资源描述：: 1、CN200910102667.1-促成中药白芨块茎膨大的栽培技术 2、CN200910102668.6-利用白芨种子快速繁殖小苗的方法 3、CN201110175931.1-一种快速繁殖白芨苗的方法 4、CN201210061532.7-一种金银花与白芨高效套栽方法 5、CN201310255671.8-白芨与紫苏高效套栽方法 6、CN201210100081.3-一种白芨的快速繁殖方法 7、CN201210350910.3-一种白芨种子的育苗方法 8、CN201310164288.1-一种白芨无性驯化栽培加工的方法 9、CN201310193351.4-一种以假鳞茎诱导假鳞茎的白芨高效繁殖方法 10、CN201310282940.X-白芨的侧芽组培繁殖方法 11、CN201310265500.3-一种白芨快速繁殖方法 12、CN201310265696.6-一种白芨与宣木瓜的套栽方法 13、CN201310282938.2-白芨组培苗的驯化栽培方法 14、CN201310282939.7-白芨的种子组培繁殖方法 15、CN201310579744.9-白芨种茎的生产方法 16、CN201310353993.6-一种在仿生态条件下实现白芨有性繁殖育苗的方法 17、CN201310354850.7-利用白芨块茎进行快速繁殖育苗方法 18、CN201310392377.1-一种白芨组培苗驯化栽培基质 19、CN201310498255.0-有机土壤种植白芨的农场 20、CN201310630620.9-白芨种子室外播种繁殖法 21、优良观赏药用地被植物——白芨组织培养及快速繁殖研究 22、白芨高产栽培技术研究 23、白芨愈伤组织诱导、增殖与分化研究 24、元江县野生白芨人工驯化栽培技术初探 25、白芨组培快繁育苗技术研究 26、白芨高产栽培技术 27、白芨的栽培管理及应用 28、白芨无菌播种育苗技术 29、白芨组织培养与快速繁殖技术研究 30、不同微肥施用量对白芨产量及品质的影响 31、白芨的生物特性及栽培技术 32、白芨药用及其栽培技术 33、黄花白芨组培快繁技术 34、野生白芨组培快繁技术研究 35、贮藏温度对白芨种子寿命的影响 36、CN201310632169.4-一种白芨的组织培养繁育方法 37、CN201410074803.1-利用白芨块茎进行快速繁殖育苗方法 38、CN201410263929.3-一种提高白芨组培苗成活率的炼苗基质 39、CN201410265969.1-白芨与吴茱萸间作种植方法 40、CN201410266163.4-一种无公害白芨栽培方法 41、CN201410347417.5-一种白芨高产栽培的方法 42、CN201410364786.5-白芨直播育苗方法 43、CN201410364787.X-松林套种中药材白芨复合培育方法 44、CN201410436289.1-白芨与萝卜的人工间作方法 45、CN201410489589.6-一种快速繁殖白芨试管苗的方法 46、CN201410607302.5-用保鲜盒培养白芨种子苗 47、CN201410630175.0-一种白芨高产栽培技术 48、CN201410666249.6-一种白芨的规模化高产栽培方法 49、CN201410806405.4-白芨的有性繁殖方法 50、白芨的生物特性及栽培技术 51、白芨的无菌萌发与组织培养 52、白芨种子的高效萌发及其无性繁殖体系的构建 53、不同除草期对白芨产量及品质的影响 54、不同培养条件对白芨种子萌发效应的研究 55、贵州道地药材白芨工厂化育苗技术 56、黄花白芨组培快繁技术 57、白芨高产栽培技术研究 58、CN201410084947.5-一种林下种植白芨的方法 59、CN201510253683.6-一种白芨组培快繁培养基 60、CN201410115705.8-一种白芨高产栽培方法 61、CN201510488173.7-野生白芨品种的训化方法 62、CN201510617431.7-一种无公害白芨的高产栽培方法 63、CN201510632851.2-一种白芨组培苗的驯化移栽方法 64、CN201510528672.4-一种人工催芽方法及白芨育苗方法 65、CN201510604885.0-白芨快繁和高效栽培方法 66、CN201510594125.6-一种高效繁殖白芨组培苗的方法及白芨的种植方法 67、CN201510666090.2-利用白芨块茎进行分割繁殖育苗方法 68、CN201510633324.3-一种白芨的栽培方法 69、CN201510662836.2-利用白芨块茎进行快速繁殖育苗方法 70、CN201410376264.7-白芨的规范化种植方法 71、CN201510809131.9-一种白芨种植方法 72、CN201510922087.2-一种基于液体培养基的白芨种苗生产方法 73、CN201510772725.7-适合白芨栽培的生物有机肥料 74、CN201510759434.4-一种白芨种子的液体高效萌发诱导液及快繁方法 75、CN201510812179.5-一种白芨高产种植方法 76、CN201510765121.X-白芨专用有机生物菌肥产品 77、CN201510942248.4-一种白芨裸种消毒方法 78、CN201510942244.6-一种白芨苗驯化方法 79、CN201510940177.4-一种适合白芨生长的土壤改良剂及其制备方法 80、CN201510917278.X-一种白芨的种植技术 81、CN201410623308.1-一种白芨的高效栽培技术 82、CN201510973427.4-一种快速生产白芨试管苗的方法 83、CN201610030269.3-一种白芨共生菌的培育方法 84、CN201610065099.2-白芨种子直播自然繁殖育苗方法 85、CN201610265364.1-一种黄精白芨的套种方法 86、CN201610165923.1-一种白芨有性繁殖育苗方法 87、CN201610165979.7-一种白芨的种植方法 88、CN201610175678.2-人工干预气候白芨一年两季种植技术 89、CN201610165960.2-一种白芨的物理除草方法 90、CN201610165958.5-一种白芨种茎的生产方法 91、CN201610265386.8-一种白芨高产种植方法 92、CN201610165994.1-一种白芨栽培方法

