《临床检验基础》第三章血液分析仪检验 课件_1

第三节血液分析仪检测结果显微镜复查规则2005年 国际实验室血液学学会 ISLH 提出了显微镜复查的41条建议性标准 表3 8 表3 9 表3 10 表3 11 近年来 又有一些血液学检验专家针对不同类型的血液分析仪制定了各自的显微镜复查规则 但其临床实用性尚处于实践检验中 一 血液分析仪检验质量保证血液分析仪检验结果的质量保证 要贯穿于临床医生的申请 护士或检验人员采集标本 运输人员转运标本 检验人员接收标本 检测 复查确认 打印结果 发出报告 以及临床满意的全过程 第四节血液分析仪检验的质量保证 仪器校准和性能评价 一 检测前质量保证1 合格的检验人员 上岗前接受规范的培训 掌握采用参考方法校正仪器检测参数的原则 参加能力测试 2 合适的检测环境3 合格的血液分析仪4 配套试剂5 合格的检测标本合格的检测标本的要求见表3 12 二 检测中质量保证1 仪器启动按照SOP的规定 在各种设备连接完好的基础上 才能开启仪器 2 室内质控3 标本检测吸样前必须采用混匀器法或人工法多次充分混匀标本 4 仪器清洁应随时清洁被血液标本污染的部位 特别注意在关闭仪器后 清洁检测部件 如吸样针孔 和仪器外部 确保其通畅 洁净 并处理检测废液 三 检测后质量保证1 实验室内结果分析按ISLH的复查标准 并根据本实验室设定的规则 复查检测结果 1 分析有密切关联的参数之间的关系 如在RBC HCT与HGB之间掌握 3规则 即 3 RBC Hb 3 Hb HCT 临床允许误差为 3 2 确定是否需要显微镜复查 复查的重点 一是检查血细胞形态 并注意可能存在的异常细胞和血液寄生虫 二是做白细胞分类计数 并估算油镜下细胞分布良好区域内的白细胞和血小板的数量 以验证血细胞计数的准确性 2 结合临床情况作相关分析3 定期征求临床对检验结果的评4 记录和报告难以解释的检测结果对于难以解释的检测结果 必须记录并报告临床 有助于积累实践经验 发现新的临床意义 二 血液分析仪校准 一 建立仪器检测参数基准值基准值是评判血液分析仪检测性能的参考水平 当安装新购仪器或仪器调整 维修后 可因基准值的变化影响血液分析仪的精密度和准确度 需要建立或确认参数的基准值 2 校准品的来源和性能要求校准品是用于校准血液分析仪的物质 应具有稳定且可溯源的特点 以保证检测结果的正确性 通常使用与仪器配套的商品化校准品 对于校准品定值的来源 应由新鲜全血经参考测量系统传递赋值 不应由前批号的校准品或其他厂商的校准品传递 血液分析仪相关检测参数的参考方法见表3 13 我国食品药品监督管理局于2008年发布 2010年实施的YYT0701 2008号文件 规定 血液分析仪用校准物 品 的主要指标见表3 14 1 其主要特征见表3 14 3 不精密度检测4 校准操作要求如果C R 1 0 则当前校准因子必须成比例向下调节 如果C R 1 0 则当前校准因子必须成比例向上调节 将校准品定值的可信限与分析仪测得每项参数的可信限结合 可得到校准值的95 可信限 5 验证特殊检测项目如白细胞分类计数和网织红细胞计数 见表3 13 二 室内质量控制目的和方法质控目标就是要监测仪器检测的准确性或精密度 或两者 是否失控1 用稳定化全血质控品进行质控 1 质控品测定频率 2 结果解释2 用病人全血标本进行质控 1 配对比较法 2 加权浮动均值法 3 监测参考区间法 4 监测白细胞分类计数法3 室间质量评估是评价实验室检测准确性的独立方法 三 血液分析仪性能评价1994年 ICSH公布了血液分析仪评价指南 2010年CLSI又对血液分析仪的性能评价指标进行了修订 其主要包括总体评价 性能评价等 一 总体评价评价内容包括 仪器基本情况 仪器手册 方法学 评价步骤 技术评价计划包括 校准 校准品和质控品 试剂 标本及处理 常用细胞计数参数评估标本的浓度分布范围 表3 15 记录原始结果 预评价和性能评价 表3 16 二 性能评价性能评价是评价血液分析仪的主体内容 包括厂商确认和用户验证 2010年CLSI规定的用户验证指标如下 1 空白检测限空白检测限 LoB 又称为本底 是指空白试剂和电子噪音的作用 是导致仪器检测结果假性增高的原因 