免疫组化非特异性背景染色及其控制方法.doc_第1页
免疫组化非特异性背景染色及其控制方法.doc_第2页
免疫组化非特异性背景染色及其控制方法.doc_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

.免疫组化非特异性背景染色及其控制方法一、非特异性染色的识别常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处，坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性，均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。二、非特异性染色的原因1. Ig与Fc受体结合多见于冰冻切片（特别是淋巴造血组织，淋巴细胞，单核细胞，组织细胞表面多），主要是和二抗反应，因为一抗一般稀释度均较大，因此Fc受体的干扰基本不存在。由于福尔马林固定破坏了大部分的Fc受体，所以石蜡切片不多见。避免方法： 用以二抗相同种族的正常血清封闭切片； 用不含Fc段的抗体，但价格贵（V区，C1区不含Fc段，用Pepsin消化）2静电吸附抗体是一种带负电荷的球蛋白，容易和带正电荷的组织相结合，如胶原纤维。避免方法： 尽量稀释一抗 降低抗体的电荷，如用2.5%NaCl，0.05mTBS代替PBS； 用去垢剂 如triton-100处理切片。 Tween-20等；3.二抗与组织中的Ig结合如羊抗兔的二抗，二抗可以标本中（人）Ig发生交叉反应，科学上越接近的动物，交叉反应越明显，如人与猴，兔与豚鼠。避免方法：用与待测组织相同的5%的正常血清稀释二抗。如人血清。4组织中残存醛基与Ig的结合如醛类固定后未能彻底的冲洗，残流醛基可以和Ig结合。避免方法：彻底冲洗； 0.02%的新鲜的硼氧化钾液处理10分钟后冲洗；5内源性过氧化物酶红细胞，粒细胞的含量尤其高，镜下可以识别，不要将其当成阳性结果。避免方法： 石蜡切片 0.3%双氧水-甲醇溶液处理切片； 冰冻切片 3%双氧水处理切片5分钟（99：1）因为未经固定包埋，大部分酶未被破坏； 对于骨髓涂片最好用非过氧化物酶标记的抗体如碱性磷酸酶（AP）磷酸萘酯+水-萘酚+偶氮染料快兰(fast blue)或快红(fast red) 兰色 红色用明胶甘油封片，不能用含二甲苯的封片剂，溶于二甲苯。6. 内源性生物素以 24mg/ml的卵白素封片15分钟；7. 交叉反应PcAb敏感性高，但特异性稍低，容易出现非特异性染色。避免方法：尽可能稀释抗体；尽可能用McAb;三、 抗体最大稀释度的求法最大稀释度的目的：1.节约、2.特异性染色、非特异性染色（决定其最大稀释度）棋盘法如 稀释度1：5
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 作文作品

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论