内容简介：: 江西农业大学学报2 0 1 3 ， 3 5 ( 5 ) ： 9 5 0 9 5 5 A c t a Ag r i c u l t u r a e Un i v e r s i t a t i s J i a n g x i e n s i s h t t p ： x u e b a o j x a u e d u c n E ma i l ： n d x b 7 7 7 5 s i n a C O B 优良观赏药用地被植物自芨组织培养及快速繁殖研究邹娜，李意，连芳青 ( 江西农业大学园林与艺术学院，江西南昌 3 3 0 0 4 5 ) 摘要：分别以蒴果( 种子) 、花茎和地下茎为外植体对白芨进行组织培养和快速繁殖。结果表明：种子播种于培养基 M s+K T 1 0 m s L+N A A 0 5 m s L进行白芨原球茎的诱导和芽的分化效果最好，随后转接到培养基 M s + 6一B A 0 4 5 m g L+N A A 0 4 m s L进行壮苗生根培养， 3 0 d后将生根无菌苗移栽到蛭石中，成活率可达到 9 6 。本文采用无菌播种和组织培养方法获得无菌苗，并进行壮苗生根培养与移栽，不仅繁殖成本低、培养周期短，且操作简单易行便于推广，可为其优良品种的开发利用和快速繁殖提供技术支持。关键词：观赏药用地被植物；自芨；组织培养；快速繁殖中圈分类号： $ 6 8 2 3 1 文献标志码： A 文章编号： 1 0 0 0 2 2 8 6 ( 2 0 1 3 ) 0 5 0 9 5 0 0 6 Ti s s u e Cu l t u r e a n d Ra p i d Pr o p a g a t i o n o f Ex c e l l e n t Or n a me n t al a n d M e d i c i n a l Gr o u nd Co v e r Pl a n t s 蹦2 s t r i a t a ZOU Na， L I Yi ， LI AN F a n g q i n g ( C o l l e g e o f L a n d s c a p e a n d A r t ， J i a n g x i A g ri c u l t u r a l U n i v e r s i t y ， N a n c h a n g 3 3 0 0 4 5 ， C h i n a ) Ab s t r a c t ： C a p s u l e( s e e d ) ， fl o r a l a x i s e s a n d u n d e r g r o u n d c o r n l s o f B l e t i l l a s t r i a t a w e r e u s e d a s t h e e x p l a n t s f 0 r t h e t i s s u e c u l t u r e a n d r a p i d p r o p a g a t i o n I t w a s s h o w e d t h a t ： t h e s e e d s g e r mi n a t e d o n MS +KT 1 0 m s L+N A A 0 5 m sL w a s t h e b e s t f o r p r o t o c o r m i n d u c t i o n a n d b u d d i f f e r e n t i a t i o n a n d t h o s e t r a n s f e r r e d t o t h e v e r mi c u l i t e for l u s t i h o o d a n d r o o t i n g c u l t u r e o n MS+6一B A 0 4 5 mg L+NA A 0 4 mg L for 3 O d h a d a s u r v i v a l r a t e o f 9 6 T h e s t e ri l e s e e d l i n g s o f B l e t i l l a s t r i a t a we r e o b t a i n e d b y a s e p s i s s o wi n g a n d t i s s u e c u 1 t u r e ， a n d t h e n s u b j e c t e d t o l u s t i h o o d a n d r o o t i n g c u l t u r e a n d t r a n s p l a n t i n g ， w h i c h i s n o t o n l y o f l o w r e p r o d u c t i o n c o s t ， s h o rt c u l t u r e p e rio d， b u t a l s o s i mp l e o p e r a t i o n a nd e a s y p r o mo t i o n Th e r e f o r e， i t c a rl p r o v i d e t e c hn i c a l s u p p o rt for t h e d e v e l o p me n t ， u t i l i z a t i o n a n d r a pi d p r o p a g a t i o n o f fin e v a r i e t i e s o f Bl e t i U a s t r i a t a Ke y wo r d s ： o ma m e n t a a n d me d i c i n a l g r o u n d c o v e r p l a n t s ； B l e t i l l a s t r i a t a； t i s s u e c u l t u r e ； r a p i d p rop a g a t i o n 白芨( B l e t i U a s t r i a t a ) 为兰科白芨属多年生草本植物，花期 3 5月，其花紫红色，花形奇特，是一种理想的耐荫观花地被植物，还可盆栽室内观赏或作切花材料供插花之用。白芨不仅具有较高观赏价值，亦是我国常用的中药材之一，以干燥块茎人药，具有收敛止血、消肿生肌等功效。此外，白芨茎中还含有较高的白芨胶，具有特殊的黏度特性，可作为增稠剂、混悬剂、保湿剂和助乳化剂等应用于化妆品中，具有良好的效果。