资源描述：: 1、CN200910102667.1-促成中药白芨块茎膨大的栽培技术 2、CN200910102668.6-利用白芨种子快速繁殖小苗的方法 3、CN201110175931.1-一种快速繁殖白芨苗的方法 4、CN201210061532.7-一种金银花与白芨高效套栽方法 5、CN201310255671.8-白芨与紫苏高效套栽方法 6、CN201210100081.3-一种白芨的快速繁殖方法 7、CN201210350910.3-一种白芨种子的育苗方法 8、CN201310164288.1-一种白芨无性驯化栽培加工的方法 9、CN201310193351.4-一种以假鳞茎诱导假鳞茎的白芨高效繁殖方法 10、CN201310282940.X-白芨的侧芽组培繁殖方法 11、CN201310265500.3-一种白芨快速繁殖方法 12、CN201310265696.6-一种白芨与宣木瓜的套栽方法 13、CN201310282938.2-白芨组培苗的驯化栽培方法 14、CN201310282939.7-白芨的种子组培繁殖方法 15、CN201310579744.9-白芨种茎的生产方法 16、CN201310353993.6-一种在仿生态条件下实现白芨有性繁殖育苗的方法 17、CN201310354850.7-利用白芨块茎进行快速繁殖育苗方法 18、CN201310392377.1-一种白芨组培苗驯化栽培基质 19、CN201310498255.0-有机土壤种植白芨的农场 20、CN201310630620.9-白芨种子室外播种繁殖法 21、优良观赏药用地被植物——白芨组织培养及快速繁殖研究 22、白芨高产栽培技术研究 23、白芨愈伤组织诱导、增殖与分化研究 24、元江县野生白芨人工驯化栽培技术初探 25、白芨组培快繁育苗技术研究 26、白芨高产栽培技术 27、白芨的栽培管理及应用 28、白芨无菌播种育苗技术 29、白芨组织培养与快速繁殖技术研究 30、不同微肥施用量对白芨产量及品质的影响 31、白芨的生物特性及栽培技术 32、白芨药用及其栽培技术 33、黄花白芨组培快繁技术 34、野生白芨组培快繁技术研究 35、贮藏温度对白芨种子寿命的影响 36、CN201310632169.4-一种白芨的组织培养繁育方法 37、CN201410074803.1-利用白芨块茎进行快速繁殖育苗方法 38、CN201410263929.3-一种提高白芨组培苗成活率的炼苗基质 39、CN201410265969.1-白芨与吴茱萸间作种植方法 40、CN201410266163.4-一种无公害白芨栽培方法 41、CN201410347417.5-一种白芨高产栽培的方法 42、CN201410364786.5-白芨直播育苗方法 43、CN201410364787.X-松林套种中药材白芨复合培育方法 44、CN201410436289.1-白芨与萝卜的人工间作方法 45、CN201410489589.6-一种快速繁殖白芨试管苗的方法 46、CN201410607302.5-用保鲜盒培养白芨种子苗 47、CN201410630175.0-一种白芨高产栽培技术 48、CN201410666249.6-一种白芨的规模化高产栽培方法 49、CN201410806405.4-白芨的有性繁殖方法 50、白芨的生物特性及栽培技术 51、白芨的无菌萌发与组织培养 52、白芨种子的高效萌发及其无性繁殖体系的构建 53、不同除草期对白芨产量及品质的影响 54、不同培养条件对白芨种子萌发效应的研究 55、贵州道地药材白芨工厂化育苗技术 56、黄花白芨组培快繁技术 57、白芨高产栽培技术研究 58、CN201410084947.5-一种林下种植白芨的方法 59、CN201510253683.6-一种白芨组培快繁培养基 60、CN201410115705.8-一种白芨高产栽培方法 61、CN201510488173.7-野生白芨品种的训化方法 62、CN201510617431.7-一种无公害白芨的高产栽培方法 63、CN201510632851.2-一种白芨组培苗的驯化移栽方法 64、CN201510528672.4-一种人工催芽方法及白芨育苗方法 65、CN201510604885.0-白芨快繁和高效栽培方法 66、CN201510594125.6-一种高效繁殖白芨组培苗的方法及白芨的种植方法 67、CN201510666090.2-利用白芨块茎进行分割繁殖育苗方法 68、CN201510633324.3-一种白芨的栽培方法 