LoB与准确的定量检测低限是不同的 2 携带污染是指所检测的前一个标本对下一个标本检测结果的影响 通常用携带污染率 表示 用于评价携带污染的高值 低值标本通常取自临床 具体标本浓度分布范围见表3 17 3 精密度 重复性 精密度评价包括批内 批间精密度和总精密度评价 理论上 批内或批间精密度研究范围应覆盖整个生理和病理范围 不同批次的标本应包括高 中 低值 在同一批内 所有标本应有相似结果 4 检测下限与定量检测下限 1 检测下限 LLoD 是指一定概率下标本可被检出的最低浓度 在血液分析仪上 是指可与本底区分开的最低血细胞浓度值 CLSIEP17文件规定 LLoD LoB的均值 LoB标准差 SD 的1个常数倍数 正态资料常数 1 645 2 定量检测下限 LLoQ 是指标本中能被准确定量的最低浓度值 且定量结果在可接受的精密度和准确度范围内 5 分析测量区间 AMI 分析测量区间 AMI 也可用分析测量范围 AMR 表示 观察仪器在覆盖浓度范围内检测结果的一致性 以得到仪器的最佳测试范围 该范围越宽越好 AMI是厂商遵照FDA要求测试并载入仪器手册的一项技术指标 用户无需调整 CLIA 88对此也不做要求 6 可比性是反映仪器检测结果与使用常规程序检测结果达到一致性的能力 所用仪器分为 待测 新系统 血液分析仪 TAA 和比对 原系统 血液分析仪 CAA 用于评价可比性和准确性的相关参数及参考方法见表3 13 一般情况下 TAA与CAA比对 TAA与参考 最佳 方法比对 其检测结果的差值应控制在表3 18的范围 当白细胞分类计数结果出现表3 19的变化时 则需要以显微镜法与TAA检测结果进行比对 7 不同检测模式的比较对血液分析仪的两种模式 全血模式和稀释血模式 进行评估 8 对异常标本和干扰物的评价尽可能多检测能代表所有临床检验的预期范围的标本 可对异常标本或已知干扰物质的标本用仪器进行专门研究 表3 6 9 临床可报告区间临床可报告区间 CRI 是为直接获取某种方法的分析测量区间 通过采用稀释 浓缩等方法处理标本后 检测到的可作为结果向临床报告的量值范围 10 参考区间血液分析仪检验指标参考区间 RI 的制定 不同于化学 免疫学等具有方法依赖性的指标 制造商可提供相应信息 但用户必须对其在受检者人群中的适用性进行评价 包括年龄 特别是新生儿 性别 种族等因素对血液分析仪检测结果的影响 并考虑个体内及个体间的差异 三 白细胞分类计数性能评价2010年 CLSI发布CLSI H20A2 白细胞分类计数 百分率 参考方法和仪器评价方法 文件 建议用已知不精密度和偏倚的白细胞分类计数参考方法 评价血液分析仪的白细胞分类计数性能 灵敏度和特异性 白细胞分类计数的评价内容见表3 20 CLSI H20文件也是我国卫生部2005年标准文件WS T246 白细胞分类计数参考方法的主要依据 第五节血液分析仪检验的临床应用目前 被批准用于临床的血液分析仪检测参数 如红细胞计数 血小板计数 白细胞计数和分类计数 百分率和绝对值 网织红细胞计数 百分率和绝对值 等 其临床意义已经明确 随着血液分析仪检测原理和技术的发展 新近开发的多种检测参数 也已经或正在经受临床实践的验证 以下简介新参数的独特临床应用价值 一 红细胞系列参数 一 红细胞体积分布宽度红细胞体积分布宽度 RDW 是红细胞体积异质性的参数 即反映红细胞大小不均的客观指标 RDW多采用RDW CV和RDW SD表示 图3 39红细胞直方图及RDW分类 1 RDW CVRDW CV是红细胞在体积分布曲线上1SD的分布宽度与MCV的比值 正常RDW CV 11 5 14 5 RDW CV易受MCV大小的影响 小红细胞增多时因为MCV减小 极易放大RDW CV的改变 相反 大红细胞增多时会平衡掉曲线宽度的变化 从而减小RDW CV 2 RDW SDRDW SD是独立于MCV的RDW表示方法 RDW SD是以红细胞分布的峰值相当于100 时的20 界限的分布宽度 以fl表示 正常RDW SD 42 5 fl RDW CV和RDW SD都是红细胞大小不等 红细胞大小变化 的精确指标 RDW增大提示存在混合细胞群 若存在两种细胞群 无论是小细胞群混合正常细胞 