收稿日期： 2 0 1 3 0 1 2 3 修回日期： 2 0 1 3 0 6 2 5 基金项目：江西省教育厅青年基金项目( G J J 1 3 2 5 3 ) 、园林省级特色专业项目和江西农业大学校青年科学基金项目 ( Q N 2 0 1 1 0 3 ) 作者简介：邹娜( 1 9 8 2 一) ，女，讲师，博士，主要从事园林植物生物技术研究， Em a i l ： n z o u y y 1 2 6 C O rn；通讯作者：连芳青，教授， Em a i l ： l i a n f a n g q i n g 1 6 3 t o m。第 5期邹娜等：优良观赏药用地被植物白芨组织培养及快速繁殖研究 9 5 1 因其极高的观赏药用及经济价值，野生白芨遭到了无限制人工采挖。同时，由于白芨种子自然条件下繁殖困难，野生白芨资源急剧减少。白芨目前已被国家列为珍稀濒危的保护植物。在其野生资源日益减少的情况下，大力推广人工栽培- 2 J 、并探索其行之有效的快速繁殖技术，可在解决其由于资源短缺制约白芨产业可持续发展的同时，实现对野生白芨资源的有效保护 _ 。白芨常规以分生繁殖为主，但分生繁殖系数低，生长周期较长，而且耗种量大，不宜进行大规模的商业化生产。利用无菌播种技术，通过组织培养方法可以快速繁殖大量种苗，远较分株繁殖快捷高效 J 。目前，虽然白芨组织培养和设施栽培等人工繁育关键技术得到了一定的发展，但是还没有组织培养技术迅速推广应用的报道- 7 。因此，本研究的目的在于建立一套简单实用且易推广的白芨组培快繁技术程序，为白芨的产业化发展及对野生白芨资源的有效保护提供技术支持。 l 材料与方法 1 1 试验材料白芨成熟未开裂的长卵圆形蒴果、花茎和地下茎。 1 2 试验方法 1 2 1 外植体灭菌外植体材料首先用流水冲洗 2 0 m i n ，再用小毛刷蘸洗衣粉溶液轻轻刷洗其表面，用流水冲洗干净。在超净工作台上，用体积分数为 7 5 酒精溶液浸泡 3 0 S ，然后转入 1 g L的 H g C 1 溶液中进行表面消毒 61 0 m i n ，再用无菌水冲洗 6次，吸干表面水分。花径切去两端并纵切成 2半切口向下接到培养基上；块茎每个切成4 6 份接到培养基上；蒴果纵切，将粉末状的细微种子均匀地撒于培养基上。每种外植体每次均接 3 0瓶培养基，做 3次重复实验。 1 2 2 原球茎诱导以 MS培养基作为基本培养基，采用完全随机试验设计方法，研究细胞分裂素 ( 6 一B A、 K T ) 和生长素( 2 ， 4一D、 N A A) 对白芨原球茎诱导的影响。培养 2 1 d后统计原球茎的诱导率。原球茎诱导率 = 诱导出的原球茎个数接种的外植体个数( 种子粒数) 。 1 2 3 壮苗生根培养将分化出的小芽接入由不同浓度细胞分裂素 6一B A和生长素 N A A配比组成的 9种培养基，研究白芨苗的生根数，根长，叶片数，叶长和叶宽，以取得白芨一步成苗的最适培养基。每种培养基设 l 5瓶，每瓶均接人 6株白芨小芽，培养 3 0 d后，记录各数据。 1 2 4 移栽选择生长势旺盛，叶片数多且根系良好的瓶苗，打开瓶盖，室内或 9 5 遮光率的大棚内放置 3 5 d ，然后小心取出瓶苗，洗净根上附着的培养基。采用随机区组试验设计研究蛭石、珍珠岩、泥炭土 + 蛭石、泥炭土 +珍珠岩四种基质对白芨组培苗移栽成活的影响。栽苗后注意遮光率和提高空气湿度，定期做好观察记录。3 0 d 后分别在每个基质中抽取 5 0株有代表性的苗进行调查分析，测每组内苗的成活率、植物球茎直径、苗高、叶片数、叶宽。 1 3 培养条件培养室内培养条件为：温度( 2 5 2 ) ，光照 1 8 0 O一 2 5 0 0 l x ，每天光照 1 2 h ；诱导和增殖生根培养均采用 MS培养基，蔗糖 3 O g L ， p H 6 5 ，琼脂 7 g L 。 2 结果与分析 2 1 外植体的选择分别以白芨蒴果、花茎和地下茎为外植体进行组织培养，结果表明，不同外植体类型的污染率都是随着消毒时间的增加而减少，培养 1个月后，消毒灭菌 1 0 mi n的白芨蒴果 ( 种子 ) 的成活率可高达 9 6 6 7 ，平均污染率仅为 3 3 3 ，显著低于相同处理条件下的地下茎和花茎平均感菌率( 表 1 ) 。此外，以白芨花茎和地下茎作为繁殖材料，培养一段时间后地下茎变绿随后变褐色，花茎虽也有膨大的现象，但更换多种培养基和重复多次实验均未诱导出愈伤组织或芽；而以白芨种子为培养材料，通过简单培养即可诱导出白芨原球茎。由此可见，自芨组织培养以蒴果( 种子) 为外植体的培养效果最好。 9 5 2 江西农业大学学报第3 5卷 2 2 不同培养基对白芨原球茎诱导及芽分化的影响白芨种子播种在诱导培养基上约 1 周后吸水膨胀，并由黄褐色变成淡绿色，进一步形成绿色小球体状( 即原球茎) 。试验结果表明( 表 2 ) ：在培养基 MS+ 6一B A 1 0 m #L+ 2， 4一D 0 5 m g L中，原球茎诱导率只有 5 ( 处理 1 ) 。将处理 1中 0 5 mg L的 2 ， 4一D改为等浓度的 N A A( 处理 2 ) ，可使原球茎的平均诱导率由 5 提高到 9 0 ，提高了 1 7倍。说明在 l m L细胞分裂素 6一B A存在情况下，与 2， 4 一D相比， N A A更有利于白芨原球茎的诱导。当保持培养基中的 2 ， 4一D浓度 ( 0 5 m g L) 不变，将处理 1中 1 0 m g L的细胞分裂素 6一B A改为等浓度的 K T ( 处理 4 ) ，原球茎的平均诱导率则有 5 提高到 7 0 ，提高了 1 3倍。说明在 0 5 mg L 2 ， 4一D存在情况下，与 6一B A相比， K T更有利于白芨原球茎的诱导。而在 N A A浓度( 0 5 m #L ) 一定的条件下，等浓度的细胞分裂素 6一 B A或 K T处理，对白芨原球茎诱导效果相同( 处理 2和处理 3 ) 。因此，在节约成本的情况下，仅采用 M S+ 6一B A 1 0 mg L+N A A 0 5 mg L的培养基 ( 处理 2 ) 对白芨原球茎进行诱导，便能达到很好的效果。但与生长素 2 ， 4一D搭配时， K T比 6一B A的诱导效果好 ( 处理 1 和处理 4 ) 。表 2 不同细胞分裂素和生长素诱导白芨原球茎的结果 T a b 2 Effe c t s o fd i ff e r e n t c y t o k i n i n a n d a u x i n o n p r o t o c o r m i n d u c t i o n o fBl e l l a s t r i a ta 每处理接种 1 5瓶，每瓶接种 2 O粒种子， 3周后计算其诱导出的原球茎。 