69、CN201510662836.2-利用白芨块茎进行快速繁殖育苗方法 70、CN201410376264.7-白芨的规范化种植方法 71、CN201510809131.9-一种白芨种植方法 72、CN201510922087.2-一种基于液体培养基的白芨种苗生产方法 73、CN201510772725.7-适合白芨栽培的生物有机肥料 74、CN201510759434.4-一种白芨种子的液体高效萌发诱导液及快繁方法 75、CN201510812179.5-一种白芨高产种植方法 76、CN201510765121.X-白芨专用有机生物菌肥产品 77、CN201510942248.4-一种白芨裸种消毒方法 78、CN201510942244.6-一种白芨苗驯化方法 79、CN201510940177.4-一种适合白芨生长的土壤改良剂及其制备方法 80、CN201510917278.X-一种白芨的种植技术 81、CN201410623308.1-一种白芨的高效栽培技术 82、CN201510973427.4-一种快速生产白芨试管苗的方法 83、CN201610030269.3-一种白芨共生菌的培育方法 84、CN201610065099.2-白芨种子直播自然繁殖育苗方法 85、CN201610265364.1-一种黄精白芨的套种方法 86、CN201610165923.1-一种白芨有性繁殖育苗方法 87、CN201610165979.7-一种白芨的种植方法 88、CN201610175678.2-人工干预气候白芨一年两季种植技术 89、CN201610165960.2-一种白芨的物理除草方法 90、CN201610165958.5-一种白芨种茎的生产方法 91、CN201610265386.8-一种白芨高产种植方法 92、CN201610165994.1-一种白芨栽培方法

内容简介：: 云南师范大学学报( 自然科学版) 2 0 1 4年 7月 3 4 卷 4期 ( Vo 1 3 4 No 4 ) J o u r n a l o f Yu n n a n No r ma l Un i v e r s i t y DO I ： 1 0 7 6 9 9 j y n n u n s 一 2 0 1 4 0 5 9 白芨种子的高效萌发及其无性繁殖体系的构建王楷，李碉，张云峰，田宝强，杨秀梅，普家宁，严胜柒 ( 1 云南师范大学生命科学学院，云南昆明 6 5 0 5 0 0 ； 2 教育部生物能源持续开发利用工程中心，云南昆明 6 5 0 5 0 0 2 ； 3 云南师范大学、台湾新竹清华大学联合实验室，云南昆明 6 5 0 5 0 0 ； 4 昭通市农业技术推广研究所，云南昭通 6 5 7 0 0 0 ) 摘要：为实现白芨的快速繁殖，以白芨的成熟蒴果为材料，在 MS 、 1 2 MS 、 KC、 vw 添加 6 - B A 及椰汁乳的培养基上进行无菌播种种子萌发后形成的原球茎接种到不同培养基上进行扩增繁殖，建立白芨无性繁殖体系结果表明：种子萌发最佳培养基为液体培养基 1 2 MS +6 - B A 1 0 mgI 一，添加 1 O 的椰汁乳能有效提高萌发率，促进原球茎的生长；无性繁殖最佳培养基为 MS+6 - B A 1 0 mgI +NA A 0 2 mg L 此无性繁殖体系的建立有助于白芨的相关研究和产业化关键词：白芨；无菌播种；原球茎；无性繁殖中图分类号： Q9 4 5 文献标志码： A 文章编号： l O O 7 9 7 9 3 ( 2 o 1 4 ) 0 4 0 0 7 1 0 8 白芨 ( B l e t i l l a s t r i a t a ( Th u n b ) Re i c h b f ) 为兰科白芨属的多年生草本植物，别名紫兰、紫蕙、百笠等全世界白芨属植物有 6种，我国有 4 种，分别为白芨、小白芨 ( B f o mo a n a( Ha y a t a ) S c h l t r ) 、黄花白芨 ( B o c h r a c e a S c h h r ) 及华白芨( B s n e n s i s( R o l f e ) S c h l t r ) 白芨假鳞茎为我国传统中药，含有近 5 O种化合物L ，具有收敛、补血、止血、消肿等多种功能 3 现代药理研究表明白芨可使凝血酶生成时间缩短，能抑制纤维蛋白酶的活性，使细胞快速凝聚形成血栓而止血l 5 ，具有保护胃黏膜引、抗真菌及抗癌。