环境监测用培养基能确认方案(2012.11.08).doc

环境监测用培养基性能确认方案编码： VP/OT-12-T009-00页码：12/89项目Item人员Personnel部门/岗位Dept./Position签名Signature日期Date方案起草Prepared byQC/生测主管年 月 日（Y）（M）（D）QA/主管年 月 日（Y）（M）（D）方案审核Reviewed byQC/经理助理年 月 日（Y）（M）（D）QA一部/副经理年 月 日（Y）（M）（D）QA一部/经理年 月 日（Y）（M）（D）方案批准Approved by质量受权人年 月 日（Y）（M）（D）颁发部门Issued byQA一部生效日期Effective Date年 月 日（Y）（M）（D）分发部门Distributed to QA一部、QC制作备份：2份Copies prepared: 2pcs目 录1. 概述33参考文件44小组成员和各部门职责45确认时间安排56确认内容56.1确认前确认56.2确认过程67偏差处理及变更控制988确认结果评价98附件1：人员培训确认表1附件2：文件确认表2附件3：设备确认结果表3附件4：试验用菌种确认结果表4附件5 ：培养基确认结果表5附件6：环境监测用培养基性能确认结果记录61. 概述33参考文件44小组成员和各部门职责45确认时间安排46确认内容56.1确认前确认56.2确认过程57偏差情况88变更89确认结果评价8附表1：人员培训确认表1附表2：文件确认表2附表3：设备确认结果表3附表4：试验用菌种确认结果表4附表5 ：培养基确认结果表5附表6：环境监测用培养基性能确认结果记录61. 概述在药品的生产过程或检验过程中，沉降菌检测和浮游菌检测是环境监测很重要的确认方法，。沉降菌和监测过程中由于培养基在层流下风淋4小时后，会造成水分的丢失，可能会影响微生物的生长；浮游菌在采样监测过程中以及培养过程中，由于取样时间过长将导致培养基都会有一定程度上的干燥失水水分和营养成分的散失，从而使影响微生物的存活数量下降生长与繁殖。本方案拟对完成采样及培养后的环境监控培养基进行性能确认，评价本公司现有的微生物环境监测方法的可靠性。另外，根据新版GMP要求，当环境中有抗生素时，要向监测用培养基中添加一定量的中和剂，用以中和或尽量减少抗生素的抗菌作用。目前，我公司107车间拟按照新版GMP要求申报认证，该车间为头孢类生产车间，环境中含有一定量的抗生素粉尘，拟在该车间粉尘暴漏露量大的关键区域（隔离器内部）使用含有中和剂的环境监控平皿。本方案根据平皿制备商的验证数据，选用2.5%头孢菌素酶TSA平皿进行验证，对完成采样及培养后的环境监控培养基进行性能确认。此次主要验证本公司自制的TSA 琼脂平皿和由上海诺狄生物科技有限公司、上海永旭医学诊断用品有限公司生产的预灌装无菌平皿，其中预灌装无菌平皿分为：1）不加中和剂的TSA 琼脂平皿（上海诺狄生物科技有限公司、上海永旭医学诊断用品有限公司均有提供）；2）加2.5%头孢菌素酶的TSA 琼脂平皿（由上海永旭医学诊断用品有限公司提供）。本方案拟验证的培养基如下：1.1 胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA)平皿1 来源：1）本公司自制；2）上海诺狄生物科技有限公司；3）上海永旭医学诊断用品有限公司参考10版GMP指南，考虑到药品的生产和质量与国际接轨的需求，本厂预新增胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA)为环境微生物监测培养基，本次确认将采用胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA)对被监测环境进行采样监测，并对经采样培养后的胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA)进行适用性检查，检查合格后方可用于环境微生物监测。