Ea c h b o t t l e wa s i n o c u l a t e d 2 0 s e e d s a n d e a c h t r e a t me n t p e rf o r me d 1 5 b o t t l e s ， t h e i n d u c t i o n o f p r o t o c o r m wa s c a l c u l a t e d t h r e e w e e k s t h e r e a f t e r 在上述不同培养基上培养约 1个月后，原球茎顶部出现可见幼叶，不同培养基对白芨芽分化的诱导存在较明显的差异。处理 1中诱导的白芨小芽发黄，略见绿色，虽然处理 4原球茎诱导率可以达到 7 0 ，但黄化现象较处理 1 更严重，继续培养，芽分化的诱导效果很差。处理 2和 3中原球茎诱导分化效果较好，其中处理 3中的小苗每株平均有两小叶，而处理 2每株仅有一片d , n t 。就整齐度而言，处理 3芽分化效果更好；就苗高而言，处理 2和处理 3诱导的白芨平均苗第5期邹娜等：优良观赏药用地被植物白芨组织培养及快速繁殖研究 9 5 3 高分别为 0 3 c m和 0 5 c m。由此可见，对于白芨芽的分化诱导，处理 3效果最好。综合考虑白芨原球茎诱导和芽分化的效果，筛选出白芨原球茎诱导及芽分化最适培养基配方为： MS+K T 1 0 m g L+N A A 0 5 m L ( 处理 3 ) ，在该培养基中的原球茎平均诱导率可达 9 0 ，且诱导芽的分化效果最好。 2 3 不同培养基对白芨壮苗生根培养的影响将分化出的小芽转接人含不同浓度 6一B A和 N A A配比组成的 9种培养基中，以筛选白芨最佳壮苗生根培养基配方。表3 不同培养基对白芨壮苗及生根培养影响 Ta b 3 Eff e c t s o f d i ff e r e n t me d i a o n l u s t i h oo d a n d r o o tin g c u l t u r e i n d u c ti o n o f B e t a s t r a t a 叶片数、根数和根长为平均值，叶长和叶宽为最大值，以上数据为培养 3 0 d后的观察结果。 I J e a f n u mb e r r o o t n u mb e r a n d r o o t l e n g t h i n d i c a t e a v e r a g e wh i l e l e a f l e n gth a n d l e a f wi d t h i n d i c a t e ma x i mu m， t h e s e d a t a o b s e r v e d 3 0 d aft e r e x p e r i me n t s p e r f o r me d 由表 3可以看出：每株苗叶片数最多的 4号培养基，其次是处理 2，且其叶长和叶宽值都较大。处理 2 、 3和 7 ，处理 4和 5 ，处理 6和 8之间的实验结果表明：在 N A A浓度相同的条件下，植株叶片数、叶长和叶宽随 B A浓度的增加而减少。而在 B A浓度相同的条件下( 处理 5和6 ，处理 7 、 8和 9 ) ，植株叶片数、叶长和叶宽随 N A A浓度的增加有降低趋势， N A A保持在 0 5 mg L更有利于植株生长。说明细胞分裂素与生长素只有以一定适宜浓度配比，白芨组织培养才能获得较好的生长效果。表 4不同基质对白芨移栽成活的影响 T a b 4 Effe c t s o f d i ffe r e n t m a t r i x o n s u r v i v a l o f Bl e t i l l a $ l r l a t a a f t e r t r a n s p l an t 9种培养基中的苗都能生根，综合考察苗的生根数和根长，效果较好的处理为 3 、 4和 5 ，其中生长的植株平均根数分别为： 7 4条、 7 2条和 6 6条，平均根长分别为： 2 2 3 ， I 5 4 ， 2 5 0 c m。第 5期邹娜等：优良观赏药用地被植物白芨组织培养及快速繁殖研究 9 5 5 瓶苗移栽实验结果表明，白芨无菌苗最适宜的移栽生长基质为蛭石 ( 表 4 ) 。蛭石具有良好的保水透气性能，这也与白芨性喜温暖而又湿润的环境，要求排水良好含腐殖土较多的沙壤土的特性吻合。此外，白芨瓶苗的叶较薄，出瓶后极易脱水而使叶边缘焦枯，从而影响成活率，保证移栽前期的空气湿度在 8 0 9 0 ，可提高移栽成活率。本实验主要采用的是种子萌发方法繁殖，虽然增殖系数不高，但成苗迅速且苗的质量好。本研究中，以种子作为外植体， 3 0 d就开始萌动， 6 0 d小苗就分化完全，这也与韦卡娅等的研究结果相一致。研究表明利用幼嫩块茎作为外植体诱导丛生芽， 6 0 d才有小芽形成，且分化效率不高。此外，白芨块茎长期在地下，受病菌和泥土污染严重，很难彻底灭菌，而且由于分化效率低、成苗所需时间长等原因，白芨块茎、侧芽等作为外植体的方法目前远不如种子萌发方法普遍。本研究得到白芨高效成苗的技术流程为：白芨成熟尚未开裂的蒴果消毒灭菌处理后将种子播于培养基 MS+K T 1 0 m g L+N A A 0 5 m g L进行原球茎的诱导和芽的分化， 5 0 d后转入培养基 MS+ 6一 B A 0 4 5 m g L +N A A 0 4 m g L进行壮苗生根培养 3 0 d ，而后将生根无菌苗移栽到蛭石中，移栽初期进行适当遮荫并保持较高的空气湿度，成活率可达到9 6 。参考文献： 1 刘燕园林花卉学 M j 匕京：中国林业出版社， 2 0 0 8 ： 2 1 4 2 石晶自芨属植物资源与利用 D 海口：海南大学， 2 0 1 0 3 国家药典委员会中华人民共和国药典： l 部 s 北京：中国医药科技出版社， 2 0 1 0 ： 9 5 4 颈学裘，沈文照，胡晋，等中药白芨的研究 j ，药学学报， 1 9 9 8 ， 3 ( 1 ) 7 5 8 7 5 陆峻波，刘亚辉，杨永红，等从文献分析看我国自芨研究进展 J 云南农业大学学报， 2 0 1 1 ， 2 6 ( 2 ) ： 2 8 82 9 2 6 刘军凯白芨细胞悬浮体系的建立及其次生代谢产物的测定 D 昆明：云南农业大学， 2 0 1 2 7 张永为，蒋福升，王寅，等白及产业现状及可持续发展的探讨 J 中华中医药学刊， 2 0 1 2 ， 3 0 ( 1 0 ) ： 2 2 6 4 2 2 6 6 8 张亦诚白芨的生物特性及栽培技术 J 农业科技与信息， 2 0 0 7 ， ( 1 0 ) ： 4 5 9 管常东，叶静，郑晓君，等白芨组织快繁育苗技术研究进展 J 云南大学学报：自然科学版， 2 0 1 0 ， 3 2 ： 4 1 6 4 2 1 1 0 M i y o s h i l K， Mi