等作用此外，白芨胶还可用作乳化剂、悬浮剂，代替西黄蓍胶和阿拉伯胶，在医药、化工、食品等方面的应用前景十分广阔_ g J 由于野生白芨遭到过度采挖，加上其野生生境的破坏，导致我国野生白芨资源急剧减少，濒临灭绝，已被国家列为珍稀濒危的保护植物_ 1 白芨种子非常细小且无胚乳，自然状况下萌发率极低，并且生长缓慢传统栽培主要依赖分株繁殖l_ 1 ，而分株繁殖周期长、繁殖效率低、耗种量大，很难满足规模栽培的需要自 Ku n d s o n首次进行兰科植物种子的无菌萌发以来，无菌萌发已成为兰科植物种质保存及规模繁殖的重要手段兰科种子的萌发率依赖于培养基的种类、培养基中的添加物及外源激素添加椰汁乳、香蕉汁、菠萝汁、马铃薯汁等能促进种子的萌发，其中椰汁乳被认为是最为有效的添加物_ 1 引目前，国内对白芨无菌播种已有诸多的报道 1 3 - 1 4 ，并对白芨种子的无菌萌发过程 1 、白芨种子染菌萌发过程的细胞超微结构变化l l 进行了研究，这些研究对白芨种质资源保护及其繁殖具有较大的促进作用，但相关报道中白芨种子的萌发率都较低，而且萌发周期较长本研究拟以液体培养，以期建立白芨种子的高效无菌萌发体系及其无性繁殖体系，为实现白芨的快速繁殖和工厂化生产提供基础数据 1 材料与方法 1 1 材料试验材料为成熟未开裂的野生白芨蒴果，蒴果于 2 0 1 3年 7月采自云南省昭通市威信县瓦石 * 收稿日期： 2 0 1 4 0 4 2 4 基金项目：国家自然科学基金资助项目( 3 1 0 6 O 1 5 O ， 3 1 3 6 2 3 3 4 ) ；云南科技厅社会发展科技计划基础研究面上项目( 2 0 0 9 C D 0 5 2 ) 和云南省应用基础研究计划资助项目( 2 0 1 1 F A0 1 6 ) 作者简介：王楷 ( 1 9 9 1 ) ，男，云南昭通人，主要从事植物资源方面研究通信作者：张云峰，教授，主要从事植物遗传及植物资源方面研究E ma i l ： z h y u n f e n g 0 0 1 a l i y u n c o m 7 2 云南师范大学学报 ( 自然科学版) 第 3 4卷村后山( 北纬 2 7 。 4 9 7 8 5 ” ，东经 1 0 4 。 4 6 5 7 8 1 ” ) 该地区干湿季分明，日温差小，年温差大，年平均气温为 1 2 4 冬季雨量少气温低，平均温度为 4 C，最低温度为一1 0；夏季雨量大气温高，平均温度为 2 1 6。 C，最高温度 3 1 4 1 2 方法 1 2 1 无菌播种选取成熟未裂蒴果用流水洗净，在超净台内进行表面消毒，消毒过程为： 7 5 的酒精表面消毒 3 0 S ，再用 0 1 5 的升汞( Hg C 1 2 ) 消毒 1 0 mi n ，无菌水冲洗 5 6次，用无菌滤纸吸干表面水分在无菌条件下，用手术刀纵向剖开蒴果，用镊子夹取蒴果外壳，将种子均匀播种于培养基放置种子后先将培养基置于暗条件下培养，种子萌发后再移至光照条件下基本培养基采用 MS 、 1 2 MS的大量元素及全量的微量元素 ” 、 KC E 和 V j ，每类基本培养基又设置 8组，如表 1 所有培养基均添加 3 的蔗糖，固体培养基添加 0 6 0 的琼脂粉灭菌前将培养基的 p H值调整到 5 8 ，每个处理重复 8 次种子培养 3 0 d后，观察基本培养基、培养基类型、添加物及 6 B A浓度对种子萌发率的影响在低倍倒置显微镜下以每个处理统计 2 0 0粒种子的萌发计算，统计重复 5次表 1 种子萌发培养基 Ta b l e 1 M e d i u m s u s e d f o r s e e d g e r m i n a t i o n i n Bl e t i l l a s t r i at a 为检验椰子汁浓度对白芨种子萌发的影响，作了补充实验：以 1 2 MS为基本培养基，设置 5 个组，每组 8瓶，分别添加 0 、 1 0 、 2 0 9 6 、 3 0 、 4 O 的椰汁乳所有培养基 &B A 浓度为 1 0 mg L ，均添加 3 的蔗糖，灭菌前将 p H 值调整至 5 8 培养 3 0 d后观察各组的种子萌发率，并测量各组的原球茎鲜重及原球茎长度原球茎鲜重( M) 测量方法：种子放置培养基后，立即称量并记录为 M ， 3 0 d后用同样的方法称量并记录为 M。，则 M M。