功能14-151.3.1 生理功能141.3.2 营养和医药价值14-151.4 PUFA_S 的生物来源15-161.5 PUFA_S 的合成途径16-181.6 脂肪酸去饱和酶18-231.6.1 脂肪酸去饱和酶的分布和种类191.6.2 脂肪酸去饱和酶的基本结构和催化机理19-201.6.3 脂肪酸去饱和酶的进化关系20-231.7 脂肪酸延长酶23-251.7.1 脂肪酸延长酶的分布和种类231.7.2 脂肪酸延长酶的结构特点和作用机理23-241.7.3 脂肪酸延长酶的进化关系24-251.8 微藻脂肪酸代谢研究25-271.9 研究意义和研究内容27-28第二章 光照强度和温度对球等鞭金藻生长及脂肪酸组成和含量的影响28-362.1 引言282.2 材料与方法28-292.2.1 材料282.2.2 藻的培养28-292.2.3 藻的收集292.2.4 脂肪酸提取与甲酯化292.2.5 气相色谱分析292.3 结果与分析29-342.3.1 光照强度对球等鞭金藻生长的影响29-312.3.2 光照强度对球等鞭金藻脂肪酸组成的影响31-322.3.3 温度对球等鞭金藻生长的影响32-332.3.4 温度对球等鞭金藻脂肪酸组成的影响33-342.4 结论和讨论34-36第三章 球等鞭金藻中4-脂肪酸去饱和酶基因的克隆和功能验证36-613.1 引言363.2 实验材料36-383.2.1 菌种和载体363.2.2 酶及试剂363.2.3 培养基和溶液36-373.2.4 仪器设备373.2.5 引物序列37-383.3 实验方法38-503.3.1 藻的培养和收集383.3.2 总DNA 提取38-393.3.3 4-脂肪酸去饱和酶基因核心区克隆39-403.3.4 4-脂肪酸去饱和酶结构基因克隆40-453.3.5 4-脂肪酸去饱和酶结构基因分析453.3.6 4-脂肪酸去饱和酶基因克隆45-473.3.7 4-脂肪酸去饱和酶基因在毕赤酵母中表达47-503.4 结果与分析50-593.4.1 4-脂肪酸去饱和酶结构基因片段克隆和序列分析50-513.4.2 4-脂肪酸去饱和酶结构基因克隆51-523.4.3 4-脂肪酸去饱和酶结构基因序列分析523.4.4 4-脂肪酸去饱和酶基因克隆和序列分析52-573.4.5 4-脂肪酸去饱和酶基因的功能验证57-593.5 结论和讨论59-61第四章 三角褐指藻中5-脂肪酸延长酶基因的克隆及功能验证61-694.1 引言614.2 实验材料61-624.2.1 菌种和载体614.2.2 酶及试剂614.2.3 培养基和溶液61-624.2.4 仪器设备624.2.5 引物序列624.3 实验方法62-634.3.1 三角褐指藻基因组和总cDNA 模板的制备624.3.2 5-脂肪酸延长酶基因的克隆62-634.3.3 5-脂肪酸延长酶基因表达载体的构建与转化634.3.4 5-脂肪酸延长酶基因的功能分析634.4 结果与分析63-674.4.1 基因片段序列分析634.4.2 5-脂肪酸延长酶基因克隆和序列分析63-654.4.3 5-脂肪酸延长酶基因的功能分析65-674.5 结论和讨论67-69第五章 isfad4 和ptfae5 在毕赤酵母GS115 中的共表达69-795.1 前言695.2 实验材料69-705.2.1 菌种和载体695.2.2 酶及试剂69-705.2.3 培养基和溶液705.2.4 仪器设备705.2.5 引物序列705.3 实验方法70-735.3.1 表达载体pAOisfad4 和pAOptfae5 构建725.3.2 共表达载体构建72-735.3.3 共表达载体转化和重组子鉴定735.3.4 共表达酵母功能分析735.4 结果与分析73-775.4.1 表达载体pAOisfad4 和