基因组学-黄学辉-bio2000.ppt

2016 09 21 基因组学黄学辉中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态所 国家基因研究中心 2016年Bio2000分子生物学课 生命的奥秘蕴藏于 四字天书 中 基因组复杂度提升 第一代测序技术 Sanger法 读长能达到近1000bp 序列高度准确 千分之一的错误 一代测序的通量低 一天几Mb数据 费用高 DNA测序方法的发明人 FrederickSanger 1918年8月13日 2013年11月19日 是一位英國生物化學家 曾經在1958年及1980年兩度獲得諾貝爾化學獎第一次是发明了蛋白质序列测定 第二次是发明了DNA序列测定 WellcomeTrustSangerInstitute 第二代测序技术 读长超过100bp 序列有一定错误 百分之一的错误 通量高 Tb级数据量 费用比一代测序低了几个数量级 第三代测序技术 目前仍无真正意义上的 成熟的三代测序技术目标 保证高通量的同时实现长片段 单分子和测序的便捷性 参考基因组的测序战略 基于物理图的克隆连克隆法全基因组鸟枪法 CraigVenter 染色体 克隆连克隆测序战略示意图 人类基因组计划 人类基因组计划 humangenomeproject HGP 于1990年正式启动的 美国 英国 法国 德国 日本和我国科学家共同参与了这一预算达30亿美元的人类基因组计划 人类基因组计划与曼哈顿原子弹计划和阿波罗计划并称为三大科学计划 被誉为生命科学的 登月计划 人类基因组计划 2000年6月26日 参加人类基因组工程项目的美国 英国 法兰西共和国 德意志联邦共和国 日本和中国的6国科学家共同宣布 人类基因组 草图 的绘制工作已经完成 序列错误率低于万分之一 覆盖95 的区域 每个Gap小于150kb 完成图于2003年左右公布 比预计提前2年 全基因组鸟枪法 matepair 3k 8k 20k S75rawreads Contigs Scaffolds Superscaffolds Fosmidends 40k rawreads Fosmid Superscaffolds scaffolds Assemblystrategy Chromosomes Linkagemap 完成参考基因组测序的动物 完成参考基因组测序的植物 最后的一根硬骨头 小麦基因组 异源六倍体17Gb的基因组 80 为重复序列 小麦基因组测序计划 目前3B 法国 染色体草图初步完成 基因组学 参考基因组测序 基因组浏览器 可视化 转录组和表观组 使用亚硫酸氢盐处理DNA结合鸟枪法测序已成为研究DNA甲基化的新方法 先将基因组DNA片段变性 然后用亚硫酸氢盐处理 可以将其中未甲基化的胞嘧啶 Cytosine C 转换成尿嘧啶 Uracil U 再通过PCR技术扩增后把尿嘧啶转换成胸腺嘧啶 Thymine T 相反 未转化的甲基胞嘧啶 最终以胞嘧啶形式被检测到 通过与参考基因组的比较分析 可以获得全基因组中不同时空下的甲基组化图谱 RNA Seq BS Seq HumanENCODEproject DNA元件百科全书 英语 EncyclopediaofDNAElements 简称为ENCODE计划 是一个由美国国家人类基因组研究所在2003年9月发起的一项公共联合研究项目 旨在找出人类基因组中所有功能组件 这是既完成人类基因组计划后国家人类基因组研究所开始的最重要的项目之一 所有在该项目中产生的数据都会被迅速的在公共数据库中公开 2012年9月5日 该项目的初步结果被整理为30篇论文并发表于 自然 基因组生物学 及 基因组研究 中 这些发表的论文显示人类基因组内的非编码DNA至少80 是有生物活性的 而非像之前认为的仅仅是 垃圾 这个结果非常重要 因为人类基因组中98 的DNA是非编码的 意味着它们并不直接编码任何蛋白质序列 ENCODEdataintheUCSCGenomeBrowser 物种内部的遗传多样性 帮助我们获知很多生命活动的遗传机制 在医学和农学上有它的实际应用价值 基因组重测序在生物领域的应用 通过了解人种差异及群体迁移等历史 驯化 从野生种到农家种 Along termselectionexperimentinawiderangeofmorphologicalandphysiologicaltraits Wildrice Domestication Landrace Elitevarities Geneticimprovement 基因组重测序和基因分型 Thenextgenerationsequencingtechnologies 欢迎各位同学前来参观中国科学院植生所 物所 来参 位同 前来 Reference Reads 观中 中国 Alignment 欢迎各位同学前来参观中国科学院植生所 物所 来参 位同 前来 观中 中国 Variation 生 物 其他复杂变异 转座子 一种可移动的遗传因子 TheTEinsertioninthePigmentGeneaffecttheSynthesisofthePurplePigment Feschotteetal Nat Rev Genet 3 5 329 341 2002 转座子类型DNA转座子逆座子植物基因组水稻 40 高粱 60 玉米 80 小麦 80 ALocalViewofTransposonInsertionPolymorphisms TIPs 序列变异类型和频率 ForwardGenetics associateunderlyinggeneticfactorswithaspecifictrait AssociationmappingNaturalpopulation e g ecotypes landraces cultivars LinkagemappingArecombinantpopulationfromexperimentalcrosses e g F2 RIL TraditionalmethodsPCRRFLPIRAPDDNAsequencingDNAchip Genotyping Genotypingistheprocessofdeterminingdifferencesinthegeneticmake up genotype ofanindividualbyexaminingtheindividual sDNAsequenceusingbiologicalassaysandcomparingittoanotherindividual ssequenceorareferencesequence Itrevealstheallelesanindividualhasinheritedfromtheirparents 基因型鉴定方法 HuangandHan 2014 Recombinationpopulations F2Backcross BC Doublehaploid DH Recombinantinbredlines RIL Chromosomesegmentsubstitutionlines CSSL Singlesegmentsubstitutionlines SSSL Near isogeniclines NIL ThebasisforMendel sfirstgeneticexperiments 150yearsagoThekeytothestudyofgenesandgeneticvariationtodayinplant 重组自交系的图谱和连锁分析 QTL 