i M P h y t o h o r m o n e p r e t r e a t m e n t f o r t h e e n h a n c e m e n t o f s e e d g e r m i n a t i o n and p r o t o e o r m f o r m a t i o n b y t h e t e r - r e s t r i a l o r c h i d ， C a l ant h e d i s c o l o r( O r c h i d a c e a e ) ， i n a s y m b i o t i c c u l t u r e J S c i e n t i a H o r t i c u h u F a e ， 1 9 9 5 ， 6 3 ( 3 4 ) ： 2 6 3 2 6 7 1 1 韦卡娅，刘燕琴，秦静，等白及组培外植体的筛选研究 J 中国现代中药， 2 0 0 8 ， 5( 1 0 )： 1 3 一 l 4 林副产品N o n t im b e r F o r e s t P r o d u c t 二 o 栽培技术研究三丘第：少吾覃正环。李波陈紫常。六期调查规划设计队湖北宜昌4 4 3 0 0 0 ；林业科学研究所湖北宜昌4 4 3 0 0 0 ；业长乐坪林业管理站湖北宜昌4 4 3 0 0 0 ) 实用技术药，具以南省区，鄂西南主要分布在五峰、长阳、鹤峰等海拔中种 5 0 0 I 6 0 0 m 的常绿阔叶林、针叶林下、路边草丛或等高岩石缝中，以块茎人药，具有补肺止血，消肿生肌等功特是 z 息适岖发展的白芨高产栽培技术。冀军星 _本植物，高 2 o 6 o m 。根茎三角状扁低山溪边及荫蔽草丛中或林下湿地，分布于我国秦岭夕。工干阻 “ 。 K 仝一川州析。最后进行综合分析和评定优劣名次。 3 结果与分析表 I 测定因子统计结果测定因子处理 I 处理处理处理新梢长 c m 9 6 2 士0 6 9 b 1 1 5 2 士0 8 9 a 9 6 9 土0 8 5 b 新叶片片 3 1 9 士0 2 3 b 4 6 7 0 2 0 a 3 2 7 士0 4 8 b 抽梢率 5 3 1 2 土2 3 4 b 8 6 0 9 1 8 5 a 6 0 4 7 士0 1 7 b 根系长 c m 4 2 7 0 4 4 b 5 4 3 士0 2 3 a 4 0 7 0 1 O b 根条数条3 1 8 士0 1 4 b 4 6 0 0 1 O a 3 1 2 士0 1 1 b 生根率 5 3 1 2 士2 3 4 b 8 6 0 9 土1 8 5 a 6 0 4 7 0 1 7 b 8 0 8 土 0 5 7 c 2 6 20 1 l b 4 5 6 7 3 6 2 c 3 3 7 士 0 3 4 b 2 8 1 士 0 1 O c 4 5 6 7 士 3 6 2 c 注：表中不同字母表示达 5 显著水平。由表 1可以看出，生根率比较结果表明以处理 0 0 2 浓度为最高，达 8 6 O 9 ；其次是处理 0 O 1 浓度，达 6 0 4 7 ，生根率和处理浓度之间不存在相关性。凡经生根粉处理的都比对照清水生根率有明显提高。根的条数和平均长度以处理 0 0 2 浓度为最高，达 4 6 0条和 5 4 3 c m；其次是处理 1 0 0 3 浓度，达 3 1 8 条和 4 2 7 c m，根的条数和平均长度和处理浓度之间不存在相关性。新梢长度和新叶片数以处理0 0 2 浓度为最高，达 1 1 5 2 a m和 4 6 7片；其次是处理 1 1 1 0 0 1 浓度，达 9 6 9 c m 和 3 2 7片。 4 小结与讨论试验结果表明处理 1 1 0 0 2 浓度的生根率、根的条数、根的平均长度、新梢长度和新叶片数最高，与对照清水相比均达到显著水平，可以将这一处理浓度作为园林景观植物红瑞木硬枝扦插繁殖的参考值。吲哚乙酸和 a 一萘乙酸属植物生长素类物质，其对植物的伸长具有明显的促进作用。但是，生长素对生长的效应随浓度、物种、器官而异。通常，低浓度促进生长，中等浓度抑制生长，高浓度产生伤害，甚至死亡。除了促进生长之外，生长素对细胞的分裂与分化也产生一定的作用( 生长素促进细胞核分裂) 。使用适宜浓度的生长素类物质处理某些植物的茎或枝条切段，可刺激其生根。即刺激根源基细胞分裂 7 。参考文献： E l i 李宪章常用景观花卉 M 北京：金盾出版社， 2 0 0 9 ： 2 4 2 2 乌丽雅斯，刘勇，李瑞生，等容器育苗质量调控技术研究评述 J 世界林业研究， 2 0 0 4 ， 1 7 ( 2 ) ： 9 - 1 3 3 曲芬霞，陈存及，韩彦良樟树扦插繁殖技术 J 林业科技开发， 2 0 0 7 ， 2 1 ( 6 ) ： 8 6 8 9 4 查振道，白芳芳，王军涛，等 1 8个树种生长素处理扦插生根效果试验 J 陕西林业科技， 2 0 0 5 ( 3 ) ： 1 2 1 4 5 徐志豪，陈婷婷金叶六道木嫩枝扦插育苗试验I- J 林业科技开发， 2 0 0 7 ， 2 1 ( 4 ) ： 7 8 8 0 6 何俊华，罗曼，周芳勇，等红花木莲容器苗栽培基质配方的比较 J 湖南林木科技， 2 0 0 7 ， 3 4 ( 3 ) ： 6 - 8 7 白宝章，徐仲植物生理学 M 北京：中国科学技术出版社， 1 9 9 5 ： 1 3 3 1 3 8 ( 栏目责任编辑蒋旭东) 林副产品N o n t im b e r F o r e s t P r o d u c t 二球形或不规则菱形，常数个相连；叶片 3 5 ，披针形或在畦 o 宽披针形，长 8 3 0 c Y n ，宽 1 5 4 c m，全缘，先端渐三年尖，基部下延成长鞘状；总状花序顶生，花 3 8朵，花三年第序轴长 4 1 2 c m，苞片披针形，长 1 5 25 c m，早落；收， J I 六期花紫色或淡红色，直径 3 4 c m；萼片和花瓣等长，狭面，林长圆形，长 2 8 3 c m；花瓣长园状披针形，长 2 4 中毒业实 2 9 c m，唇瓣倒卵形，长 2 3 2 8 c m，白色或具紫纹， 2 4 用上部 3 裂，中裂片边缘有波状齿，先端内凹，中央具 5 季进技术条褶片，侧裂片直立，合抱蕊柱，稍伸向中裂片，但不肥，壶及中裂片的一半；雄蕊与花柱合成一蕊柱；花药块 4 2 4 对，扁而长，子房下位，圆柱状，扭曲；蒴果圆柱形，长及时 3 5 c m，直径约 1 c m，两端稍尖，具 6纵肋；花期 4 5 洼湿月；果期 7 9 月。 