一M 每个处理记录 5瓶，求平均数 1 2 2 测定发育后种子活力种子播种培养 3 0 d后，用 0 1 的 T TC ( 2 ， 3 ， 5 一Tr i p h e n y l t e t r a z o l i u m c h l o r i d e ，氯化苯基四氮唑 ) 溶液测定种子活力，染色时间为 0 5 h ， 5次重复着色后，在显微镜下观察种子染色情况，随机选取 3个视野，分别计算每个视野的种子总数、有活力种子数和败育种子数凡是胚染成有光泽的鲜红色，为有生活力的种子；凡是完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色，为败育或无活力种子数 1 2 3 无性繁殖体系构建种子萌发形成原球茎后，将原球茎转接到无性繁殖培养基上进行培养，培养基以全量 MS为培养基，添加 1 0 椰汁乳、 3 蔗糖及不同激素 6 一 B A ( 6 - Be n z y l a mi n o p u r i n e )和 NAA ( 1 - Na p h t h a l e n e a c e t i c a c i d ) 的组合配比 ( 表 2 ) ， p H 调至 5 8 每个处理接种 1 O瓶培养温度( 2 6 2 ) 。 C，光照强度 2 2 0 0 2 6 0 0 l x ，光照时间 1 0 h d 培养 3 0 d后，观察原球茎的生长状况和调查原球茎继代增殖数情况，增殖倍数以继代培养 3 5 d的原球茎突起数与继代当天的原球茎数比值表 2 扩繁培养基 Ta b l e 2 Me d i u m u s e d f o r p r o p a g a t i o n n Bl p t i l l n t r i at q 6 B A NAA ( mg I ) ( mg I ) A1 ( O2 )A2 ( O 5 ) A ( O 8 ) 7 4 云南师范大学学报( 自然科学版) 第 3 4卷皂暑罟量 1 2MS MS KC VW 图中数值为 5次重复的平均数值，不同字母表示在 p O O 5 时存在显著性差异图 2 培养基对白芨种子萌发率的影响 Fi g 2 Ef f e c t o f v a r i o u s c u l t u r e me d i u m o n s e e d g e r m i n a t i o n i n Bl e t i l l a s t r i a t a 2 3 培养基类型及添加物对萌发率的影响为确定培养基类型、椰汁乳对白芨种子萌发率的影响，实验对 1 2 MS大组进行了仔细观察结果表明，白芨种子在固体培养上的萌发较液体培养慢了 4 6 d ，且转入光照培养后，生长较慢，绿色较淡固体培养基的萌发率在 ( 4 1 9 3 2 4 1 ) ( 5 9 9 6 6 1 9 ) 间，而液体培养基的萌发率在( 4 7 9 3 4 7 9 ) ( 8 2 4 7 - + - 8 4 5 ) 间 ( 图 3 ) ，表明培养基的类型对白芨种子萌发率的影响较大在添加 1 O 9 6 椰汁乳条件下， 6 - B A浓度分别为 0 5 、 1 0 、 1 5时，固体培养中白芨种子的萌发率较液体培养中的分别下降 1 O 8 7 、 2 2 5 1 、 1 3 7 3 ，在 p 0 0 5条件下呈显著性差异性( 图 3 ) ，表明在有椰汁乳的情况下，液体培养中的萌发率大大高于固体培养在 6 - B A 浓度为 1 0时，无椰汁乳的固体培养、液体培养中白芨种子的萌发率分别为 3 9 1 6 、 4 7 9 3 ，较添加椰汁乳的培养基分别降低了 2 0 8 0 、 3 4 5 4 ，在 p O 0 5 条件下，白芨种子的萌发率呈显著性差异性 ( 图 3 ) ，表明培养基中添加椰汁乳可有效提高白芨种子的萌发率种子培养 3 0 d后的 T C C 染色，也发现液体中胚存活率较固体中的胚胎存活率高( 图 4 ) 宝皇吕图中所有数值为 5次重复的平均数值 a 、 b为同种类型培养基，在 p 0 0 5存在显著性差异 C为在等量 6 - B A时，两组间存在显著性差异图 3 培养基类型及添加物对萌发率的影响 Fi g 3 Th e e f f e c t o f c u l t u r e me d i u m s t a t u s a n d Or g a n i c a me n d me n t s o n s e e d g e r mi n a t i on r at e i n Bl e t i l l a s t r i at a 毫皇；啦 B A O 5 B 1 0 B A1 5 B A1 0( n o c w ) 图中所有数值为 5次重复的平均数值 a ， b分别为在 p O 0 5 、 p 0 0 1 下存在显著性差异性 C 为在等量 6 - B A 时，两组间存在显著性差异 S 、 L分别为固体培养基、液体培养基图 4 培养 3 