中图版选修一 微生物的分离与纯培养 学案.doc

课题1微生物的分离与纯培养【课程目标】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。【课题重点】无菌技术的操作【课题难点】无菌技术的操作基础知识 一、培养基1概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。可分为 培养基和 培养基。 2营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。 3培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基ph调至 、培养细菌时需将ph调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。思考1从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？来源:z#xx#k.com【补充1】碳源：如co2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。【补充2】培养基包括哪些营养成分：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等，蔗糖是提供碳源的，也就是提供能源的，琼脂是凝固剂氮源：如n2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有c、h、o、n的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。 二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题： (一)获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下：来源:学#科#网z#x#x#k 1对实验操作的 、操作者的 和 进行 。 2将用于微生物培养的 、 和 等器具进行 。 3为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。4实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。 (二)消毒和灭菌1消毒是指 。常用的方法有 、 、 消毒法。2灭菌是指 。常用的方法有： 、 、 灭菌。分别适用于那些用具？思考2无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？思考3利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？思考4物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止 实验操作-大肠杆菌的纯化培养：本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和 两个阶段进行。一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是： 、 、 、 、 。思考5在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？思考6牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？2 倒平板：待培养基冷却至 左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：在火焰旁右手拿 ，左手 ；使锥形瓶的瓶口 ；左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板 。思考7锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？思考8倒平板的目的是什么？思考9若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？思考10配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？二、纯化大肠杆菌 微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。 1平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是：将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌种试管口通过火焰达到 的目的。将冷却的接种环伸入到 。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。将平板 培养。思考11取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？最后灼烧接种环的目的是？ 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？2稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。系列稀释操作：取盛有 ml水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。用灼烧冷却的移液管吸取 ml菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。从101倍液中吸取 ml菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。思考12系列稀释操作的注意事项是什么？思考13涂布平板操作的步骤是什么？结果分析与评价1培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？2在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？3培养12h和24h后的菌落大小？；菌落分布位置？原因？思考14在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？思考15频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？基础自测一、选择题、1下列有关培养基的叙述正确的是( ) a培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 b培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 c固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 d微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌5制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( ) a计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 b计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 c计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 d计算、称量、灭菌、溶化、倒平板8有关稀释涂布平板法，叙述错误的是( ) a首先将菌液进行一系列的梯度稀释 b然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面来源:zxxk.com c再放在适宜条件下培养 d结果都可在培养基表面形成单个的菌落10将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37恒温箱的目的是( ) a对比观察培养基有没有被微生物利用 b对比分析培养基是否被杂菌污染c没必要放人未接种的培养基 d为了下次接种时再使用11关微生物营养物质的叙述中，正确的是a.是碳源的物质不可能同时是氮源 b.凡碳源都提供能量c.除水以外的无机物只提供无机盐 d.无机氮源也能提供能量12作为自养生物唯一碳源的是（ ）a糖类 b 石油 c 二氧化碳 d 花生粉饼13大肠杆菌的代谢类型是（ ）a 自养需氧 b异氧严格厌氧 c异养需氧 d 异养兼性厌氧15下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（ ）a含碳有机物 b蛋白胨 c含碳无机物 d花生粉饼等天然物质16平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（ ）a利于大肠杆菌的接种 b防止杂菌污染 c利于培养的冷却 d 防止皿盖冷却水倒流入培养基二、非选择题2019世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。(1)根据你所掌握的知识分析导致生产失败的根源是什么?(2)由此得出研究和应用微生物的前提是防止 21在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?22在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线?20(1)导致生产失败的根源在于发酵物中混入了