2 栽培技术 2 1 繁殖材料的选择采集在 6月以前栽培时，选择上一年度具有老杆及嫩芽的假鳞茎作种， 6月以后，选当年生嫩茎作繁殖材料，试验研究表明，选用当年生嫩茎作繁殖材料，出苗率达 9 0 以上，且苗木健壮，反之利用老径作繁殖材料，发芽率较低，且出土的苗木瘦小，多数虽能发芽但出不了土，出苗率只有 3 4 。 2 2圃地的选择与整理选择海拔 6 0 0 41 5 0 0 1 T 1 ，土壤疏松肥沃、富含腐殖质、温暖潮湿、排水良好的沙壤土地块，海拔低的地方宜选择半阳半阴的地块，海拔高的地方选择向阳的地块。将所选择栽培地深耕或深挖 1 5 c m 以上，清除杂草树根和草根等杂物，将土壤整细耙平，所清除杂物烧成火土肥用于栽培时覆盖。 2 3 繁殖栽培方法白芨繁殖栽培方法一般采用分株繁殖，将整理好的圃地按宽 1 0 0 c m、高 1 0 c m起畦，畦与畦间的步道宽 2 5 c m。栽植时按株行距 2 5 c mX2 5 c m 开穴，穴深 1 0 c m，将带嫩芽的块茎嘴向外置于穴底，每穴按三角形排放 3 个，然后施足腐熟的有机肥( 或农家肥) ，每 6 6 7 I n 约 2 5 0 0 k g ，肥料不要覆压在白芨茎芽上，以免烧芽，然后填土压实，有利于次年芽的生长出土，有条件的用火土肥压实最好。 2 4田间管理 2 4 1 中耕除草白芨在栽培前 2 a ，除草要求较高，每年除草约 6次，第一次在出苗前，可以用杀生型除草剂除草。苗木出土后智能人工进行除草，第二次在 4月进行，第三次在 5 月底 6 月初进行，第四至六次分别在 7 、 8 、 9月进行，最后一次除草时将沟中的土浇洒第采土药欠、机要低 2 4 4 病虫害防治白芨的病虫害以预防为主，幼苗期 “ 地老虎” 危害较严重，在 4月白芨幼苗出土时，每 6 6 7 m2 用特丁硫磷 1 0 0 0 g均匀散在栽培地，可有效防治地老虎啃食幼苗地下茎基部。 2 4 5 夏冬防护当海拔在 8 0 0 In 以下的阳光直射地区，主要是防日灼，只要在畦的两边种上 2行玉米即可，玉米的株距为 5 0 c m，玉米成熟后，果实可以收获，但茎秆不能除，要在 1 0月中旬后才能砍除。对海拔高于 1 2 0 0 In的栽培地，栽植时应将行沟深挖 1 0 1 2 c m，然后施肥覆土镇压，每年的 9月下旬至 1 O月下旬将畦与畦之间的沟内土壤均匀浇洒两边畦上，同时可均匀的散一层 2 2 5 C In 的农家肥，也可割杂草、采集枯树叶等覆盖防冻。 3 采收加工白芨栽培后在第四年秋冬季即可采收，采收宜在 8 1 0月进行，采挖时，先割除白芨的枯黄茎叶，慢慢从种植地块边缘依次开挖，小心去泥后运至集散地堆放；选种后的白芨，放在水泥地上，用适量流量的胶水管，洒水闷湿，用足反复轻踩，并不断喷水，去其粗皮、泥土。将洗净的白芨放入沸水中煮 5 1 0 mi n ，不断搅拌至透心时取出，用网状塑料袋装好，待无流水滴后，紧挨放炕上，上用塑料薄膜覆盖，成 V I 袋状，每 1 0 0 k g 块茎用 0 2 k g硫黄熏闷 8 h后取出晒干即可。参考文献： 1 胡风莲白芨的栽培管理及应用 J 陕西农业科学， 2 0 1 1 ( 3 )： 2 6 8 2 6 9 I- 2 J 张伦梅，熊云杰，谭林彩白芨高产栽培技术E J 3 作物栽培， 2 0 0 7 ( 2 ) ： 3 4 r 3 J 韩学俭白芨要用及其栽培技术 J 农村经济与科技， 2 0 0 4 ( 1 0 ) ： 3 1 3 2 -A - 中草 6 C h i n e s e T r a d i t i o n a l a n d H e r b a l D r u g s 第 4 4 卷第 3 期 2 0 1 3 年 2 月 3 4 9 白芨愈伤组织诱导、增殖与分化研究石云平，赵志国，唐凤鸾，付传明，黄宁珍广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，广西桂林5 4 1 0 0 6 摘要：目的建立白芨愈伤组织诱导、增殖和分化再生体系。方法以 MS为基本培养基，应用正交试验方法设计植物生长调节剂组合和质量浓度配比，研究不同外植体及植物生长调节剂对白芨愈伤组织形成、增殖和分化的影响。结果白芨假鳞茎为诱导愈伤组织形成的最佳外植体；1 0 mg L 6 - 苄氨基嘌呤 ( 6 - B A)与 2 0 mg L 2 ， 4 - 二氯苯氧乙酸 ( 2 ， 4 - D)组合不仅可诱导白芨愈伤组织形成，还有利于愈伤组织分化成芽。1 0 mg L 6 - B A与 3 0 mg L 2 ， 4 - D的组合促进愈伤组织增殖，增殖系数为 7 8 ；在分化培养基中附加 0 5 merl E噻二唑苯基脲 ( T DZ ) ，可提高愈伤组织分化率。结论白芨愈伤组织诱导的最佳培养基为 MS +6 B A 1 0 mg L+2 ， 4 - D 2 0 mg L；最佳增殖培养基为MS +6 B A 1 0 mg L +2 ， 4 - D 3 0 mg L；分化最佳培养基为 MS +6 一 B A 1 0 rag L+2 4 - D 2 0 mg L +T D Z 0 5 mg L 。关键词：白芨；愈伤组织；诱导；增殖；分化；正交设计中图分类号：R 2 8 2 2 I 文献标志码：A 文章编号：0 2 5 3 2 6 7 0 ( 2 0 1 3 ) 0 3 0 3 4 9 0 5 DoI ： 1 0 7 5 0 1 i s s n 0 2 5 3 2 6 7 0 2 0 1 3 0 3 0 2 3 I n d u c t i o n ， p r o l i f e r a t i o n ， a n d d i f f e r e n t i a t i o n o f Bl e t i l l a s t r i a t a c a l l u s S HI Yun - p i n g， ZHAO Zh i - g uo， T ANG Fe ng l ua n， FU Ch ua n- mi ng ， HUANG Ni ng r z h e n Gu a n g x i I n s t i t u t e o f Bo t a n y , Gu a n g x i Zh u a n g Au t o n o mo u s Re g i o n a n d t h e Ch i n e s e Ac a d e my o f S c i e n c e s ， Gu i l i n 5 4 1 0 0 6 ， Ch i n a Ab s t r a c t ： Ob j e c t i v e T o e s t a b l i s h t h e r e g e n e r a t i