O天后固体和液体培养基中种子活力的比较 Fi g 4 Th e c o mp a r i s o n s e e d s v i t a l i t y a f t e r 3 0 d a y s c u l t u r e i n s o l i d a n d l i q u i d me d i u m i n t e t i l l a s t r i at a 2 4 6 一 B A浓度对萌发率的影响为确定白芨种子萌发的最适 6 - B A浓度，实验对 1 2 MS大组进行了进一步分析有椰汁乳条件下，当 6 一 B A浓度分别为 0 5 、 1 0 、 1 5时，在固体、液体培养基中白芨种子的萌发率分别为： ( 4 1 9 3 2 4 1 ) oA 、 ( 5 9 9 6 6 1 9 ) 、 ( 4 9 2 0 4 5 1 ) V oo ； ( 5 2 7 1 4 4 4 ) 、 ( 8 2 4 2 8 4 5 ) 、第 4 期王楷，等：白芨种子的高效萌发及其无性繁殖体系的构建 7 5 ( 6 2 9 3 3 8 0 ) 从中可以看出，液体培养基中的种子萌发率都较固体的高，提高幅度分别为 1 0 7 8 、 2 2 5 1 、 1 3 7 2 ，其中 6 - B A 浓度为 1 0时的提高幅度最大( 图 3 ) ，即为白芨种子萌发的最适浓度如不加椰汁乳，在 6 - B A浓度为 1 0 时，固体、液体培养中的白芨萌发率分别为( 3 9 1 6 3 4 8 ) 、 ( 4 7 9 3 4 7 9 ) ，提高幅度仅为 8 7 7 表明 6 - B A对白芨种子萌发的影响在固体和液体中是一致的，但这种影响与椰汁乳的添加有关，添加椰汁乳可促进 6 - B A 对白芨种子萌发的影响， 6 - B A及椰汁乳对白芨种子萌发的促进作用间存在互作 2 5 椰汁乳浓度对白芨种子萌发率及原球茎生长的影响为研究 6 - B A、椰汁乳对促进白芨种子萌发的互作作用，在白芨种子萌发的实验中，补充了液体培养基中不同椰汁乳浓度对白芨种子萌发率、原球茎鲜重、原球茎长度的影响实验在液体培养基中分别添加 0 、 1 0 、 2 O 、 3 0 、 4 0 的白芨种子萌发率分别为 ( 4 7 9 6 4 7 9 ) 、( 8 2 4 7 8 4 5 ) 、 ( 9 1 0 2 4 3 5 ) 、( 8 8 9 7 5 4 0 ) 、 ( 7 7 6 1 4 5 9 ) 在 p O 0 5条件下，除未添加椰汁乳培养基外，椰汁乳浓度从 1 O 4 0 间没有显著性差异表明椰汁乳对白芨种子萌发不存在剂量影响 ( 图 5 ) ，但对白芨种子萌发后所形成的原球茎鲜重及原球茎长度存在明显的影响( 图 6 ，图 7 ) 当椰汁乳浓度为 0 、 1 0 、 2 O 、 3 0 、 4 O 时，原球茎的鲜重分别为 ( 0 7 2 0 0 6 ) mg 、 ( 1 2 1 0 1 0) mg、 ( 1 4 5 0 0 9 )mg、( 1 9 3 0 1 3 ) mg及( 1 5 6 O 0 6 ) rag ；而原球茎长度分别为 ( 1 6 7 0 0 8 ) mm、 ( 2 8 6 0 1 7 ) 1T i m、 ( 3 3 3 0 3 6 ) mm、 ( 4 2 9 0 3 4 ) i n to 、 ( 3 2 9 0 2 9 ) mm 种子萌发率最高的椰汁乳添加浓度为 2 0 ，而原球茎鲜重及原球茎长度最高的椰汁乳添加浓度是 3 0 ，表明椰汁乳对白芨种子萌发及促进原球茎生长的浓度要求是不一样的 CW0 C W I O CW2 0 C W3 0 C Wd O 图中所有数值为 5次重复的平均数值不同字母表示种子萌发率在声O 0 5 下有差异图 5 椰汁乳浓度对白芨种子萌发率的影响 F i g 5 Th e e f f e c t o f c o c o n u t wa t e r c o n c e n t r a t i o n o n s e e d g e r mi n a t i o n i n B l e t i l l a s t r i a t a C W O CW 1 O CW2 0 CW3 0 CW4 0 图中所有数值为 5次重复的平均数值不同字母表示原球茎鲜重在 0 0 5下有差异图 6 椰子汁浓度对原球茎鲜重的影响 Fi g 6 Th e e f f e c t o f c o c o n u t wa t e r c o n c e n t r a t i o n o n p r o t o c o r m f r e s h we i g h t 图中所有数值为 5次重复的平均数值不同字母表示原球茎长度在 p O 0 5下有差异图 7 椰汁乳浓度对原球茎长度的影响 F i g 7 Th e e f f e c t o f c o c o n u t wa t e r c o n c e n t r a t i o n o n L e n g t h o f p r o t o c o r m 2 6 无性繁殖系的构建将原球茎转入扩繁培养基培养 3 5 d后，观察冰盘 0 粤I I吕宕赛 2 2 l 0 O 【吕。