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此文档收集于网络,仅供学习与交流,如有侵权请联系网站删除实验一 无蛋白血滤液的制备(无蛋白血滤液制备的基本原理是以蛋白质沉淀剂沉淀蛋白,用过滤法或离心法除去沉淀的蛋白。常用的方法有三氯醋酸法、氢氧化锌法、黑灯改良法及福林-吴宪法(钨酸法),本实验采用最后一种方法,即钨酸法制备无蛋白滤液。实验原理: 钨酸钠与硫酸混合,生成钨酸。血液中的蛋白质在pH小于其等电点的溶液中时,可被钨酸沉淀。沉淀液过滤或离心,上清液即为无色、透明、pH约为6的无蛋白血滤液。可供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素、尿酸及氯化物等项目测定使用。实验试剂:10%钨酸钠溶液,1/3 mol/L硫酸溶液实验对象:新鲜鸡血操作步骤: 取50ml锥形瓶或大试管1支,吸取充分混匀的抗凝血1份(1ml),擦净管外血液,缓慢放入锥形瓶或试管底部 准确用10ml移液管加入7ml蒸馏水,随加随摇,但也不能过于剧烈 再加入1ml硫酸溶液,随加随摇 放置约5min后,若振摇亦不再发生泡沫,说明蛋白质已完全变性沉淀,用滤纸过滤后即得完全无色的无蛋白血滤液实验过程(附图):1.取 样这是未加入蒸馏水的抗凝血,可观察到血色鲜艳明亮,没有凝血块或杂质2.加清水混匀蒸馏水随加随摇于血液中后可以观察到无任何变化,只是血液颜色稍稍变浅,血液粘稠度有所下降3.加入硫酸溶液加入硫酸溶液并混匀后,可以观察到血液颜色变得暗淡,但并没有出现凝聚等反应现象,这一步主要是为钨酸(钠)与血液中的蛋白反应提供酸性环境。4.加入钨酸钠溶液加入钨酸钠溶液并且混匀后,可观察到血液颜色变为棕褐色,且变得浑浊有气泡;容器壁上有痕渍,这是因为血液中的蛋白与钨酸作用而发生沉淀的结果5.过滤收集清液滤过后可看到离心管中的血清液无色澄澈,故实验操作成功附录:以上实验过程(图片)是第二次操作的结果,第一次操作时因为加入试剂时过快,没有做到随加随摇,故有很多气泡,效果不是很理想,遂又操作了
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