药物的鉴别试验.ppt

第二章药物的鉴别试验Identificationtestofdrug 药学院方海红 2 复习回顾 Basicregularityofdruginspection 3 学习要求 4 鉴别试验的定义鉴别试验的项目鉴别试验的方法鉴别试验的条件 主要内容 5 一 鉴别试验的定义 药物鉴别试验 根据药物的分子结构 理化性质 采用化学 物理化学或生物学 仪器分析等方法来判断药物的真伪 仅用于证实储藏有标示的药物鉴别 而不是对未知物进行定性分析 鉴别试验方法应专属 每个品种一般2 3条 6 二 鉴别试验的项目 7 一 性状 Description 1 外观指药物的聚集状态 晶型 色泽及臭 味等性质 2 溶解度是药物的一种物理性质 在一定程度上反映了药品的纯度 3 物理常数具有鉴别意义 也反映该药品的纯净程度 比旋度 吸收系数 酸值 碘值 皂化值等 8 一 性状 外观 溶解度 阿司匹林 性状 本品为白色结晶或结晶性粉末 无臭或微带醋酸臭 味微酸 遇湿气即缓缓水解 本品在乙醇中易溶 在三氯甲烷或乙醚中溶解 在水或无水乙醚中微溶 在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液中溶解 但同时分解 阿司匹林片 性状 本品为白色片 阿司匹林肠溶片 性状 本品为肠溶包衣片 除去包衣后显白色 9 极易溶解 系指溶质1g ml 能在溶剂不到1ml中溶解 易溶 系指溶质1g ml 能在溶剂1 不到10ml中溶解 溶解 系指溶质1g ml 能在溶剂10 不到30ml中溶解 略溶 系指溶质1g ml 能在溶剂30 不到100ml中溶解 微溶 系指溶质1g ml 能在溶剂100 不到1000ml中溶解 极微溶解 系指溶质1g ml 能在溶剂1000 不到10000ml中溶解 几乎不溶或不溶系指溶质1g ml 在溶剂10000ml中不能完全溶解 一 性状 外观 溶解度 10 一 性状 物理常数 布洛芬熔点 本品的熔点 附录 C 为74 5 77 5 卡巴胆碱熔点 本品的熔点 附录 C 为200 204 熔融时同时分解 熔点 固体熔化成液体的温度 熔融同时分解的温度 自初熔至全熔的一段温度 11 如 右旋糖酐20比旋度 取本品 精密称定 加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含10mg的溶液 在25 时 依法测定 附录 比旋度为 190 至200 一 性状 物理常数 药品批发 比旋度 在一定波长与温度下 偏振光透过1dm且每1ml中含旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度 12 如 替硝唑吸收系数取本品 精密称定 加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含12 g的溶液 照紫外 可见分光光度法 附录 A 在317nm的波长处测定吸收度 吸收系数 E1 1cm 为352 378 一 性状 物理常数 A ECL 药品批发 吸收系数 在给定的波长 溶剂和温度等条件下 吸光物质在单位浓度 单位液层厚度时的吸收度 13 二 一般鉴别试验Generalidentificationtest 依据 某一类药物组成中的阴离子和阳离子的特殊反应或典型的有机官能团反应 中国药典附录收载一般鉴别试验 14 例 有机酸 FeCl3反应 碱式苯甲酸铁盐 赭色沉淀 15 例 有机氟化物 反应原理地塞米松磷酸钠及其注射液 