宴吕岛 I I 7 6 云南师范大学学报( 自然科学版) 第 3 4卷到各植物激素配比培养基中原球茎的生长状况如表 3 ，原球茎继代增殖数如表 4 综合表 3 、 4 ， A B z 培养基中原球茎颗粒饱满、呈黄绿色，且无分化现象、增殖最多，增殖倍数达到 5 2 7 5 ，为最高增殖倍数结果表明 A。 B 培养基中原球茎的生长和增殖效果最好，即 MS+ 6 一 B A 1 0 mg I + NAA 0 2 mgI 为最佳扩增繁殖培养基从中也发现原球茎增殖较少的激素组合，原球茎会很快萌发形成幼苗因此，在无性系培养中，如将激素设定为6 - B A 1 0 mg I 、NAA 0 2 mg I ，可大量扩增原球茎；如将激素调整为 6 - B A 1 0 mg I 、 NAA 0 8 mg L，可获得白芨幼苗表 3 不同植物激素配比对原球茎生长状况的影响 Ta b l e 3 Ef f e c t s o f d i f f e r e n t p l a n t h o r mo n e s o n t h e p r o t o c o r m g r o wt h i n Hl e t i l l a s t r i a t a 表 4 不同植物激素配比对原球茎继代增殖数的影响 Ta b l e 4 Ef f e c t s o f d i f f e r e n t p l a n t h o r mo n e s o n p r o t o c o r m g r o wt h a n d p r o p a g a t i o n i n t3 l e t i l l a s t r i a t a 3 讨论 MS是一种高盐培养基，在白芨种子萌发时会产生一定毒害作用，从而降低白芨种子萌发率选用 1 2 MS作为种子萌发的基本培养基，其盐分较低，比较温和，有利于萌发在白芨进行丛芽增殖的时候，富含更多盐分的 MS则更加适合，因为能提供更多的养分白芨的蒴果种子在同体培养基上的萌发率均达 3 7 5 3 以 h，少数种子可能因为在培养基中吸收水分不足，而未能萌发液体培养基中种子萌发率均达 4 8 2 5 以 L，部分接近 7 5 4 2 ，少数可能因为胚的结构不完整而未能萌发，其余均能萌发张建霞。等发现蒴果的胚龄越长，白芨种子的有胚率越高本实验所用的种子为已经成熟但未开裂的白芨蒴果，并且是野外采集的，显然有胚率较高，故萌发率高将古 l 体和液体培养基相比较，液体培养基中种子能更充分的吸收水分和养分，故萌发率要大大高于固体培养基第 4 期王楷，等：白芨种子的高效萌发及其无性繁殖体系的构建 7 7 在无菌播种实验中，培养基均添加了单一激素 6 - B A，并设计了浓度梯度( 0 5 、 1 0 、 1 5 ) ，结果表明：无论固体培养基还是液体培养基，当 6 - B A 浓度为 1 mg I 时种子萌发率最高，这与袁宁_ 2 、叶静 2 等的结果相似，说明不同植物激素浓度及配比与原球茎的增殖有很大关系，原球茎的继代增殖需要浓度适宜的植物生长素和细胞分裂素共同作用_ 2 引此外，添加椰汁乳也能提高种子萌发率，并能促进原球茎的形成不同浓度的椰汁乳添加到了培养基，发现不同浓度的椰汁乳不仅可促进白芨种子的萌发，还可提早萌发时间，但椰汁乳浓度对白芨种子萌发率的影响没有显著性差异 ( p O 0 5 ) 此外还发现椰汁乳可提高白芨原球茎的鲜重及长度，其中椰汁乳添加浓度为 3 0 时原球茎鲜重及长度最为明显 ( p O 0 5 ) ( 图 6 、图 7 ) 在培养的初期，会发现白芨种子缓慢膨胀，在显微镜下可观察到种子内包含有一椭圆胚，该阶段大约维持 1 2 周后会转化为球形胚，随后球形胚逐步变大突破种皮，仔细观察发现球形胚的上部份细胞分裂旺盛，原球茎变长并在其上部发育形成乳头状的叶源基 ( p r o p h y l 1 ) 组织保护原球茎上部此时的原球茎可肉眼观察到为小的叶色繁殖体 ( g r e e n p r o p a g u l e ) ， 