数量性状位点 初定位 对多个性状同时进行QTL定位 定位分辩率主要取决于群体大小和基因型密度 对主效的几个QTL构建替换系后产生大样本进行图位克隆 ChromosomeSegmentSubstitutionLines CSSLs Xuetal BMCGenomics2010 RecombinationmapofCSSL i C50 AlargesegmentwassubstitutedbyNipponbaregenomeonChr6 Xuetal BMCGenomics2010 CSSL iandCSSL j 1 163 670SNPsbetweenparents QTLs Plantheight Headingdate sd1 McCarthyetal NatRevGenet 9 356 369 2008 Genome wideassociationanalysisoffatmassidentifiedthreeobesitygenes Genome wideassociationstudyinHuman HapMap 基因组变异与标签位点 大型矩阵 单倍体与变异位点 ThepioneerworkinhumanGWAS 7种常见病 躁郁症 冠状动脉病 局限性回肠炎 高血压 风湿性关节炎 1型糖尿病 2型糖尿病 每种病2000个病人和3000个正常人 对全基因组50万个SNP位点进行扫描和关联分析 7种病一共定位到了24个位点 2005年 Science杂志报道了第一篇GWAS研究 年龄相关性黄斑变性 人类GWAS的发展历程 截至2010年底 单是在人类上就有1212篇GWAS文章被发表 涉及210个性状 目前GWAS研究主要采用两阶段或多阶段方法 在第一阶段用覆盖全基因组范围的SNP进行对照分析 统计分析后筛选出较少数量的阳性SNP进行第二阶段或随后的多阶段中采用更大样本的对照样本群进行基因分型 然后结合两阶段或多阶段的结果进行分析 GWAS最大的局限性 同一疾病由大量的 不同的低频变异决定 比如1万人得了同一种病 其中10人是由于基因A发生了变化 20人是由于基因发生了变化 而统计学对低频变异毫无办法 唯有提高样本量 复杂性状的GWAS 极大的样本量 体重指数 34万人 97个位点 总共解释2 7 的表型变异 ExperimentaldesignforGWASinplant SchemeADeepsequencingfor1000linesHigh qualitySNPsGenotypedatasetwithraremissingdataSchemeBDeepre sequencingfor30linesSelectionof 1MtagSNPsDesignofgenotypingmicroarrayGenotypingof1000linesusingmicroarraySchemeCLow passre sequencingfor1000linesAnewanalyticalframeworkHigh qualitySNPswithfewmissingdata Genome wideassociationstudyinArabidopsis AGWAstudyof107phenotypeswascarriedoutinArabidopsisthalianaAnexample allelicdiversityofresistancetomicrobialinfection Atwelletal Nature465 627 631 2010 Todescoetal Nature465 632 636 2010 Arabidopsis1001genomes TheframeworkforriceGWAS Ricegermplasm Re sequencing Discoveryofcommonvariants SNPs SNPGenotyping Constructionofhaplotypemap AssociationStudy Findingtherelationshipbetweenphenotypeandgenotype Candidategenecapture Selectingcausalgenesbyre annotationofassociatedloci Validatetheeffectofcandidategenes UsinggenetictransformationorT DNAmutant Moderncultivars traditionallandraces Germplasmcollection Genotype Phenotype Wholegenomescreening Phenotypepredictionthroughstatisticalmodeling Improvedvarieties Validationinrelatedsampleswithknowngenotypesandphenotypes Molecular designedbreeding Miningcandidategenesthroughexpressionprofilesorfinemapping ValidationthroughT DNAmutantsorgenetictransformation GMorMASforvalidatedgenes GWAS Wholegenomeprediction 基因组的产业化应用 分子育种 紫花 白花 紫叶柄 绿叶柄 抗病 芝麻中复杂性状的遗传解析 a c b 芝麻品种材料的群体结构 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Yieldcomponents Morphologicalcharacteristics Colorationanddiseaseresistance Growthcycle Fattyacidcomposition Oilseedcompound 芝麻中56个农艺性状的全基因组关联分析 a Lipase SiPPO LTP LTP SiNST1 Lipase Log P b c d e GWASonoilcontent SiPPO SiNST1 Highoilallele ACA Thr Lowoilallele AAA Lys 芝麻中控制油份含量的主要位点 b c a Pearsonr Oilcontent 芝麻中控制脂肪酸含量的主要位点 Onecapsuleperaxil Threecapsulesperaxil a c 芝麻中控制蕨果数的主要位点 基因组 杂种优势现象 分子水平深入解析杂种优势的遗传基础 母本 杂交稻 父本 母本 杂交稻 父本 分子层面解析 杂种优势的高效利用为我国的粮食安全做出了巨大贡献 杂交水稻育种技术的成功是我国近几十年来取得的一项重要科技成就 杂交稻的高产来自对水稻杂种优势现象的利用 品种1 父本 杂交稻 子一代 品种2 母本 水稻存有大量的品种材料 蕴含丰富的遗传多样性 子一代的产量表现超越双亲 这一现象称为杂种优势 水稻品种杂交形成的子一代具有杂种优势 高精度的水稻基因组变异图谱 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 染色体 遗传群体材料 亲本 破解水稻杂种优势之谜 全面 系统地鉴定出了控制水稻杂种优势的主要遗传位点 发现来自母本的少数等位基因通过不完全显性 改善了水稻植株的结实率 穗粒数及株型 实现了子一代的优势表现 Nature 201