o n s y s t e m o f B l e t i l l a s t r i a t a c a l l u s f o r i n d u c t i o n ， p r o l i f e r a t i o n ， a n d d i f f e r e n t i a t i o n M e t h o d s M S wa s s e l e c t e d a s t h e b a s i c me d i u m T o s tud y t h e e f f e c t i v e f a c t o r s o n i n d u c t i o n ， p r o l i f e r a t i o n ， a n d d i ffe r e n t i a t i o n o f c a l l u s o f B s t r i a t a wi t h d i f f e r e n t e x p l a n t s a n d t o o p t i mi z e t h e p l a n t g r o wt h r e g u l a t o r s ， k i n d s ， a n d c o n c e n t r a t i o n r a t i o o f p l a n t g r o wt h r e g u l a t o r s b y o n h o g o n a l t e s t d e s i g n Re s u l t s Th e o p t i ma l e x p l a n t s we r e f a l s e b u l b s o f B s t r i a t a M S me d i um a d d e d wi t h 1 0 mg L 6 - b e n z y l a mi n o p u r i n e( 6 - B A) a n d 2 0 mg L 2 ， 4 - d i c h 1 o r o p h e n o x y a c e t i c a c i d( 2 ， 4 - D) ， n o t o n l y c o u l d i n d u c e c a l l u s f o r ma t i o n ， b u t a l s o b e n e fi t t o t h e d i ffe r e n t i a t i o n o fc a l l u s M S me d i u m a d d e d wi t h 1 0 mg L 6 一 BA a n d 3 0 mg L 2 4 - D p r o mo t e d t h e p r o l i f e r a t i o n o f c a l l u s a n d t h e p r o l i f e r a t i o n c o e ffic i e n t wa s 7 8 Ad d i n g wi t h 0 5 mg L t h i d i a z u r o n( T DZ ) t o t h e d i ff e r e n t i a t i o n me d i um i mp r o v e d t h e d i ffe r e n t i a t i o n r a t e o f c a l l u s Co n c l u s i o n M S+6 一 BA 1 0 m L+2 ， 4 一 D 2 0 mg L i S t h e o p t i ma l me d i u m f o r t h e i n d u c t i o n o f c a l l u s ； MS+ 6 一 BA 1 0 mg L +2 4 - D 3 0 mg L i s t h e o p t i ma l me d i u m for t h e p r o l i f e r a t i o n o f c a l l u s ；MS+6 - BA 1 0 mg L+ 2 ， 4 - D 2 0 mg L+ T DZ 0 5 mg L i S t h e o p t i ma l me d i u m fo r t h e d i ff e r e n t i a t i o n o f c a l l u s Ke y wo r d s ： B l e t i l l a s t r i a t a( T h u n b ) R e i c h b f ； c a l l u s ； i n d u c t i o n ； p r o l i f e r a t i o n ； d i f f e r e n t i a t i o n ； o n h o g o n a l d e s i g n 白芨 B l e t i l l a s t r i a t a( T h u n b )R e i c h b f 又名白及，别名地螺丝、白鸡儿、刀口药、连及草等，为兰科多年生草本植物 J 。其花大色艳，被称为中国洋兰，具有很高的观赏价值，常用于花径、花坛及林下的地被植物等。其假鳞茎是我国传统中药，具有收敛止血、补肺、消肿生肌之功效，外敷治疗创伤出血、痛肿、烫伤和疗疮，内治吐血、肺病、咳血、慢性胃溃疡以及肿瘤等症【 2 J 。现代研究表明，白芨还具有较强的抗氧化和抗衰老作用【 3 】，可用于保健、护肤及美容养颜【 4 J 。白芨在我国长江流域及以南地区均有分布，生长区域较广。由于多年的掠夺式采挖，加上生境日益恶化，使得野生白芨的数量急剧减少，濒临灭绝边缘，已被国家列为重点保护的野生药用植物之一。收稿日期：2 0 1 2 0 6 2 O 基金项目：广西自然科学基金项目 “ 药用植物白芨多倍体育种技术研究”( 2 0 1 1 G X NS F A 0 1 8 1 0 5 ) ；广西科技攻关项目 “ 广西重要兰科资源植物保护与繁育技术研究”( 桂科攻 1 0 1 0 0 0 1 2 5 ) ；桂林科技攻关项目 “ 药用植物白芨种源基地建立与产业化研究”( 2 0 1 2 0 1 0 5 1 1 ) 作者简介：石云平 ( 1 9 7 4 一) ，女，广西桂林人，助理研究员，硕士，主要从事生物技术方面的研究工作。