1 5天后可看到小叶的形成在添加椰汁乳无激素的 MS中，白芨幼苗在 5 0天时达到 9 2 1 5 2 mm，但随后幼苗不生根，也不继续生长而在添加激动素( 1 4 mg g 6 - B A 或 K t ) 或与0 2 1 0 mg g N AA组合会进一步促进幼苗的生长其中 6 - B A的效果更为明显，但在幼苗的叶片数目上未显示出显著性差异在原球茎扩增繁殖实验中，设计两个浓度的 6 一 B A( 0 5 、 1 0 ) 和三个浓度的 NAA ( 0 2 、 0 5 、 0 8 ) 进行组合配比，经过实验选出最适宜原球茎生长繁殖的组合本实验结果表明当 6 - B A浓度为 1 0 mg L、 NAA浓度为 0 2 mg L 时原球茎生长繁殖效果最好，即 A B 组合为最佳扩增繁殖培养基，而 A。 B 组合为生长理想培养基参考文献： E 1 彭丽丽，刘祥东，刘华，等白芨的组培快繁( 简报) E J 中国野生植物资源， 2 0 0 4 ， 2 3 ( 5 ) ： 6 5 2 3 罗新根，刘文庸，张卫东，等中药白及的化学成分及临床研究进展 J 药学实践杂志， 1 9 9 9 ， 1 7 ( 6 ) ： 359 3 64 3 国家药典委员会中华人民共和国药典 ( 一部) M 北京：化学工业出版社， 2 0 0 5 E 4 中国植物志编委会中国植物志( 第十八卷) M 北京：科学出版社， 1 9 9 9 E s 焦一呜，王放论白及的致瘀功用 J 时珍同医国药， 2 0 0 1 ， 1 2 ( 5 ) ： 4 5 8 E 6 耿志国，郑世玲，王遵琼白芨对盐酸引起的大鼠胃粘膜损伤的保护作用 E J 中草药， 1 9 9 0 ， 2 1 ( 2 ) ： 24 26 7 S HUZ O T， MAS AE Y， KE I KO I An t i mi c r o b i a l a g e n t s f r o m B l e t i l l a s t r i a t a J P h y t o c h e mi s t r y ， 1 9 8 3 ， 2 2 ( 4 ) ： 1 0 1 1 1 0 1 5 8 周至明，黄程生，彭丽丽，等白及人工种植初步研究E J 中药材， 2 0 0 6 ， 2 9 ( 1 ) ： 7 - 8 9 刘光斌，黄忠，黄长干，等天然植物白芨胶的功能及在化妆品中的运用口日用化学品科学， 2 0 0 5 ， 2 8 ( 8 )： 2 2 2 4 1 O 张亦诚白芨的生物特性及栽培技术 J 农业科技与信息， 2 0 0 7( 1 0 ) ： 4 5 1 1 袁宁白芨组织培养技术体系研究 D 成都：西南交通大学， 2 0 0 9 1 2 曾宋君，黄向力，陈之林，等白及的无菌播种和组织培养研究_ J 中药材， 2 0 0 4 ， 2 7 ( 9 ) ： 6 2 5 6 2 6 1 3 张燕，黎斌，李思锋不同培养基上白芨的种子萌发与幼苗形态发生 J 西北植物学报， 2 0 0 9 ， 2 9 ( 8 ) ： 15 8 4 1 58 9 1 4 喻苏琴，罗文秀，张寿文不同培养条件对白芨种子萌发效应的研究 J 安徽农业科学， 2 0 1 0 ， 3 8 ( 1 6 ) ： 8 421 8 42 2 1 5 张燕，黎斌，李汝娟，等白芨种子的无菌萌发过程观察和组培快繁研究 J 北方园艺， 2 0 1 3( 3 ) ： 15 8 1 6 O 1 6 郭顺星，徐锦堂白芨种子染菌萌发过程中细胞超微结构变化的研究 J 植物学报， 1 9 9 0 ， 3 2 ( 8 ) ： 59 4 5 9 8 1 7 MUR AS HI G E T， S KOOG F A r e v i s e d me d i u m f o r r a p i d g r o wt h a n d b i o a s s a y s wi t h t o b a c c o t i s s u e c u l t u r e J P h y s i o l P l a n t ， 1 9 6 2 ， 1 5 ： 4 7 3 4 9 7 1 8 KNUD S ON I A n e w n u t r i e n t s o l u t i o n f o r g e r mi n a t i o n o f o r c h i d s e e d s E J Am Or c h i d SOc B u l 1 1 9 46， 5： 2 1 4 21 7 E l 9 VAC I N E。 