醋酸曲安奈德及其注射液 诺氟沙星 醋酸氟轻松 醋酸氟轻可的松等含氟药物将有机氟转化F 用氧瓶燃烧法进行破坏 用水或碱性溶液吸收成F 与茜素氟蓝 硝酸亚铈在Ph4 3溶液中形成蓝紫色络合物 16 17 例 托烷类生物碱类 反应原理氢溴酸山莨菪碱及其片剂 注射液 氢溴酸东莨菪碱及其片剂 注射液 丁溴酸东莨菪碱及其注射液 胶囊 硫酸阿托品及其片剂 注射液 盐酸消旋山莨菪碱注射液等药物的分子结构 都是由莨菪烷衍生物 又称托烷衍生物 与莨菪酸生成的酯 称为托烷生物碱类 Vitali反应 18 19 三 专属性鉴别试验Specificidentificationtest 依据 药物分子中的特殊基团或官能团特殊反应或典型的有机官能团反应 如 巴比妥类药物依据C 5上取代基的官能团发生反应鉴别 20 5 5 取代的巴比妥类药物 21 三 鉴别方法 化学鉴别法 光谱鉴别法 生物学法 HPLC GC鉴别法 薄层色谱鉴别法 纸色谱鉴别法 呈色反应鉴别法 紫外光谱鉴别法 红外光谱鉴别法 沉淀生成反应鉴别法 色谱鉴别法 气体生成反应鉴别法 测定生成物的熔点 荧光反应鉴别法 22 1 呈色反应鉴别法指供试品溶液中加入适当的试剂溶液 在一定条件下进行反应 生成易于观测的有色产物 1 三氯化铁呈色反应 用于酚羟基或水解后产生酚羟基 2 异羟肟酸铁反应 多用于芳酸及其酯类 酰胺类 3 茚三酮呈色反应 用于结构中含有脂肪氨基药物 4 重氮化 偶合显色反应 用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基 5 氧化还原显色反应及其它颜色反应 23 2 沉淀生成反应鉴别法 1 与重金属离子的沉淀反应 2 与硫氰化铬铵 雷氏盐 的沉淀反应 3 其它沉淀反应 多用于生物碱及其盐 具有芳香环的有机碱及其盐 24 呋塞米 鉴别 1 取本品约25mg 加水5ml 滴加氢氧化钠试液使恰溶解 加硫酸铜试液1 2滴 即生成绿色沉淀 2 取本品25mg 置试管中 加乙醇2 5ml溶解后 沿管壁滴加对二甲氨基苯甲醛试液2ml 即显绿色 渐变深红色 3 取本品 加0 4 氢氧化钠溶液制成每1ml中含5 g的溶液 照分光光度法 附录 A 测定 在228nm与271nm的波长处有最大吸收 例 呈色反应与沉淀 25 常用的荧光发射形式 1 药物本身可在可见光下发射荧光 2 药物溶液加硫酸后 在可见光下发射荧光 3 药物和溴反应后 于可见光下发射出荧光 3 荧光反应鉴别法 4 药物和间苯二酚反应后 发射出荧光及药物经其它反应后 发射荧光 26 硫酸奎宁 鉴别 1 取本品约20mg 加水20ml溶解后 分取溶液10ml 加稀硫酸使成酸性 即显蓝色荧光 2 取鉴别 1 项剩余的溶液5ml 加溴试液3滴与氨试液1ml 即显翠绿色 3 取鉴别 1 项剩余的溶液5ml 加盐酸使成酸性后 加氯化钡试液1ml 即发生白色沉淀 例 荧光反应 27 1 大多数的胺 铵 类药物 酰脲类药物以及某些酰胺类药物 可经强碱处理后 加热 产生氨 胺 气 2 化学结构中含硫的药物 可经强酸处理后 加热 发生硫化氢气体 3 含碘有机药物 经直火加热 可生成紫色碘蒸气 含醋酸酯和乙酰胺类药物 经硫酸水解后 加乙醇可产生醋酸乙酯的香味 4 气体生成反应鉴别法 28 氯氮平 鉴别 1 取本品约100mg 加碳酸钠等量搅拌均匀 置干燥试管中灼烧 管口覆以用1 1 2 萘醌 4 磺酸钠溶液湿润的试纸 试液显紫蓝色 2 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱 