麻风分枝杆菌的实验室检查

麻风分枝杆菌的实验室检查 艾滋病性病皮肤病防治研究所 一 临床意义 1 麻风病人的诊断 2 麻风病人的疗效观察 3 确定三联化疗治疗方案 4 判断预后 确定复发 5 科研 如鼠足垫接种 药物筛选等 二 取材部位的选择 1 常规查菌部位 眉弓 耳垂 下颌 皮损 2 结节取中央 斑块取边缘交界处 3 不要选择冻疮 溃疡 裂口和结痂部位 麻风面部结节伴巩膜麻风瘤 三 取材方法 1 消毒 2 使局部贫血 3 伤口长约5毫米 深约2 3毫米 4 止血 5 取足够的组织液 不得少于绿豆大小 耳垂取材操作图 组织液涂片操作图 五 染片 1 染液配制 A石碳酸复红液 取碱性复红4G 溶于95 酒精100ML中制成饱和液 再取饱和液10ML与5 石碳酸液90ML混匀即成 B1 的盐酸酒精 取浓盐酸1ML 70 酒精99ML混匀即成 C碱性美兰液 取美兰2G 溶于95 酒精100ML中制成饱和液 再取饱和液30ML加入蒸馏水100ML及10 的氢氧化钾0 1ML混匀即成 2 染色 A固定 以钟摆的速度将涂片通过酒精灯火焰中部3次 B滴入足够的石碳酸复红液 将涂膜全部覆盖 于玻片涂片上 加热使冒气 保持10分钟 C待冷后用水冲去玻片上的染液 1 的盐酸酒精脱色10 30秒 以涂膜呈极淡红色或无色为宜 用水冲去脱色剂 D加美兰液复染半至一分钟 水洗 自然干燥 六 镜检 1 麻风杆菌形态 麻风杆菌一般为短小直棒状或稍有弯曲 长约1 8微米 宽约0 3 0 4微米 没有鞭毛 芽胞和荚膜 麻风杆菌具有抗酸性 即具有抵抗稀酸类脱色剂脱色作用的性质 抗酸性是麻风杆菌的一个重要特征 麻风杆菌革蓝氏染色呈阳性 麻风杆菌另一个重要特点就是多形性 未经治疗的早期病人或复发病人其形态较为完整 治疗后多为断裂或颗粒形 此外麻风杆菌数量较多时往往集簇存在 形成菌团或菌束 抗酸染色镜下的麻风杆菌 抗酸染色镜下的麻风杆菌 2 镜检方法 涂片自然凉干后放入分辨率较高的显微镜上 先用低倍镜对焦 找到涂膜中间部分 然后移去低倍镜 放入镜油 换上油镜 以弓字形方式逐一检视整个涂膜 按雷德里记数标准计算结果 要求 阳性涂膜至少检视50个视野 阴性涂膜至少检视200个视野 3 雷德里计数标准 0 观察100个油镜视野未查见ML 1 观察100个油镜视野查见1 10条ML 2 观察100个油镜视野 平均每10个视野有1 10条ML 3 观察25个油镜视野 平均每视野有1 10条ML 4 观察25个油镜视野 平均每视野有10 100条ML 5 观察25个油镜视野 平均每视野有100 1000条ML 6 观察25个油镜视野 平均每视野有1000或1000条以上ML 平均每视野有100 1000条ML 4 BI指数 细菌指数 计算公式 各涂膜BI总和BI 细菌指数 涂膜数 5 菌团细菌数的估计方法 细菌计数时 经常会遇到菌球或菌团 因此需按照菌团或菌束的大小估计其细菌数 一般大菌球约百条细菌 中菌球约50条细菌 小菌球约20条细菌 能直接计数的尽量直接计数 麻风分枝杆菌形成的菌团 七 报告 1 麻风病细菌学检查需报告检查部位的细菌 数 和雷德里分级数 BI指数 两种结果 2 不要直接报告 查见麻风杆菌 或 未查见麻风杆菌 八 注意事项 1 涂片质量要高 涂片厚薄一致 涂点大小一致