还是大细胞群混合正常细胞 都会使分布曲线增宽而RDW增大 因为RDW SD测量的是红细胞体积分布曲线的较低部分 所以其对少量大细胞或小细胞的存在更加敏感 RDW SD对于Ret数量的增加极度敏感 因为Ret的MCV较大 会使分布曲线的基底增宽 RDW CV对于小细胞 大细胞和Ret少量细胞群的存在不敏感 但是它可以更好地反映细胞大小分布的总体变化 从而可较好的用于大细胞或小细胞性贫血的诊断 正常红细胞分布宽度变化很小 作为红细胞大小不等的定量报告 慢性疾病 急性失血 再障 镰状红细胞疾病的红细胞体积分布宽度可以正常 RDW与MCV结合 对贫血分类和鉴别诊断有临床意义 Bessman 1983年 提出了贫血的MCV RDW分类法 表3 21 二 红细胞平均值1 红细胞平均血红蛋白浓度 CHCM CHCM是RBC HC直方图的平均值 参考区间在280 410g L 低于280g L提示低色素红细胞 高于410g L为高色素红细胞 2 小细胞 低色素细胞比值 M H 在流式细胞术激光散射法线性散点图中 M H表示小红细胞低色素的程度 有助于区别 珠蛋白生成障碍性贫血和缺铁性贫血 小红细胞高色素可筛检球形红细胞性贫血 欧洲已将其列入贫血和血透病人的诊治指南 三 网织红细胞参数1 未成熟网织红细胞未成熟网织红细胞 IRF 是光散射法血液分析仪根据网织红细胞内RNA含量不同 引起荧光染色强度的差异 而得出的参数 在分析骨髓造血状态的血液学参数中 RET优于白细胞计数和血小板计数 而IRF的变化较RET 变化更具重要意义 2 网织红细胞成熟指数 RMI 是光散射法血液分析仪根据网织红细胞内RNA荧光染色强度而得出的参数 其临床意义与IRF相同 3 网织红细胞平均血红蛋白量 CHr 可实时评价骨髓红系造血的功能状态 是反映缺铁性贫血的灵敏指标 4 网织红细胞血红蛋白含量 RET He RET RET 和IRF仅反映了网织红细胞数量变化 而RET He则反映网织红细胞的质量变化 RET He低于30 5pg为补充铁的最佳临界值 其灵敏度和特异性高 与CHr有很好的相关性 RET He在缺铁性贫血治疗过程中具有更重要意义 5 MSCV和MRV健康人的MSCV比MCV大 但有些病人则相反 如当MSCV MCV时 诊断遗传性球形红细胞增多症的灵敏度为100 特异性为93 3 表明MSCV和MCV是高度有效的诊断指标 MRV也是观察促红细胞生成素疗效的稳定且较灵敏的指标 四 血红蛋白分布宽度HDW是反映红细胞内HGB含量异质性的参数 HDW和RDW明显增高见于遗传性球形红细胞增多症 属于小细胞不均一性高色素性贫血 HDW对镰形细胞贫血 轻型珠蛋白生成障碍性贫血也有一定诊断意义 五 研究参数血液分析仪的研究参数有 小红细胞贫血因子 MAF 计算细胞大小和血红蛋白含量 对小红细胞贫血分类有帮助 血液透析病人MAF与EPO治疗反应呈现良好的关系 网织红细胞分布宽度标准差 RDWR s 或网织红细胞分布宽度变异系数 RDWR CV 其增高可提示缺铁性贫血 正常或减低可提示杂合子珠蛋白生成障碍性贫血 二 白细胞系列参数1 中间细胞群 MID 是三分群血液分析仪的指标 由于各种仪器使用的稀释液和溶血剂对白细胞膜作用不同 中间细胞群的确切细胞组成并不明确 因此 出现MID异常或报警 需要特别注意血涂片显微镜复查 2 未成熟粒细胞 IG IG有助于筛检 监测类白血病反应 炎症 肿瘤 骨髓异常增生性疾病 组织坏死等 IG超过3 对提示败血症非常特异 有助于微生物检测评价 3 造血祖细胞 HPC 是反映以CD34阳性为主的造血祖细胞参数 定量检测外周血液HPC的变化 特别适合于监测造血干细胞移植过程中 供体在接受药物动员后 外周血液造血干细胞的变化 以便于选择采集时机 与流式细胞仪检测结果具有较好的相关性 4 平均过氧化物酶活性指数平均过氧化物酶活性指数 MPXI 用于诊断髓过氧化物酶部分和全部缺乏症 中性粒细胞激活等 三 血小板系列参数1 血小板平均体积血小板体积 MPV 与血小板数量呈非线性负相关 与血小板功能呈正相关 与PLT P LCR和PDW等指标联合应用意义更大 表3 22 2 未成熟血小板比率 IPF 可反映骨髓增生状