1.2 2.5%头孢菌素酶TSA平皿2 来源：上海永旭医学诊断用品有限公司上海永旭医学诊断用品有限公司已针对我公司头孢类以及其他企业的A级粉尘暴漏区域的品种的抑菌性，环境监控平皿进行了培养基添加酶的验证试验对环境监控平皿中添加中和剂的种类和用量进行了初步筛选（验证报告名称及编号为：培养基平皿添加头孢菌素酶验证报告YC-YZ-BC-2012-11），）。其验证结果表明：当粉尘采集量小于0.000625g/皿时，2.5%头孢菌素酶TSA平皿能够中和头孢呋辛钠、盐酸头孢吡肟、硫酸头孢匹罗碳酸钠、头孢米诺钠、头孢西丁钠、头孢曲松钠、头孢哌酮舒巴坦钠、头孢孟多、头孢硫脒对微生物环境监测的影响。以此为依据，参考培养基平皿添加头孢菌素酶验证报告YC-YZ-BC-2012-11，本次确认拟将采用终端灭菌的2.5%头孢菌素酶TSA预灌装平皿对抗生素生产关键区域（A级药粉暴漏区域隔离器内部）的环境进行监测，并对经采样培养后的2.5%头孢菌素酶TSA预灌装平皿培养基进行适用性检查，若此平皿能减少抗生素的抑菌作用，则合格后可用于抗生素生产关键区域（A级药粉暴漏区域隔离器内部）的环境监控。1.3 最差条件选择根据“培养基管理SOP-QC-017-V01”规定：制备好的培养基应保存于225密闭容器内，防止水分散失过快，并在1周内使用完。为确认在最大储存期限条件下的有效性，此次验证采用计划如下：（1）自制培养基保存8天后进行操作。（2）外购培养基先采用在有效期内的培养基进行确认试验，以确定外购培养基是否可用于环境微生物监测。（3）外购培养基采用已过有效期（根据供应商产品说明书，在225保存条件下，其有效期为3个月），在第91100天选择任何一天进行试验。1.34试验方法结合日常检测方法，最长采样时间或最大采样体积为最差条件，本试验对每种培养基按如下两种方式进行确认：（1）放在层流下风淋4小时，经3035培养120h后进行确认其微生物促生长性能是否满足要求；（2）使用浮游菌采样器，在层流下采样1000L，经3035培养120h后进行确认其微生物促生长性能是否满足要求。2确认目的按拟定的方案进行确认，经规定的沉降菌和浮游菌采集后，其性能能够满足微生物生长要求。3参考文件3.1 SOP-QA-017-V01验证管理规程3.2 药品GMP指南（2011版）3.3 SOP-QC-017-V01培养基管理规程3.4 SOP-QA-031-V00洁净区微生物监测标准操作规程3.5 YC-YZ-BC-2012-11培养基平皿添加头孢菌素酶验证报告4小组成员和各部门职责4.1小组成员职位姓名部门具体职责组长代珊QC负责确认总协调工作，并审确认证方案和确认报告。组员彭艳妃QC负责确认方案和确认报告的起草，确认数据的收集及处理。全海军QA黄微QCQC负责验证样品的检验与验证记录的填写。吴东丹李艳姣谢文娟莫萌谢文娟QAQC负责QC与车间内验证采样，参与偏差的调查。谢文娟全海军QCQA吴东琴QA负责验证方案和验证报告的归档保存。监督验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。4.2 验证委员会姓名职务职责颜杰质量受权人1.负责确认方案及报告的批准；2.负责确认过程中出现的偏差的批准放行。马立如QA经理1.负责确认方案的审核；2.负责确认过程中出现的偏差的评估。张德志QA副经理5确认时间安排时 间工作内容2012年1011月方案起草、审批2012年1011月1112月确认过程2012年1112月报告起草、审批6确认内容6.1确认前确认6.1.1培训确认 本次确认内容是否已对相关人员进行培训，培训记录是否归档。 检查确认结果记录在附表附件1人员培训确认表中。6.1.2文件确认对支持本次确认操作及管理类文件进行确认，确保确认前与本次验证相关的文件均已经过批准。检查确认结果记录在附表附件2文件确认表中。6.1.3仪器设备确认检查所涉及的设备是否符合实验要求，确认结果填写在附表附件3 设备确认结果表中。可接受标准：设备应经验证，在校准有效期内。6.1.4试验用菌种确认检查所涉及的试验用菌种是否符合实验要求，确认结果填写在附表附件4试验用菌种确认结果表中。可接受标准：菌种形态特征应良好、菌种代数不得超过第五代。6.1.5培养基确认检查所涉及的培养基是否符合实验要求，确认结果填写在附表附件5培养基确认结果表。可接受标准：培养基应通过适用性检查。