wE N T F w S o me p H c h a n g e s i n n u t r i e n t s o l u t i o n s J B o t Ga z ， 1 9 4 9 ， 1 1 0 ： 6 0 5 6 1 3 2 O 张建霞，付志惠，李洪林，等白芨胚发育与种子萌发的关系I J 亚热带植物科学， 2 0 0 5 ， 3 4 ( 4 ) ： 3 2 3 5 2 1 袁宁，何俊蓉，何锐，等白芨组培快繁育苗技术研 7 8 云南师范大学学报 ( 自然科学版) 第 3 4 卷究_ J 西南农业学报， 2 0 0 9 ， 2 2 ( 3 ) ： 7 8 1 7 8 5 2 2 叶静，郑晓君，管常东，等白芨的无菌萌发与组织培养 J 云南大学学报：自然科学版， 2 0 1 0 ， S 1 ： 4 22 42 5 2 3 翟月婷霍山石斛试管丛生芽及原球茎继代增殖措施的研究 D 合肥：安徽农业大学， 2 0 1 1 Ef f i c i e nt Ge r m i n a t i o n a nd Es t a bl i s hme nt o f As e x u a l Pr o pa g a t i o n S y s t e m i n v i t r o i n Bl e t i l l a St r i a t a ( Th u n b ) Re i c h b F W ANG Kai ， LI Yu e ，ZHANG Yu n f e n g ，，，TI AN Ba o qi a n g ， YANG Xi u mei PU Ji a - l i n g YAN Sh en g qi ， ( 1 S c h o o l o f Li f e S c i e n c e s ， Yu n n a n No r ma l Un i v e r s i t y， Ku n mi n g 6 5 0 5 0 0 ， C h i n a ； 2 S u s t a i n a b l e Ex p l o i t a t i o n En g i n e e r i n g Ce n t e r o f Bi o l o g i c a l En e r g y o f Ed u c a t i o n Mi n i s t r y， Yu n n a n No r ma l Un i v e r s i t y ， Ku n mi n g 6 5 0 5 0 0， Ch i n a ； 3 J o i n t La b o r a t o r y o f Yu n n a n No r ma l Un i v e r s i t y a n d Na t i o n a l Ts i n g h u a Un i v e r s i t y ， Ku n mi n g 6 5 0 5 0 0， Ch i n a ； 4 Ag r i c u l t u r a l Te c h n o l o g y Ex t e n s i o n I n s t i t u t e o f Z h a o t o n g ， Z h a o t o n g 6 5 7 0 0 0， Ch i n a ) Ab s t r a c t ：Th e ma t u r e c a p s u l e o f B l e t i l l a s t r i a t a wa s u s e d a s ma t e r i a l f o r a s y mb i o t i c g e r mi n a t i o n a n d r a p i d p r o p a g a t i o n i n t h i s e x p e r i me n t Th e s e e d s wa s s e e d i n g a t d i f f e r e n t c u l t u r e me d i u m wi t h MS 、 1 2 MS、 KC、 VW a s b a s a l me d i u m a d d

温馨提示:
1: 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
2: 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
3.本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

人人文库网所有资源均是用户自行上传分享，仅供网友学习交流，未经上传用户书面授权，请勿作他用。