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文档简介
ABI7300使用方法-绝对定量1 打开电脑,待电脑完全打开后打开荧光定量机器,预热十分钟,期间布板子2 File-new 新建一个程序,进入界面做绝对定量时 ASSay 选择 Standard Curve(Absolote Quantitation)做相对定量时 选择 ddCt(Relative Quantitation)Plate做完相对定量时分析数据选择ddCt(Relative Quantitation)Study 其他不用改Plate Name 一栏给板子命名 点击“下一步” 不要点击“完成”3初次做时选择“New Detector”添加引物Name 一栏命名基因的名字 Reporter Dye 一栏选择FAM Quencher Dye一栏选择none Color一栏自己选颜色 其他内容不选选择Add 将命名的引物添加进去 以后做实验就可以直接添加了右上角的Passive Reference 选择 none (切记)点击“下一步”4 布板 样品选择UnKnown标准质粒选择 Standard点击完成4进入界面 点击Setup-Plate 双击样品加样孔 在弹出的界面里 对样品进行命名 其他不填 同理 双击标准质粒加样孔 Sample Name 对质粒命名 注意在Quantity一栏写上质粒的拷贝数 (切记)5 完成后点击Insteument步骤程序 第一步 95摄氏度 十分钟第二步 95摄氏度 5秒 65摄氏度 34秒 循环 40次 第三步 溶解曲线 修改Sample Volume 为20ul DateCollection 为Stage2,Step2(65 0:34)(荧光收集信号 切记要从循环那步开始,切记切记)6设好之后将程序保存 7 整完之后开始Start待出现运行时间后方可离开8 运行结束后 分析数据 点击Results 里的Standard Curve 看标准曲线 可以将不正常的样舍弃 打开Results里的 Plate 点击
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