6.2确认过程6.2.1培养基平板的准备6.2.1.1 由QC生测人员按SOP-QC-017-V01培养基管理规程进行培养基平板的制备，每皿加入培养基量约为平皿高度的三分之一（2530ml/皿），制备的培养基平皿为胰酪胨大豆琼脂培养基（TSA）。将此种培养基平皿于3035预培养48小时后，在百级层流下逐个认真观察平板，检查其是否有菌落生长，凡是发现有长菌，或可能被污染，或干裂者一律废弃，检查合格的方可使用。检查合格的培养基平板装于已灭菌不锈钢铁箱内，用医用胶布封严不锈钢铁箱(确保箱内物品在运送过程中不受污染)，将其放置在20的阴凉室内保存。6.2.1.2 由QC生测人员检查所购预灌装无菌TSA平皿和2.5%头孢菌素酶（TSA）平皿的包装是否完好、标签是否完整、标签上的字迹是否清晰，确定无误后，将培养基平板按要求储存。由QC将培养基平皿交接给QA人员，由QA运送至各采样区域，模拟采样前，监测人员须再次检查培养基其是否有菌落生长，凡是发现有长菌，或可能被污染，或干裂者一律废弃。6.2.2 培养基层流采样6.2.2.1胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA)平皿层流采样胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA)平皿主要用于非抗生素生产区域和抗生素生产非药粉暴漏露区域的环境监测，监测过程水分和营养成分流失是影响微生物生长的最大因素，故此次验证选择在此次验证将在QC无菌检验洁净工作台内层流开启状态下进行采样操作。6.2.2.1.1沉降菌检测采样按洁净区微生物监测标准操作规程SOP-QA-031-V00进行操作。打开培养皿盖，使培养基表面在百级层流下暴露4小时（风淋4小时），将培养皿盖盖上后转移至3035培养120h，再将培养物转移至QC阳性检验室进行培养基促生长试验。采样地点：QC洁净工作台采样高度：0.81.5m。（洁净工作台内）每种培养基采样数量： 16皿/采样地点6.2.2.1.2浮游菌检测采样按洁净区微生物监测标准操作规程SOP-QA-031-V00进行操作。打开培养皿盖，使培养基在百级层流下采样1000L，将培养皿盖盖上后转移至3035培养120h，再将培养物转移至QC阳性检验室进行培养基促生长试验。采样地点： QC洁净工作台采样高度：0.81.5m。（洁净工作台内）每种培养基采样数量： 16皿/采样地点6.2.2.2 2.5%头孢菌素酶TSA平皿层流采样（请QA完善此部分内容监测点采样时段和采样位置）因目前本公司产品其抑菌性最强的是盐酸头孢吡肟/L-精氨酸原料药及其制剂，所以本次验证将选择风量大粉尘大的107车间分装室隔离系统内进行采样，且采样时须进行盐酸头孢吡肟/L-精氨酸原料药生产操作。因C-RABS在出料分装时粉尘量过大，不易做沉降菌监测，因此考虑做浮游菌监测，但浮游菌采样器内部因无法彻底灭菌，不易在出料分装时进行，因此选择在C-RABS清洗后灭菌前进行采样，采样时人员模拟分装出料的操作，以使监测结果能反应出当天该区域的动态微生物监测水平。因分装室隔离系统O-RABS内只须适宜进行沉降菌监测，不进行浮游菌监测，所以本次验证只进行沉降菌检测采样。隔离分装系统出料分装时段均会有一定的头孢类抗生素粉尘产生，因此均需考虑加入一定的头孢类抑制酶，本方案将确认分装隔离系统内C-RABS，O-RABS不同位置监测平皿所需加酶的量。6.2.2.2.1浮游菌检测采样按浮游菌监测标准操作规程进行操作。选择在C-RABS清洁后灭菌前，将以清洁消毒的便携式浮游菌采样器传入C-RABS内浮游菌采样点，放入培养皿完成采样后转移至3035培养120h，再将培养物转移至QC阳性检验室进行培养基促生长试验。采样点：107车间盐酸头孢吡肟/L-精氨酸分装隔离系统C-RABS内浮游菌监测点。采样体积：每皿采样1立方米，采样过程人员模拟生产操作，达到动态监测水平。每种培养基采样数量：16皿。6.2.2.2.12沉降菌检测采样按洁净区微生物监测标准操作规程SOP-QA-031-V00进行操作。打开培养皿盖，使培养基表面在百级层流下暴露4小时（风淋4小时），将培养皿盖盖上后转移至3035培养120h，再将培养物转移至QC阳性检验室进行培养基促生长试验。