光谱集504图 一致 例 生成气体反应 29 二 光谱鉴别法 1 紫外 可见光谱鉴别法对比吸收曲线一致性对比最大吸收波长和同时测定最小吸收波长的一致性规定一定浓度的供试品在最大吸收波长处的吸收度规定吸收波长和吸收系数法规定吸收波长和吸收度比值法经化学处理后 测定其反应产物的吸收光谱特性 30 光谱鉴别法 紫外光谱维生素 2 鉴别 1 取本品约1mg 加水100ml溶解后 溶液在透射光下显淡黄绿色并有强烈的黄绿色荧光 分成二份 一份中加无机酸或碱溶液 荧光即消失 另一份中加连二亚硫酸钠结晶少许 摇匀后 黄色即消褪 荧光亦消失 2 取含量测定项下的溶液 照分光光度法 附录 A 测定 在267nm 375nm 与444nm的波长处有最大吸收 375nm波长处的吸收度与267nm波长处的吸收度的比值应为0 31 0 33 444nm波长处的吸收度与267nm波长处的吸收度的比值应为0 36 0 39 31 2 丹参药材中丹参总酚酸的测定 标准曲线法对照品溶液的配制 取原儿茶醛对照品适量 精密称定 加水稀释配制成对照品溶液 样品的配制 分别称取1g丹参药材粉末至100ml锥形瓶中 精密加入75 甲醇溶液 超声1小时 滤过 经显色 紫外扫描 显色方法 取样品0 2ml于10ml量瓶中 加入0 5ml5 NaNO2后 摇匀后再加入0 5ml10 Al NO3 3 摇匀后再加入4ml4 NaOH溶液 用水补足至刻度 即进行紫外扫描 32 原儿茶醛对照品紫外扫描图 丹参药材样品紫外扫描图 不同浓度对照品紫外扫描图 33 2 光谱鉴别法 红外光谱对比供试品红外吸收光谱与药品标准红外光谱的一致性 尤其是指纹一致性 主要用于组分单一 结构明确的原料药 阿莫西林 鉴别 1 在含量测定项下记录的色谱图中 供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致 2 本品的红外光吸收图谱应与对照的光谱 光谱集441 一致 34 35 三 色谱法 1 薄层色谱法2 高效液相色谱法3 质谱法 36 1 薄层色谱法薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用 将试样点在色谱滤纸或层析板的一端 并将该端浸在作为流动相的溶剂 常称之为展开剂 中 随着溶剂向上的移动 经过试样点时 带动试样向上运动 37 硫酸阿米卡星 鉴别 1 取本品与阿米卡星标准品适量 分别加水制成每1ml中含10mg的溶液 照薄层色谱法 附录 B 试验 吸取上述两种溶液各10 l 分别点于同一硅胶 薄层板上 以氯仿 甲醇 浓氨溶液 水 1 4 2 1 为展开剂 展开后 晾干 喷以0 2 茚三酮的水饱和正丁醇溶液 在100 加热10分钟 供试品溶液与标准品溶液所显主斑点的颜色与位置应相同 38 2 高效液相色谱法 39 一 溶液的浓度 二 溶液的温度 三 溶液的酸碱度 四 试验时间 五 干扰成分的存在 四 鉴别试验条件 40 一 专属性 五 鉴别方法的验证 指其他成分存在的情况下 采用的鉴别方法能否正确地鉴别出被测物质的特性 一般可做阴性对照 空白试验 鉴别试验一般需2 3种不同类型的方法 41 一 耐用性 五 鉴别方法的验证 指测定条件发生小的变动时 测定结果受到的影响程度 如色谱柱的型号 流动相的比例 pH等适用范围尽可能广 42 鉴别试验的定义 鉴别试验的方法 化学 光谱 色谱 本章要点回顾 鉴别试验的条件 鉴别试验的项目 性状 一般鉴别 特殊鉴别 鉴别试验的验证 43 复习思考题