E ma i l ： s h i y u n p i n g 1 6 3 t o m 通信作者黄宁珍E ma i l ： h a n g n z g x i b c n 网络出版时间：2 0 1 3 o 1 O 8 网络出版地址：h t t p ： w w w c n ld n e t k c ms d e t a i l 1 2 1 1 0 8 R 2 0 1 3 0 1 0 8 0 9 2 8 0 0 2 h t ml 3 5 0 中草焉C h i n e s e T r a d i t i o n a l a n d H e r b a l D r u g s 第 4 4 卷第 3 期 2 0 1 3 年 2 月白芨应用日益广泛，人工栽培势在必行。虽然白芨组培快繁技术比较成熟 5 ，但是目前栽培仍以分株繁殖为主，存在产量较低、所需的生长周期长等不利于大规模发展人工栽培的因素。因此，改良白芨品种，提高其产量和品质是大规模栽培的前提。由于愈伤组织是未分化的具有分生能力的原始细胞团，通过对愈伤组织进行基因转化和化学诱导可较快获得新品种。目前，关于兰科植物愈伤组织诱导的文献报道不多L 8 ” ，白芨愈伤组织诱导还未见报道本实验以白芨无菌组培苗为材料，在 MS培养基中附加不同种类和质量浓度的植物生长调节剂进行实验，建立白芨愈伤组织诱导与植株再生体系。 1 材料 B B S -DD C型洁净工作台，济南鑫贝西生物技术有限公司；J Z 一 1 6 0型接种器械灭菌器，上海咏星生物科技有限公司。白芨 B l e t i l l a s t r i a t a( T h u n b ) Re i c h b f 为广西桂林优良品种，由广西植物研究所刘演研究员鉴定。以白芨种子无菌播种得到白芨组培苗为材料进行实验。植物生长调节剂萘乙酸 ( NA A) 、6 一苄氨基嘌呤 ( 6 - B A) 、2 ， 4 一二氯苯氧乙酸 ( 2 ， 4 。 D) 、噻二唑苯基脲 ( T DZ)均为分析纯，购白 S i g ma公司。 2 方法 2 1 白芨愈伤组织诱导培养基与最佳外植体的筛选培养基：以 MS为基本培养基；植物生长调节剂 2 ， 4 一 D、NA A和 6 - B A分别为 A、B和 C 3因素，各取 3水平，应用正交表 L 9 ( 3 ) 设计不同因素水平配比的培养基 ( 表 1 ) ；再加 2 0 g L白糖和 4 5 L 琼脂；p H值 5 8 6 0 ；1 2 1、1 1 k g c m2 下灭菌 2 5 rai n。外植体及接种培养：在超净工作台中，将白芨无菌组培苗根、假鳞茎和叶分别切成长度为 0 5 c m 左右的小段，接入各诱导培养基中，在 ( 2 5 1 )、光照强度 1 5 0 0 l x 、光照时间 1 0 h d的条件下培养。 2 2 白芨愈伤组织增殖与分化培养基筛选 2 2 1 增殖培养基及增殖培养根据白芨愈伤组织诱导正交试验结果，设计愈伤组织增殖培养基。以 MS为基本培养基，1 0 mg L 6 - B A为固定因素，分另 0 附力口 0 、1 0 、 2 0 、 3 0 、 4 0 me t E 2 ， 4 一 D；再力口 2 0 g L 白糖和4 5 g L琼脂； p H值 5 8 6 0 ；灭菌。将“ 2 1 ” 项中诱导得到的愈伤组织切成 0 - 3 c m0 3 c m小块，分别接入增殖培养基中培养，以筛选白芨愈伤组织增殖培养基。表 1 白芨愈伤组织诱导正交设计与结果分析 ( n =3 ) T a b l e 1 An a l y s i s o n o r t h o g o n a l d e s i g n a n d r e s u l t s f o r c a l l u s i n d u c ti o n o f B s t r i a t a =3 ) 2 2 2 分化培养基及分化培养根据白芨愈伤组织增殖培养试验，以 MS +2 ， 4 D 2 0 mg L +6 一 B A 1 0 mg L为固定因素，分别添加 0 、 0 1 、 0 5 、 1 0 mg L T DZ；再加 2 0 g L白糖和 4 5 g L琼脂； p H值 5 8 6 0 ；灭菌。将愈伤组织切成 0 5 c m0 5 c m 小块，接入分化培养基中培养，进一步筛选白芨愈伤组织分化培养基。以上每个处理 3瓶，每瓶 1 0个接种点。每 7 天观察 1次，5 0 d时记录各处理中诱导出外植体的数目、增殖系数和分化率。愈伤组织诱导率=产生愈伤组织的外植体数接入外植体数愈伤组织增殖系数=培养后愈伤组织体积接入时愈伤组织体积愈伤组织分化率=出芽的愈伤组织数愈伤组织总数 3 结果与分析 3 1 白芨愈伤组织的诱导 3 1 1 最佳外植体的筛选将白芨无菌组培苗的根、假鳞茎和叶片分别接入按正交设计的 9种处理培养基中培养。2 0 d时，部分根的根尖部位开始膨大；假鳞茎上端组织变得疏松膨大；叶片大部分发黄变黑，小部分保持青色。3 5 d时，整条根膨大，表面长出黑色的致密愈伤组织；假鳞茎的腋芽点出 3 5 2 中草焉 C h i n e s e T r a d iti o n a l a n d H e r b a l r u 4 4 鲞笺三塑生旦图2 愈伤组织分化成芽 ( A )和丛生芽的生长 ( B ) F i g 2 C a l l u s ti s s u e d i f f e r e n t i a t e d b u d s ( A ) a n d c l u s t e r b u d s g r o wt h( B ) 表 3 T DZ对白芨愈伤组织分化的影响 ( n =3 ) Ta b l e 3 Ef lf e c t 0 f T DZ o n d i f f e r e n t i a tio n o f B s i a t a c a l l u s =3 ) 化率和产芽数均随着 T D Z 质量浓度的增加而增加。当 T DZ为 O 5 mg L时，分化率达到 1 0 0 ，平均每块愈伤组织分化出的芽数为 5 - 3个，芽比较壮；当 T DZ为 1 0 mg L时，虽然分化的芽数有所增加，但芽变细弱，有小部分芽出现玻璃化现象。因此，白芨愈伤组织分化最佳培养基为 MS +6 B A 1 0 mg L+ 2 4 - D 2 0 mg L+ T DZ 0 5 mg L。 4 讨论在植物组织培养过程中，植物激素对体细胞胚状体的发生与发育有很大影响。在培养初期，一定量的生长素类物质是诱导脱分化、愈伤组织生长和胚性细胞形成的必要条件，其中使用最多的是 2 ， 4 D ，其次是 N A A 】。愈伤组织分化培养时期，必须降低或完全去掉 2 ， 4 D等生长素类物质，才有利于胚状体的形成与发育【 1 。然而本实验发现，当 2 ， 4 D与 6 - B A比例为 2：1时，不仅诱导出愈伤组织，还有利于愈伤组织分

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