采样地点：107车间盐酸头孢吡肟/L-精氨酸分装室隔离系统内前桶段和缓冲段O-RABS内沉降菌日常监测点。采样时间：盐酸头孢吡肟出料操作全过程，不大于4小时，生产操作超过4小时时，则每碟采样4小时。采样高度：0.81.5m。（日常监测高度）每种培养基采样数量： 16皿/采样地点。6.2.3 促生长试验：6.2.3.1菌种 （1）细菌：金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003铜绿假单胞菌CMCC（B）10104大肠埃希菌CMCC（B）44102 （2）细菌芽孢：枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501（3）真菌：白色念珠菌CMCC（F）98001 黑曲霉CMCC（F）98003（4）环境鉴定菌：表皮葡萄球菌6.2.3.2菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基上，经3035培养1824小时，接种白色念珠菌至改良马丁琼脂培养基上，经2328培养2448小时，取上述培养物分别加入0.9%无菌氯化钠溶液洗下菌苔转移至空试管中作为菌悬液原液，用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至浓度（5001000）cfu/ml。接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基上，经2328培养57天，加入含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的0.9%无菌氯化钠溶液洗下孢子吸出，转移至空试管中作为菌悬液原液，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至含孢子数5001000cfu/ml的孢子悬液。6.2.3.3试验组： 采用涂布法进行接种，将含菌量（5001000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌悬液分别接种0.1ml至经采样培养后的胰酪胨大豆琼脂培养基（TSA）或2.5%头孢菌素酶TSA上，然后用无菌涂布棒快速地将其均匀涂布，每种菌悬液各采样点接种2皿，于3035培养48小时，测定菌数。6.2.3.4菌液组：（菌液组所用的培养基须使用新鲜培养基）采用涂布法进行接种，将含菌量（5001000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌悬液分别接种0.1ml至新鲜胰酪胨大豆琼脂培养基（TSA）营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基中，每种试验菌平行制备2个平板，于3035培养48小时，于规定温度下倒置培养48小时，测定菌数。6.2.3.5供试品对照组：取经采样培养后的胰酪胨大豆琼脂培养基（TSA）或2.5%头孢菌素酶TSA各采样点2皿（两种采样方式均须分不同培养基不同采样点做供试品对照），于3035培养48小时，按菌落计数法测定供试品本底菌数。6.2.4可接受标准：试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.52范围内试验组的菌落数与菌液组的菌落数比值应在0.52之间菌回收率均应在70%150%之间，则促生长试验结果有效符合要求，否则需改变沉降菌及浮游菌的采样方式，重新进行试验。注：试验组回收率（%）=（试验组平均菌落数供试品对照组平均菌落数）菌液组平均菌落数100%试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.52范围内，则促生长试验结果符合要求，否则需改变沉降菌及浮游菌的采样方式，重新进行试验。7偏差处理及变更控制偏差情况确认过程中如果有任何偏差应及时记录，分析原因，评价是否是重大偏差，并提出整改措施。重大偏差填写偏差处理单，并将偏差复印件附于确认报告中。确认过程中是否有变更，如有变更将变更在确认报告中进行说明。确认过程中如果有任何偏差应及时记录，分析原因，评价是否是关键偏差，并提出整改措施。并将偏差复印件附于验确认报告中。8变更确认过程中是否有变更，如有变更将变更再确认报告中进行说明。98确认结果评价 对确认结果进行综合评定的内容包括但不限于以下方面：确认试验是否有遗漏；是否需要进一步补充试验；确认记录是否完整；确认试验结果是否符合标准要求；确认过程中是否有偏差及对偏差的说明是否合理。根据确认结果确定及修订洁净区微生物监测等操作规程。环境监测用培养基性能确认编码： R/OT-12-T009-00页码：91/6 附表附件1：人员培训确认表人员培训确认表培训人/日期培训对象部门职责签名 全海军QA负责车间内验证采样，参与偏差的调查。莫萌高芳群郑招辉方渊朱淑敏吴东琴负责验证方案和验证报告的归档保存。监督验证过程实施及验证过程中的偏差及OOS处理。代 珊QC负责确认总协调工作，并审确认证方案和确认报告。谢文娟负责QC与车间内验证采样，参与偏差的调查。黄 艳负责验证采样、验证样品的检验与验证记录的填写。黄 微吴东丹陈志权许锐辉陈小清张东宇罗 丹刘利李艳姣袁文静培训日期培训人培训对象部门签名 全海军QA吴东琴梁善昌代 珊QC黄 微谢文娟黄 艳陈志权许锐辉陈小清张东宇罗 丹吴东丹刘利袁文静确认人/日期： QA复核人/日期： 附表附件2：文件确认表文件确认表SOP名称SOP编号是否已批准洁净区微生物监测标准操作规程SOP-QA-031-V00是 否验证管理规程SOP-QA-017-V01是 否培养基管理规程SOP-QC-017-V01是 否菌种管理规程SOP-QC-012-V02是 否XG1.D型脉动真空灭菌柜使用、保养标准操作规程SOP-QC-0343-V01是 否培养箱使用和维护保养操作规程SOP-QC-303-V00是 否电子天平使用标准操作规程SOP-QC-317-V01是 否洁净工作台使用及维护保养标准操作规程SOP-QC-304-V00是 否生物安全柜使用保养标准操作规程SOP-QC-0386-V00是 否Haier 药品保存箱使用及保养标准操作规程SOP-QC-0395-V00是 否红外电热灭菌器使用保养标准操作规程SOP-QC-0389-V00是 否评价：确认人/日期： QA复核人/日期： 附表附件3：设备确认结果表设备确认结果表设备名称型 号生产厂家及出厂编号校准有效期至验证编号霉菌培养箱MJ-300BS-II上海新苗医疗器械制有限公司（0812240005）霉菌培养箱MJ-300BS-II上海新苗医疗器械制造有限公司(100524001)生化培养箱SPX-300BS-II上海新苗医疗器械制造有限公司(0405011)电热恒温培养箱DHP-9162上海一恒科技有限公司（035184）脉动真空灭菌柜XG1.DTX-0.36B山东新华医疗器械股份有限公司（20100955）脉动真空灭菌柜XG1.DTX-0.36B山东新华医疗器械股份有限公司（20100953）生物安全柜BSC-1600A2苏州安泰空气技术有限公司（J10060420）生物安全柜BSC-1600A2苏州安泰空气技术有限公司（J10060421）生物安全柜BSC-1300A2苏州安泰空气技术有限公司（J10050341）电子天平PB602-N梅特勒-托利多仪器有限公司（1201130089）浮游空气尘菌采样器FKC-1苏州工业园区鸿基洁净科技有限公司（HJ020908-241）浮游空气尘菌采样器FKC-1苏州工业园区鸿基洁净科技有限公司（HJ021104088）浮游空气尘菌采样器FKC-1苏州工业园区鸿基洁净科技有限公司（HJ021104089）评价：检查人/日期： QA 复核人/日期：附表附件4：试验用菌种确认结果表试验用菌种确认结果表菌种名称来 源保存方法及条件菌种代数（不得超过第五代）/形态特征第一次第二次第三次金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003中国药品生物制品检定所培养基斜面28大肠埃希菌CMCC（B）44102中国药品生物制品检定所培养基斜面28铜绿假单胞菌CMCC（B）10104中国药品生物制品检定所培养基斜面1030枯草芽孢杆菌CMCC（B）